本文關鍵詞：miR-9-3p與miR-146a-5p在2型糖尿病患者血漿中表達分析及功能研究

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【摘要】：糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)是由于體內(nèi)胰島素絕對不足或相對不足所引起的以糖、脂代謝紊亂為主要特征的內(nèi)分泌代謝性疾病,嚴重影響患者的生活質(zhì)量。隨著社會經(jīng)濟的快速發(fā)展,居民體力活動的下降和生活水平的不斷提高,糖尿病的患病率逐年升高。據(jù)2003年世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計,全球現(xiàn)有超過2億的糖尿病患者,到2025年預計這一數(shù)字將增長一倍。目前糖尿病分型包括1型糖尿病,2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus, T2DM),妊娠期糖尿病以及其他特殊類型的糖尿病,其中T2DM患者占糖尿病患者總數(shù)的90%-95%。目前研究認為T2DM是一種慢性低度炎癥反應(Chronic low-grade i nflammatory disease),大量研究顯示,T2DM患者血液中常伴有脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)、C反應蛋白(C-Reactive Protein, CRP)、腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α)、白介素-6 (Interleuk in-6, IL-6)等炎性因子水平升高。炎性因子及其效應分子共同產(chǎn)生的細胞毒作用,通過氧化應激反應,激活核因子-1:B (nuclear factor-KB, NF-κB)、蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)、絲裂原活化蛋白激酶(Mitoge n-Activated Protein Kinase)、抑制物激酶(Inhibitor of nuclear fa ctor Kappa-B Kinase, IKK)等炎性反應系統(tǒng),不僅損傷胰島細胞線粒體,加速胰島p細胞的凋亡,導致胰島素分泌不足,還可引起內(nèi)皮細胞結(jié)構和功能的異常,導致胰島素在組織細胞中轉(zhuǎn)運障礙從而促進胰島素抵抗的發(fā)生。流行病學研究認為,T2DM患者存在獨特的血脂情況：甘油三酯(Triglyceride, TG)與低密度脂蛋白膽固醇(Low-Density Lipoprotein Cholesterol, LDL-C)水平的升高、高密度脂蛋白膽固醇(High-Density Lipoprotein Cholesterol, HDL-C)水平的降低,研究認為,形成這種血脂狀態(tài)的主要原因是由于細胞膽固醇轉(zhuǎn)運受體功能異常。盡管T2DM患者常伴慢性低度炎癥反應與脂代謝的紊亂,但慢性炎癥反應對細胞膽固醇逆轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子的影響卻鮮有研究。小分子核糖核酸(nicroRNA, miRNA)是一類長度約為20-24個核苷駿長度的非編碼單鏈小RNA分子,通過堿基互補配對原則與靶向mRNA陽結(jié)合,形成沉默復合體(RNA-Induced Silencing Complex, RISC), RISC對其靶向基因發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后翻譯抑制作用。miRNA不僅存在于細胞內(nèi)也存于循環(huán)系統(tǒng)中,研究表明,同一個體在相同狀態(tài)下血漿miRNA表達譜大致相同,在疾病狀態(tài)下,miRNA會選擇性地從組織細胞釋放到外周血中發(fā)揮作用[7]或通過血液傳遞到受體細胞發(fā)揮作用,這就使得血漿中niRNA的表達水平發(fā)生變化,且血漿中miRNA的變化要早于蛋白類標記物,以上特點使血漿rniRNA具有成為一種全新疾病檢測標記物的潛能。人類miR-9-3p是miRNA家族成員之一,其基因定位于15號染色體,首次發(fā)現(xiàn)時被認為是一種腦源性miRNA,目前國外研究表明,miR-9-3p具有調(diào)節(jié)胰島素分泌、促進胰島素抵抗的作用,因此niR-9-3p在糖尿病領域的研究頗受重視。miR-146a-5p是第一個被發(fā)現(xiàn)具有免疫調(diào)節(jié)功能的niRNA,研究認為niR-146a-5p參與了慢性炎癥的病理過程,其基因位人第5號染色體,目前miR-146a-5p在慢性炎癥相關疾病中的研究頗受重視。現(xiàn)有文獻報道,新發(fā)T2DM患者血漿和外周血單個核細胞中檢測到miR-9-3p的水平顯著升高,T2DM患者外周血單個核細胞中miR-L46a-5p水平顯著低于正常對照組,目前國內(nèi)外對于單純T2DM患者血漿中miR-9-3p、miR-146a-5p表達水平變化的研究甚少,臨床上將miR-9 ·3p、miR-146a-5p血漿表達水平作為T2DM的新型診斷標記物尚缺乏充足的證據(jù)。目前關于miR-9-3p的功能性研究顯示：胰島p細胞內(nèi)niR-9-3p表達含量升高,能夠降低p細胞胰島素分泌的能力,能夠抑制沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Sirtuin Type 1,Sirt1)蛋白水平。目前研究認為,Sirt1基因?qū)τ谔岣呓M織胰島素敏感性、促進胰島素分泌和調(diào)節(jié)脂類代謝的平衡發(fā)揮重要作用。Ramachandran D的研究表明,在葡萄糖刺激的胰島素分泌過程中,胰島p細胞中rniR-9-3p表達水平會顯著升高,而Sirt1蛋白水平顯著減少,三體內(nèi)試驗證實Sirt1能夠正向促進胰島素分泌,降低組織胰島素抵抗水平。Plaisance V于2006年證實,當胰島p細胞內(nèi)miR-9-3 P過度表達時,miR-9-3p通過作用于轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Onecut 2來增加胰島細胞內(nèi)Granaphilin-a蛋白的分泌,而Granuphilin-a蛋白的作用就是降低胰島p細胞外分泌能力。目前國內(nèi)外關于miR-9-3p對HepG2細胞胰島素抵抗及脂類代謝調(diào)節(jié)相關因子Sirt1蛋白表達的影響未見報道。目前關于miR-146a-5p的功能研究認為,rniR-146a-5p可能是炎癥反應的關鍵調(diào)節(jié)因子,在炎癥修復、抑制炎癥反應階段發(fā)揮重要作用。研究表明：在LPS所誘導的細胞炎性反應中,miR-146a-5p通過抑制其靶基因白介素受體相關激酶-1(Interleukin receptor-associated kinase-1,IRAK-1)腫瘤壞死因子受體相關因子6(TNF receptor-associated factor, TRAF6)等蛋白的表達,減少下游炎癥因子的釋放。Taganov等研究顯示：LPS誘導單核細胞產(chǎn)生炎性反應,miR-146a-5p通過其3'非編碼區(qū)(3'Untranslated Regions,3'UTR)與炎性基因IRAK-1和TRAF6結(jié)合,通過下調(diào)IRAK-1信號途徑,抑制炎性因子TNF-α、IL-6的表達,發(fā)揮抑制炎癥反應的作用。Cie YF等應用LPS誘導人牙齦成纖維細胞產(chǎn)生炎癥反應,實驗發(fā)現(xiàn)niR-146a-5p具有抑制IRAK-1轉(zhuǎn)錄水平與蛋白水平的表達。目前關于HepG2細胞炎性反應狀態(tài)下,細胞炎癥反應相關因子IRAK-1、膽固醇代射相關因子ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白G1 (ATP-Binding Cassette Transporter G1, ABCG 1)與肝X受體α(Liver X Receptors alpha, LXRa)的蛋白表達水平尚未見文獻報道；關于HepG2細胞炎性反應狀態(tài)下,miR-146a-5p發(fā)揮的抑制炎癥反應,調(diào)節(jié)膽固醇代謝相關因子的作用尚未見報道。HepG2細胞,是一種表型與肝細胞極為相似的人肝癌細胞株,其表面表達高親和力的胰島素受體,并且保留了肝細胞的許多生物學特性,包括葡萄糖攝取、糖原合成酶的活性、脂類生成及RNA的合成等,目前常被用作胰島素抵抗模型的建立、肝臟能量代謝及膽固醇代謝相關因子研究的細胞模型,如Melin B于1990應用HepG2細胞成功建立肝細胞胰島素抵抗模型,Park H以及Kamble P分別以HepG2細胞為細胞模型,研究了藥物對于肝臟脂質(zhì)沉積的影響并成功檢測了肝細胞胰島素抵抗相關因子Sirt1的表達水平,Adlakha YK等應用HepG2細胞為模型,成功研究niRNA-128-2調(diào)節(jié)膽固醇逆轉(zhuǎn)運相關因子ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A1ATP-Binding Cassette Transporter Al, ABCA)、ABCG1表達的影響,本實驗選用HepG2細胞為細胞模型,進行miR-9-3p以及miR-146a-5p的相關功能學研究。LPS是革蘭氏陰性菌外膜的主要組成部分,是牙齦卟啉單胞菌Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide, P.g表面最主要的致病因子,P.gLPS具有很強的抗原性,研究報道P.gLPS能夠與血漿中LPS結(jié)合蛋白相結(jié)合,引起單核細胞、巨噬細胞等宿主細胞的一系列免疫反應。目前關于miR-9-3p對HepG2田胞Sirtl蛋白水平表達的靶向抑制作用未見報道,關于miR-146a-5p對P.gLPS刺激的HepG2細胞炎性反應狀態(tài)下,細胞炎癥反應相關因子IRAK-1蛋白表達水平、膽固醇代謝相關因子ABCG1與LXRα蛋白表達水平的影響尚未見文獻報道。本課題首先選取2012年1月至2013年6月我院內(nèi)分泌科收治住院的符合1999年WHO診斷標準的單純T2DM患者47例為T2DM組,同時選取年齡、性別等與之相匹配的體檢健康人員28例為健康對照組,以miR-423-5p為內(nèi)參,通過實時熒光定量PCR技術檢測miR-9-3p.miR-146a-5p在體檢建康人群,T2DM患者血漿中表達水平的變化,應用受試者工作特征曲線(Receiver Operating Characteristic curve,ROC)分析血漿miR-9-3p與miR-146a-5p對于2型糖尿病的診斷價值,本研究證實T2DM組血漿miR-9-3p的表達水平顯著高于健康對照組,T2DM組血漿rniR-146a-5p的表達水平顯著低于健康對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義,血漿miR-9-3p. niR-146a-5p有望成為T2DM診斷潛在分子標記物。第二部分,本課題以HepG2細胞為切入點,進一步通過體外細胞培養(yǎng)技術、轉(zhuǎn)染技術及蛋白印跡技術對miR-9-3p進行功能性研究。本實驗通過miR-9-3p mimics轉(zhuǎn)染技術研究miR-9-3p對HepG2細胞胰島素抵抗及膽固醇代謝相關蛋白Sirtl的靶向抑制作用,研究證實,在HepG2田胞中,miR-9-3p在轉(zhuǎn)錄水平上對Sirt1的表達無影響,miR-9-3p能夠顯著抑制Sirt1蛋白的表達,表明miR-9-3p通過轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)Sirt1基因表達,發(fā)揮促進細胞胰島素抵抗的作用。第三部分,本課題以HepG2細胞為切入點,從炎癥以及膽固醇代謝的角度,應用體外細胞培養(yǎng)技術、轉(zhuǎn)染技術和蛋白印跡技術以P.gLP S刺敷以及miR-146a-5p mimics轉(zhuǎn)染為干預手段,研究P.gLPS刺激、miR-1 16a-5p轉(zhuǎn)染以及miR-146a-5p轉(zhuǎn)染+P.gLPS刺激三種處理方法分別對HepG2細胞炎癥相關因子IRAK-1、膽固醇逆轉(zhuǎn)運相關因子ABCG1、膽固醇與炎癥調(diào)節(jié)相關因子LXRα蛋白水平的表達影響,研究證實,P.gLPS刺激能夠顯著升高HepG2田胞IRAK-1蛋白與ABCG1蛋白水平；轉(zhuǎn)染miR-146a-5p模擬物顯著下調(diào)HepG2田胞IRAK-1蛋白水平；轉(zhuǎn)染miR-146a-5p模擬物拮抗了P.gLPS刺激的HepG2田胞IRAK-1蛋白的上調(diào)；轉(zhuǎn)染niR-146a-5p模擬物拮抗了P.gLPS刺激的HepG2細胞ABCG1蛋白的上凋。通過本研究確定T2DM患者血漿miR-9-3p和miR-146a-5p表達水平；深入探討miR-9-3p促進細胞胰島素抵抗的作用；檢測慢性炎癥反應狀態(tài)HepG2細胞炎性因子以及膽固醇代謝調(diào)控因子的蛋白水平表達情況；以及miR-146a-5p發(fā)揮的抑制細胞炎癥、調(diào)節(jié)膽固醇代謝的作用,以期從細胞層面闡述miRNA對于胰島素抵抗、炎性反應、膽固醇逆轉(zhuǎn)運的調(diào)節(jié)作用。為闡明T2DM相關的細胞炎性反應、胰島素抵抗、脂代謝異常的病因?qū)W基礎和治療領域的探索提供新的思路。第一部分miR-9-3p與miR-146a-5p在2型糖尿病患者血漿中表達分析目的：確定miR-9-3p.miR-146a-5p在體檢健康人群、T2DM患者血漿中的表達變化。方法：本實驗選取2012年1月至2013年6月我院內(nèi)分泌科收治住院的單純T2DM患者47例其中男性27例,女性20例為T2DM組；我院體險中心的體檢健康人員28例其中男性14例,女性14例為對照組。所有研究對象禁食12小時,清晨空腹肘靜脈采血6 mL,分別置于EDTA抗凝采血管3mL,普通生化管3mL,普通生化管靜脈血用于測定空腹血糖(Fasting Plasma Glueose, FPG)、餐后2小時血糖(TWO hours Plasma Glueose,2hPG).血脂(TC、TG、LDL-C、HDL-C)等臨床指標。EDTA吭凝的采血管采用4℃、3000r/min離心20分鐘,分離血漿及血細胞分別置于1.5mL無酶EP管內(nèi),進一步將血漿EP管于4℃、12000g離心10min,輕輕吸取上層血漿置于1.5mL無酶EP管內(nèi),提取血漿總RNA,應用raqMan探針miRNA實時熒光定量PCR技術,以miR-423-5p為內(nèi)參檢測丙組血漿中miR-9-3p與miR-146a-5p含量的表達水平,進一步應用ROC曲線分析血漿miR-9-3p與miR-146a-5p對于T2DM的診斷價值,以期為T2DM的早期預防、早期診斷提供可靠的分子標記物。臨床計數(shù)資料使用n(%)表示,計量資料使用均數(shù)士標準差表示；丙組間數(shù)據(jù)比較計數(shù)資料采用卡方檢驗,計量數(shù)據(jù)兩組間比較采用t檢驗。實驗數(shù)據(jù)采用2-△CT法進行分析,應用均數(shù)士標準差或中位數(shù)(四分位間距)來表示,兩組數(shù)據(jù)比較采用非參數(shù)t檢驗。P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義,應用SPSS160統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進行分析,GraphPAD Prism 5.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行作圖。結(jié)果：1 研究人群基本特征本實驗共入選單純T2DM患者47名其中男性27名女性20名,健康體檢人員28名其中男性14名女性14名,兩組間平均年齡分別為54±10歲、55±7歲。基本特征：性別、年齡、BMI、吸煙、高血壓兩組間比較未見顯著性差異(P0.05)。實驗室檢查：TC、TG、LDL-C、HDL-C兩組間比較無顯著性差異(P0.05)；兩組間FPG、2hPG、HbA1C水平存在顯著性差異(P0.05)(Table1)2 血漿中miR-9-3p 與 miR-146a-5p表達水平2.1T2DM組血漿miR-9-3p的表達水平為0.033(0.004,0.209),對照組血漿niR-9-3p的表達水平為0.004(0.002,0.006)(Table2)。與對照組相比,T2DM組血漿niR-9-3p的表達水平顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.0005) (Fig.1)2.2T2DM組血漿miR-146a-5p的表達水平為0.016(0.003,0.153),對照組血漿miR-146a-5p的表達水平為0.823±0.478 (Table2)。與對照組相比,T2DM組血漿niR-146a-5p的表達水平顯著下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.0001) (Fig.2)。3 ROC曲線分析血漿miR-9-3p與miR-146a-5p對于T2DM的診斷價值3.1 以體檢健康人群為對照組,評價miR-9-3p對于T2DM的診斷價值,3.OC曲線分析顯示：AUC=0.742,介于0.7-0.9之間,說明niR-9-3p對于2型糖尿病精準診斷有一定準確性(95%CI,0.628-0.857, P=0.0005)(Fig.3)3.2 以體檢健康人群為對照組,評價miR-146a-5p對于T2DM的診斷價值,ROC曲線分析顯示：AUC=0.947在0.9以上,說明miR-146a-5p對于2型糖尿病精準診斷具有較高準確性(95%CI,0.901-0.993,P0.0001)(Fig.4)。小結(jié)：1 T2DM組血漿rniR-9-3p的表達水平與對照組相比顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義。2 T2DM組血漿rniR-146a-5p的表達水平與對照組相比顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義。3血漿rniR-9-3p與miR-146a-5p有望成為T2DM精準診斷潛在分子標記物,其真正的臨床意義有待于進一步研究。第二部分miR-9-3p對HepG2細胞Sirtl蛋白表達的影響目的：探討rniR-9-3p是否影響HepG2細胞Sirt1表達水平。方法：以HepG2田胞為體外細胞模型,HepG2細胞體外轉(zhuǎn)染rniR-9-3p nimics為轉(zhuǎn)染組；陰性對照組未轉(zhuǎn)染miR-9-3p mimics,其它培養(yǎng)條件與轉(zhuǎn)染組相同。應用轉(zhuǎn)染技術、實時熒光定量PCR法及蛋白印跡,從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平檢測miR-9-3p是否影響HepG2細胞Sirtl的表達。qRT-PCR數(shù)據(jù)采用2-△CT進行分析,兩個獨立樣本采用t檢驗或Mann-Whitney U檢驗,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義,應用SPSS160統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進行分析,GraphPAD Prism 5.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行作圖。結(jié)果：1 miR-9-3p 對 HepG2細胞Sirt1轉(zhuǎn)錄水平的影響通過實時定量PCR技術,檢測陰性對照組和miR-9-3p轉(zhuǎn)染組Sirt1基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達變化。結(jié)果表明,Sirt1基因mRNA水平在轉(zhuǎn)染組和陰性對照組無顯著性差異(P=0.30) (Fig.5),表明miR-9-3p在轉(zhuǎn)錄水平對Sirt1的表達沒有影響。2 miR-9-3p 對 HepG2田胞Sirtl蛋白水平的影響通過細胞轉(zhuǎn)染技術和Western blot技術,檢測miR-9-3p對HepG2田胞Sirt1基因蛋白水平的表達變化。Western blot結(jié)果顯示,miR-9-3p轉(zhuǎn)染組Sirt1蛋白水平顯著低于陰性對照組(Fig.6、Fig.7),差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.017),表明miR-9-3p在蛋白水平調(diào)節(jié)Sirtl的表達。小結(jié)：1在HepG2田胞中,miR-9-3p在轉(zhuǎn)錄水平上對Sirt1的表達無影響。2在HepG2細胞中,miR-9-3p能夠抑制Sirt1蛋白的表達,表明miR-9-3p通過轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)Sirt1基因表達。第三部分miR-146a-5p對P.gLPS刺激的HepG2田胞IRAK-1、ABCG1與LXRα蛋白表達的影響目的：探討miR-146a-5p是否影響P.gLPS刺激的HepG2細胞IRAK-1、 ABCG1 與LXRα蛋白水平的表達。方法：以HepG2田胞為體外細胞模型,應用體外細胞培養(yǎng)技術、轉(zhuǎn)染技術和蛋白印跡技術,分別以P.gLPS刺激、miR-146a-5p mimics轉(zhuǎn)染為干預手段,實驗分為四組：(1)HepG2細胞體外P.gLPS刺激為P.gLPS刺激組；(2)HepG2細胞體外轉(zhuǎn)染rniR-146a-5p mimics為miR-146a-5p轉(zhuǎn)染組；(3) HepG2田胞體外轉(zhuǎn)染rniR-146a-5p mimics后經(jīng)P.gLPS刺激為miR-146a-5p轉(zhuǎn)染+P.gLPS刺激組；(4)陰性對照組未經(jīng)P.gLPS刺激未轉(zhuǎn)染rniR-146a-5p mimics,其它培養(yǎng)條件與各組相同。本部分實驗從蛋白水平檢測P.gLPS刺激組、miR-146a-5p轉(zhuǎn)染組、miR-146a-5p轉(zhuǎn)染+P.gLPS束0激組、陰性對照組四組HepG2細胞炎癥相關蛋白IRAK-1、膽固醇逆轉(zhuǎn)運相關蛋白ABCG1、膽固醇與炎癥調(diào)節(jié)相關蛋白LXRa蛋白水平的表達變化。實驗數(shù)據(jù)兩個獨立樣本采用t檢驗或Mann-Whitney U檢驗,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義,SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計學分析,GraphPAD Prism 5.0軟件對實驗數(shù)據(jù)作圖。結(jié)果：1 P.gLPS對HepG2田胞IRAK-1蛋白水平的影響應用Western blot技術檢測P.gLPS刺激對HepG2田胞IRAK-1蛋白水平的變化情況。結(jié)果顯示,P.gLPS刺激組IRAK-1蛋白水平顯著高于陰性對照組(Fig.8、Fig.12、Fig.15),差異具有統(tǒng)計學意義(P＝0.026)證實P.gLVS在蛋白水平對IRAK-1進行調(diào)節(jié)。2 P.gLPS對HepG2細胞ABCG1蛋白水平的影響應用Western blot技術檢測P.gLPS刺激對HepG2田胞ABCG1在蛋白水平的變化情況。結(jié)果顯示,P.gLPS刺激組ABCG1蛋白水平顯著高于陰性對照組(Fig.9、Fig.13、Fig.16),差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.020)說明P.gLPS在蛋白水平對ABC G1進行調(diào)節(jié)。3 P.gLPS對HepG2細胞LXRa蛋白水平的影響通過Western blot技術檢測P.gLPS激對HepG2細胞LXRα上蛋日水平的變化情況。結(jié)果顯示,P.gLPS刺激組LXRα蛋白水平與陰性對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義(Fig.10、Fig.14) (P0.05)。4 miR-146a-5p對HepG2細胞IRAK-1蛋白水平的影響通過Western blot技術檢測rniR-146a-5p模擬物轉(zhuǎn)染對HepG2細胞IRAK-1在蛋白水平的變化情況。結(jié)果顯示,miR-146a-5p轉(zhuǎn)染組IRAK-1蛋白水平顯著低于陰性對照組(Fig.11、Fig.12、Fig.15),差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.028),說明miR-146a-5p在蛋白水平對IRAK-1進行調(diào)節(jié)。5miR-146a-5p對 HepG2細胞ABCG1蛋白水平的影響通過Western blot技術檢測niR-146a-5p模擬物轉(zhuǎn)染對HepG2細胞ABCG1在蛋白水平的變化情況。結(jié)果顯示,miR-146a-5p轉(zhuǎn)染組ABCG1蛋白水平與陰性對照組相比,差異不具有統(tǒng)計學意義(P0.05) (Fig.13、 Fig.16),說明miR-146-5p在蛋白水平對ABCG1未產(chǎn)生顯著影響。6miR-146a-5p對HepG2細胞LXRa蛋白水平的影響通過Western blot技術檢測niR-146a-5p模擬物轉(zhuǎn)染對HepG2田胞LXRa在蛋白水平的變化情況。結(jié)果顯示,niR-146a-5p轉(zhuǎn)染組LXRa蛋白水平與陰性對照組相比未見顯著性差異(P0.05) (Fig.14),說明miR-146-5p在蛋白水平對LXRa未產(chǎn)生顯著影響。7 miR-146a-5p對P.gLPS刺激的HepG2細胞IRAK-1蛋白水平的影響通過Western blot技術檢測rniR-146a-5p模擬物轉(zhuǎn)染對P.gLPS刺激的HepG2細胞IRAK-1在蛋白水平的變化情況。結(jié)果顯示,與單純P.gLPS刺激組相比miR-146a-5p轉(zhuǎn)染+P.gLPS刺激組能夠顯著下調(diào)HepG2細胞IRAK-1蛋白水平(Fig.12、Fig.15),差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.002)8 miR-146a-5p對P.gLPS刺激的HepG2細田胞ABCG1蛋白水平的影響通過Western blot技術檢測rniR-146a-5 P模擬物轉(zhuǎn)染對P.gLPS刺激的HepG2細胞ABCG1在蛋白水平的變化情況。結(jié)果顯示,與單純P.gLPS刺激組相比miR-146a-5p轉(zhuǎn)染+P.gLP S刺激組顯著下調(diào)HepG2田胞ABCG1蛋白水平(Fig.13、Fig.16),差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.008)9 miR-146a-5p對P.gLPS刺激的HepG2細胞LXRa蛋白水平的影響通過Western blot技術檢測rmiR-146a-5p模擬物轉(zhuǎn)染對P.gLPS刺激的HepG2細胞LXRa在蛋白水平的變化情況。結(jié)果顯示,miR-146a-5p轉(zhuǎn)染+P.gLPS刺激組HepG2細胞LXRa蛋白水平與單純P.gLPS刺激組相比,差異不具有統(tǒng)計學意義(Fig.14)(P0.05)小結(jié)：1 P.gLPS刺激能夠顯著升高HepG2細胞IRAK-1蛋白水平。2 P.gLPS刺激能夠顯著升高HepG2細胞ABCG1蛋白水平。3轉(zhuǎn)染miR-146a-5p模擬物顯著下調(diào)HepG2細胞IRAK-1蛋白水平。4轉(zhuǎn)染miR-146a-5p模擬物拮抗了P.gLPS刺激的HepG2細胞IRAK-1蛋白的上調(diào)。5轉(zhuǎn)染miR-146a-5 P模擬物拮抗了P.gLPS刺激的HepG2細胞ABCG1蛋白的上調(diào)。
【關鍵詞】：microRNA 2型糖尿病 HepG2細胞 Sirt1 P.gLPS IRAK-1 ABCG1 LXRα
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 中文摘要5-15
• 英文摘要15-24
• 英文縮寫24-27
• 引言27-29
• 第一部分 mi R93p與miR-146a-5p在2型糖尿病患者血漿中表達分析29-54
• 前言29-31
• 材料與方法31-35
• 結(jié)果35-37
• 附圖37-41
• 附表41-43
• 討論43-47
• 小結(jié)47
• 參考文獻47-54
• 第二部分 mi R93p對HepG2 細胞Sirt1 蛋白表達的影響54-75
• 前言54-55
• 材料與方法55-63
• 結(jié)果63-65
• 附圖65-67
• 討論67-70
• 小結(jié)70-71
• 參考文獻71-75
• 第三部分 miR-146a-5p對P.gLPS刺激的HepG2細胞IRAK-1、ABCG1與LXRα 蛋白表達的影響75-106
• 前言75-77
• 材料與方法77-84
• 結(jié)果84-86
• 附圖86-91
• 討論91-97
• 小結(jié)97
• 參考文獻97-106
• 結(jié)論106-107
• 綜述一 microRNA在2型糖尿病中的作用107-122
• 參考文獻115-122
• 綜述二 microRNA在高糖狀態(tài)下對心血管的作用122-138
• 參考文獻131-138
• 致謝138-139
• 個人簡歷139

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本文編號：1007588