本文關鍵詞：川陳皮素誘導腸動力平衡和緩解炎性腸病研究

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【摘要】：研究背景：炎性腸病是一種慢性的反復發(fā)作的腸道炎癥性疾��；臨床癥狀包括腹痛、腹瀉、便血,其中結腸炎患者有罹患結腸癌的危險,目前在醫(yī)學上尚無治愈炎性腸病的療法或是藥物。炎性腸病與腸道過度的炎性反應、腸上皮過高的通透性以及失衡的胃腸動力平衡密切相關。已知川陳皮素對肺炎和皮膚性炎癥有很好的緩解作用及具有抗癌和緩解消化不良等功效,但其對腸動力失衡及腸道炎癥的作用未見相關研究。實驗目的：1、考察川陳皮素對處于不同收縮狀態(tài)的大鼠空腸平滑肌收縮性的作用,揭示川陳皮素可以誘導腸動力平衡；2、考察評價川陳皮素對三硝基苯磺酸所致大鼠結腸炎的緩解作用；實驗方法：1、川陳皮素誘導腸動力平衡研究：(1)通過建立動物模型改變、向克氏液中加入激動劑／阻斷劑以及改變克氏液中離子濃度等三種方式建立六種不同高低收縮狀態(tài),在離體條件下考察川陳皮素對處于不同高低收縮狀態(tài)的大鼠離體空腸平滑肌收縮性的作用；(2)在體條件下考察川陳皮素對便秘型大鼠以及腹瀉型大鼠排便的作用(糞便數(shù)目和含水量)。采用蛋白印跡、實時定量PCR (RT-PCR)等方法考察大鼠小腸組織中肌球蛋白輕鏈磷酸化水平以及肌球蛋白輕鏈激酶的mRNA水平和蛋白含量；(3)分別考察鈣離子、膽堿能神經、膽堿能M受體、腎上腺素能神經、α腎上腺能受體、p腎上腺能受體、可釋放一氧化氮的神經元等是否參與川陳皮素誘導的腸動力平衡；2、川陳皮素緩解炎性腸病研究：(1)采用結腸單次灌注三硝基苯磺酸的乙醇溶液(120 mg/kg)建立炎性腸病的大鼠模型,考察川陳皮素對炎性腸病的緩解作用。(2)通過觀察大鼠體重、攝食量、組織形態(tài)學變化、腸道上皮間通透性等考察川陳皮素對炎性腸病的緩解作用。(3)采用ELISA方法研究大鼠結腸組織中腫瘤壞死因子a、白細胞介素1β、白細胞介素6、一氧化氮和前列腺素-2的變化；采用蛋白印跡方法考察結腸組織中claudin-2、肌球蛋白輕鏈激酶、核轉錄因子kappaB-p65亞基、信號通路蛋白PI3K/Akt、誘導性一氧化氮合酶、環(huán)氧合酶2的蛋白含量變化,采用RT-PCR方法檢測肌球蛋白輕鏈激酶的mRNA含量變化,結合細胞轉染技術等揭示川陳皮素緩解炎性腸病的機制。實驗結果：1、川陳皮素誘導胃腸動力平衡研究：(1)在較低劑量(1.25-5.0 μmol/L)時,川陳皮素對小腸平滑肌收縮性產生興奮作用,在較高劑量(10.0-40.0 μmol/L)時,川陳皮素對小腸平滑肌收縮性產生舒張作用。在2.5 μmol/L濃度時,川陳皮素可以興奮低收縮狀態(tài)下小腸平滑肌,而會舒張高收縮狀態(tài)下小腸平滑肌,也就是說可以對小腸平滑肌收縮性產生雙向調節(jié)作用,。(2)川陳皮素誘導的雙向調節(jié)作用可分別被維拉帕米、河豚毒素、阿托品、酚妥拉明、普萘洛爾或者左旋硝基精氨酸所阻斷,提示川陳皮素誘導的雙向調節(jié)作用是鈣依賴性的,是通過鈣依賴的肌球蛋白磷酸化實現(xiàn)的。所起的興奮作用通過興奮膽堿能神經、進而促進內源性乙酰膽堿的攝取、激活膽堿能M受體實現(xiàn)的,所起的抑制作用是通過興奮腎上腺素能神經、進而激活α腎上腺能受體、β腎上腺能受體、興奮包含一氧化氮神經元、促進一氧化氮的合成、促進一氧化氮舒張腸道平滑肌實現(xiàn)的。(3)在體研究中,川陳皮素可以顯著改善便秘型以及腹瀉型大鼠的排便習慣(糞便數(shù)目和含水量),顯著提高了便秘模型大鼠小腸組織中肌球蛋白磷酸化以及肌球蛋白輕鏈激酶的,mRNA水平和蛋白含量表達,而顯著抑制了腹瀉模型大鼠小腸組織中肌球蛋白磷酸化以及肌球蛋白輕鏈激酶的mRNA水平和蛋白含量表達。2、川陳皮素緩解炎性腸病研究：(1)川陳皮素可顯著降低炎性腸病模型大鼠的體重和攝食量；顯著緩解中性粒細胞浸潤以及腸道上皮過高的通透性；降低結腸粘膜損傷評分、結腸指數(shù)和髓過氧化物酶活性;(2)川陳皮素顯著降低了炎性腸病模型大鼠結腸組織中腫瘤壞死因子α、白細胞介素1p、白細胞介素6、一氧化氮和前列腺素-2以及核轉錄因子kappaB p65亞基的表達;川陳皮素顯著降低誘導型一氧化氮合酶以及環(huán)氧合酶-2的表達；川陳皮素顯著降低炎性腸病大鼠的腸通透性,降低結腸組織中claudin-2、肌球蛋白輕鏈激酶、PI3K、Akt的表達。細胞轉染的結果提示我們Akt通路和NF-κB通路參與了川陳皮素對受損屏障功能的保護作用。實驗討論：1、研究提示,川陳皮素通過對腸神經系統(tǒng)的調節(jié),對腸動力起到雙向調節(jié)作用,尤其是對于離體小腸平滑肌收縮性產生了雙向調節(jié)作用；在體研究中,川陳皮素對于便秘以及腹瀉模型大鼠中異常表達的肌球蛋白輕鏈激酶也可產生作用以至恢復正常表達。2、川陳皮素可以顯著緩解模型大鼠的結腸炎癥,其作用機制與降低促炎因子、炎性介質以及相關蛋白表達相關；3、川陳皮素可以顯著恢復受損的大鼠腸道上皮間通透性,其作用機制與抑制Akt-NF-κB-MLCK通路,保護粘膜屏障有關。創(chuàng)新點：1、本實驗首次揭示川陳皮素對大鼠空腸平滑肌的收縮性的雙向調節(jié)作用,該雙向調節(jié)作用是由平滑肌收縮狀態(tài)決定的,是鈣依賴性的,是由腸神經系統(tǒng)介導實現(xiàn)的；2、本研究首次揭示川陳皮素對三硝基苯磺酸所致大鼠結腸炎的緩解作用,其治療作用與抗炎、恢復受損的粘膜屏障和增加腸動力密切相關；本研究首次提出多靶點治療,即通過抗炎、保護粘膜屏障和誘導腸動力平衡來治療結腸炎。意義：1、川陳皮素對對高收縮狀態(tài)的平滑肌有舒張作用,對低收縮狀態(tài)的平滑肌有興奮作用也就是說對空腸平滑肌收縮性起到了雙向調節(jié)作用。這提示我們川陳皮素可以拮抗處于異常收縮狀態(tài)下的平滑肌,使之恢復平衡。2、川陳皮素可以顯著緩解三硝基苯磺酸所致的結腸炎,為臨床炎性腸病治療提供一定科學信息。
【關鍵詞】：川陳皮素 雙向調節(jié) 腸動力平衡 炎性腸病
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-15
• 第一部分 川陳皮素誘導腸動力平衡研究15-42
• 前言15-18
• 材料和方法18-27
• 1. 實驗材料18-23
• 2. 實驗方法23-27
• 實驗結果27-35
• 1. 川陳皮素對空腸平滑肌收縮性的作用27-28
• 2. 川陳皮素誘導的雙向調節(jié)作用與腸神經系統(tǒng)關系研究28-31
• 3. 川陳皮素誘導的雙向調節(jié)作用與鈣離子關系研究31-32
• 4. 川陳皮素對大鼠胃腸動力作用在體研究32-35
• 實驗討論35-37
• 參考文獻37-42
• 第二部分 川陳皮素緩解炎性腸病研究42-78
• 前言42-44
• 材料和方法44-56
• 1. 實驗材料44-52
• 2 實驗方法52-56
• 實驗結果56-68
• 1 川陳皮素可以緩解結腸炎模型大鼠的腸道炎癥56-57
• 2 川陳皮素可以減低中性粒細胞浸潤和炎性因子水平57-58
• 3 川陳皮素通過抑制Akt和NF-κB降低腸通透性58-60
• 4 川陳皮素提高細胞模型的跨膜電阻而降低菊粉透析60-61
• 5 川陳皮素可以抑制脂多糖細胞模型中Akt磷酸化水平61-62
• 6 在屏障破壞細胞模型中川陳皮素可以劑量依賴性的提高跨膜電阻和降低菊粉透析水平62-64
• 7 川陳皮素抑制細胞模型中肌球蛋白輕鏈激酶的表達64-65
• 8 川陳皮素劑量依賴性抑制細胞模型中NF-K B的蛋白表達65-66
• 9 川陳皮素對MLCK、TER和菊粉透析的作用是由NF-KB介導的66-68
• 實驗討論68-71
• 參考文獻71-78
• 綜述78-96
• 參考文獻87-96
• 攻讀學位期間發(fā)表論文情況96-98
• 致謝98

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本文編號：1009347