本文關(guān)鍵詞：生物堿類物質(zhì)檢測方法及毒性分析研究

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【摘要】：生物堿是一類含氮的堿性有機(jī)化合物,是許多中草藥的有效成分,具有廣泛的生理藥理活性,但其中部分生物堿毒性大,因臨床用藥過量、誤食、投毒等造成的劇毒生物堿中毒事件亦屢有發(fā)生。在中藥不良反應(yīng)事件中,由生物堿導(dǎo)致的中毒所占比重很大。然而,由于體內(nèi)代謝等原因?qū)е麦w液中生物堿含量低,檢測困難。目前對于毒物及藥物的毒性分析涵蓋了從宏觀到微觀的各個角度,涉及范圍從大體動物實驗到體內(nèi)小分子與藥、毒物之間的相互作用。斑馬魚作為一種新型動物模型其胚胎發(fā)育過程在母體外進(jìn)行,非常適用于胚胎發(fā)育毒性試驗及神經(jīng)生物學(xué)試驗。脫氧核糖核酸(DNA)攜帶和表達(dá)了重要的生命遺傳信息,主宰個體的生長、發(fā)育、遺傳變異等一系列生命現(xiàn)象,許多藥物、毒物小分子均可與DNA發(fā)生相互作用。小分子物質(zhì)與DNA之間的相互作用研究對于認(rèn)識某些疾病的致病機(jī)理和闡明毒物的致毒作用機(jī)制,以及探究DNA的功能和結(jié)構(gòu)方面都具有重要意義。研究結(jié)果表明許多生物堿可以和DNA之間發(fā)生相互作用造成DNA損傷,當(dāng)損傷不能正確、及時修復(fù)時可能導(dǎo)致基因的永久性改變,這是機(jī)體致癌、致畸、致突變的分子基礎(chǔ)。本文圍繞生物堿這一犯罪及臨床中毒案例常見毒物開展實驗。首先建立快速、靈敏的檢測方法,用于中毒案例生物檢材的分析,為毒物分析工作提供技術(shù)支持;其次,應(yīng)用斑馬魚胚胎為模型,研究相關(guān)生物堿的胚胎發(fā)育毒性及心臟毒性;最后,以DNA為體內(nèi)的靶目標(biāo),研究生物堿與DNA之間的相互作用,了解其作用方式、結(jié)合位點(diǎn)、結(jié)合力等信息,以期為生物堿類物質(zhì)中毒案例的相關(guān)法醫(yī)毒物分析工作提供一定的理論基礎(chǔ)。主要內(nèi)容如下:第一部分馬錢子類生物堿檢測方法的建立目的:分別應(yīng)用銀(Ⅲ)配合物-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系、在線固相萃取-高效液相色譜法兩種測定方法研究中藥馬錢中兩種主要生物堿馬錢子堿和士的寧的檢測新方法。方法:化學(xué)發(fā)光法:采用正交試驗設(shè)計優(yōu)化了影響Ag(Ⅲ)配合物-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系信號強(qiáng)度的四個主要因素,分別建立了測定藥物及生物樣品中馬錢堿和士的寧的方法。高效液相色譜法:分別優(yōu)化了在線固相萃取和分離條件,實現(xiàn)了生物樣品中馬錢子堿和士的寧的同時測定。結(jié)果:結(jié)果發(fā)現(xiàn),應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法測定兩種生物堿時,發(fā)光信號相對強(qiáng)度在5.0×10-7 M~1.0×10-4 M(鹽酸士的寧)和5.0×10-8 M~1×10-6 M(馬錢子堿)范圍內(nèi)與其濃度呈良好的線性關(guān)系。在線固相萃取-高效液相色譜法測定線性范圍為2.9×10-5 M~2.9×10-3 M(鹽酸士的寧)和1.2×10-5M~2.5×10-3 M(馬錢子堿)。結(jié)論:此兩種檢驗方法快速、靈敏,可用于實際樣品的測定,結(jié)果滿意。第二部分生物堿類物質(zhì)的細(xì)胞毒性及其與DNA之間的相互作用研究目的:分別研究了馬錢子堿、士的寧、烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿的生物學(xué)性質(zhì),包括體外細(xì)胞毒性試驗和DNA加合實驗。方法:采用MTT法研究了5種生物堿的細(xì)胞毒性,分別利用紫外-可見吸收光譜、熒光光譜和DNA溶解實驗探討了生物堿與DNA之間的作用方式。結(jié)果:馬錢子堿、士的寧對非洲綠猴腎細(xì)胞具有一定毒性;三種烏頭類生物堿可抑制大鼠心肌細(xì)胞的正常生長。5種生物堿均可以嵌插及靜電方式與DNA發(fā)生結(jié)合。結(jié)論:5種生物堿均具有細(xì)胞毒性且在體外模擬條件下可與DNA發(fā)生結(jié)合。第三部分以斑馬魚胚胎為模型研究川烏藥酒的毒性效應(yīng)及作用機(jī)制目的:研究川烏藥酒的毒性及其作用機(jī)制。方法:藥酒染毒斑馬魚胚胎后,鏡下觀察其形態(tài)學(xué)變化,利用吖啶橙(AO)染色法、觀察基因表達(dá)量的變化進(jìn)行毒性機(jī)制研究。結(jié)果:川烏藥酒可對斑馬魚胚胎產(chǎn)生明顯的發(fā)育毒性及心臟毒性作用,藥酒作用于斑馬魚后鏡下觀察到形態(tài)學(xué)的各種改變,出現(xiàn)心率的加快和心率不齊,且藥酒可誘導(dǎo)斑馬魚細(xì)胞出現(xiàn)凋亡,川烏導(dǎo)致的心臟毒性作用與BMP4、NKX2.5和TBX5表達(dá)量的變化有關(guān)。結(jié)論:川烏藥酒對斑馬魚胚胎具有發(fā)育毒性及心臟毒性作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：D919

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳丹丹;牛凌梅;屈晶;連靠奇;石紅梅;康維鈞;徐秀娟;;銀(Ⅲ)配合物-魯米諾體系流動注射法測定醋酸潑尼松[J];理化檢驗(化學(xué)分冊);2015年05期

2 程彪平;李來生;周仁丹;李良;張宏福;;兩種β-環(huán)糊精單臂鍵合固定相液相色譜法拆分三唑類手性農(nóng)藥[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報;2015年05期

3 LI Yu;QI Xu;YANG Yu-Wei;PAN Yang;BIAN Hui-Min;;Toxic effects of strychnine and strychnine N-oxide on zebrafish embryos[J];Chinese Journal of Natural Medicines;2014年10期

4 陳榮昌;孫桂波;張強(qiáng);葉祖光;孫曉波;;附子毒性研究進(jìn)展[J];中國中藥雜志;2013年08期

5 劉本璽;楊本雷;龍春林;許嘉鵬;余惠祥;董廣平;;《外臺秘要方》與《太平圣惠方》中澡豆諸方的文獻(xiàn)計量學(xué)分析[J];中華中醫(yī)藥雜志;2013年04期

6 溫瑞卿;李東輝;趙昕;王伽伯;趙艷玲;張萍;孫志勇;鄢丹;肖小河;任玉珍;李飛;杜杰;周海燕;;基于化學(xué)分析的毒性中藥附子炮制方法的合理性研究[J];藥學(xué)學(xué)報;2013年02期

7 李新剛;趙志剛;;群體藥代動力學(xué)研究進(jìn)展[J];中國臨床藥理學(xué)雜志;2013年01期

8 朱定波;馬強(qiáng);燕廷;滕久委;唐書澤;;魯米諾-鐵氰化鉀流動注射化學(xué)發(fā)光體系測定飲用水中ɑ-茄堿[J];食品工業(yè)科技;2012年22期

9 周思思;馬增春;梁乾德;王宇光;譚洪玲;肖成榮;張伯禮;高月;;基于UPLC/Q-TOF-MS分析附子煎煮過程中化學(xué)成分的變化[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報;2012年08期

10 錢偉;汪明志;張詠梅;;RP-HPLC測定腰痛合劑中次烏頭堿和烏頭堿的含量[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2012年08期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉磊;生物樣品自動化在線固相萃取—高效液相色譜分析方法學(xué)研究[D];南開大學(xué);2013年

2 張利軍;斑馬魚心臟毒性評價模型的建立及美托洛爾心臟毒性作用機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2012年

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本文編號：1286936