毛蚶群體遺傳學(xué)研究
本文關(guān)鍵詞:毛蚶群體遺傳學(xué)研究
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【摘要】:毛蚶(Scapharca kagoshimensis)是廣泛分布在西北太平洋近海的埋棲型貝類,具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值,一直是我國(guó)傳統(tǒng)的漁業(yè)捕撈對(duì)象。由于在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi),我國(guó)毛蚶的資源量相對(duì)比較豐富,對(duì)于毛蚶群體遺傳學(xué)方面的研究遲遲沒有得到關(guān)注。但隨著中國(guó)近年來經(jīng)濟(jì)的發(fā)展以及城市現(xiàn)代化的推進(jìn),沿岸生態(tài)系統(tǒng)以及淺海貝類的棲息環(huán)境均受到了較大的挑戰(zhàn),保護(hù)漁業(yè)對(duì)象的自然資源,已經(jīng)成為了一個(gè)較為緊迫的議題。毛蚶的人工育苗和養(yǎng)殖生產(chǎn)在我國(guó)已經(jīng)開展了一段時(shí)間,人工繁育群體的遺傳多樣性是否降低也逐漸成為一個(gè)備受關(guān)注的問題。此外,為了更好的在育苗生成過程中做到有的放矢,借助分子生物學(xué)的技術(shù)手段,研究苗種繁育過程中有效繁殖群體的大小,親代和子代之間遺傳多樣性的變化以及近交系數(shù),對(duì)于今后健康苗種培育,推動(dòng)毛蚶養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)具有重要的指導(dǎo)意義。為此,本研究開展了如下幾方面的工作:1.毛蚶微衛(wèi)星標(biāo)記開發(fā)及其在家系分析中的應(yīng)用首先,利用磁珠富集法,構(gòu)建微衛(wèi)星富集文庫,從中挑選了196個(gè)克隆用于測(cè)序,得到41個(gè)具備多態(tài)性的微衛(wèi)星位點(diǎn)。根據(jù)位點(diǎn)等位基因的范圍,引物的退火溫度以及反應(yīng)條件等要素,從41個(gè)位點(diǎn)中篩選出20個(gè),成功開發(fā)出7組微衛(wèi)星多元PCR體系。利用TP-M13-SSR技術(shù),對(duì)這些標(biāo)記進(jìn)行群體分析,結(jié)果顯示位點(diǎn)的等位基因范圍為5-26,位點(diǎn)的平均等位基因數(shù)為15.2。期望雜合度和觀測(cè)雜合度的范圍分別為0.733-0.960和0.563-0.886。經(jīng)過序列化的Bonferroni校正后,共有兩個(gè)位點(diǎn)偏離哈迪-溫伯格平衡,所有位點(diǎn)中均未檢測(cè)出連鎖不平衡。2.毛蚶地理群體遺傳學(xué)研究使用線粒體COI序列標(biāo)記,檢測(cè)了我國(guó)近海海域12個(gè)毛蚶地理群體的群體遺傳結(jié)構(gòu)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)以長(zhǎng)江口為界毛蚶地理群體存在兩個(gè)進(jìn)化顯著單元(ESU),這兩個(gè)ESU之間具有顯著的遺傳差異,每一個(gè)ESU又可被進(jìn)一步分為兩個(gè)次單倍型群。兩兩配對(duì)ΦST及IBDW分析結(jié)果顯示,毛蚶地理群體呈現(xiàn)大而顯著的群體遺傳結(jié)構(gòu)模式,并存在顯著的距離遺傳模式。這些證據(jù)表明,目前我國(guó)沿海毛蚶自然種群的遺傳格局,主要是歷史因素造成的,各個(gè)譜系之間已經(jīng)形成了較為深刻的遺傳分化。長(zhǎng)江河口的淡水流入,可能是阻斷毛蚶自然種群之間的基因流并長(zhǎng)久維持這種歷史格局的的主要因素。3.毛蚶養(yǎng)殖和野生群體遺傳多樣性比較研究使用10個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記,選擇毛蚶的5個(gè)養(yǎng)殖群體以及2個(gè)野生群體的開展了相關(guān)的研究。研究結(jié)果表明,同野生群體相比,養(yǎng)殖群體并沒有出現(xiàn)顯著的遺傳多樣性水平的下降。FST檢驗(yàn)結(jié)果以及遺傳距離(Dc)計(jì)算結(jié)果,均顯示養(yǎng)殖群體和野生群體之間存在較為顯著的遺傳分化,在養(yǎng)殖群體內(nèi)部不同地域的群體,在遺傳結(jié)構(gòu)上也出現(xiàn)了顯著的分化。這些研究結(jié)果表明,采用大數(shù)目的親本繁殖規(guī)?赡苁鞘沟妹鲤B(yǎng)殖群體遺傳多樣性得以維系的主要原因之一。4.毛蚶養(yǎng)殖群體有效繁殖群體的研究使用8個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)一個(gè)8雄7雌的毛蚶混交家系進(jìn)行分析,比較了親本和子代的遺傳多樣性變化,以此來推斷毛蚶的有效繁殖群體大小。研究結(jié)果顯示,親本和子代的實(shí)際鑒定以及模擬分析的結(jié)果一致。使用8個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記可以獲得95%以上的家系鑒定成功率。觀測(cè)雜合度在親代和子代之間差異不顯著,期望雜合度在子代中顯著降低,這可能是由于親本對(duì)于子代的繁殖成功貢獻(xiàn)率不同所導(dǎo)致的。群體的近交率估算為,有效繁殖群體數(shù)目為10.69,近交率為1.4%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,考慮到親本繁殖貢獻(xiàn)率的差異,在育苗生產(chǎn)中應(yīng)該選用足夠數(shù)目的親本,以防止子代期望雜合度的降低。
【關(guān)鍵詞】:毛蚶 群體遺傳 遺傳結(jié)構(gòu) 微衛(wèi)星標(biāo)記 線粒體DNA
【學(xué)位授予單位】:中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:S917.4
【目錄】:
- 摘要5-7
- Abstract7-15
- 第一章 文獻(xiàn)綜述15-41
- 第一節(jié) 群體和群體遺傳研究15-20
- 1. 群體(Population)15-16
- 2. 群體遺傳的研究簡(jiǎn)史16-18
- 3. 群體遺傳研究的一些概念18-20
- 第二節(jié) 遺傳差異及遺傳結(jié)構(gòu)模式20-27
- 1. 遺傳結(jié)構(gòu)的提出20-21
- 2. 群體遺傳結(jié)構(gòu)研究的方法21-22
- 3. 遺傳結(jié)果形成的動(dòng)力22-23
- 4. 影響生物遺傳結(jié)構(gòu)的因素23-26
- 4.1. 物理因素23-24
- 4.2. 歷史因素24
- 4.3. 地理距離24-25
- 4.4. 生物的行為25
- 4.5. 小結(jié)25-26
- 5. 遺傳結(jié)構(gòu)研究的目的與意義26-27
- 第三節(jié) 群體遺傳學(xué)研究方法概述27-34
- 1. 遺傳標(biāo)記概述27-28
- 2. DNA分子標(biāo)記28-33
- 2.1. 線粒體DNA(Mitochondrion DNA)28-29
- 2.2. AFLPs標(biāo)記29
- 2.3. 微衛(wèi)星標(biāo)記(Microsatellites)29-31
- 2.4. SNP標(biāo)記31-32
- 2.5. 小結(jié)32-33
- 3. 微衛(wèi)星多元PCR技術(shù)在群體遺傳研究中的應(yīng)用33-34
- 第四節(jié) 有效群體大小在群體遺傳研究中的意義34-36
- 1. 有效群體大小的概念34
- 2. 估算有效繁殖群體的常用方法34-36
- 第五節(jié) 毛蚶研究文獻(xiàn)綜述36-41
- 1. 毛蚶的分類地位及形態(tài)特征36
- 1.1.分類地位36
- 1.2.形態(tài)特征36
- 2. 毛蚶的地理分布及生態(tài)習(xí)性36-37
- 2.1. 地理分布36-37
- 2.2. 生態(tài)習(xí)性37
- 2.3. 繁殖習(xí)性37
- 3. 國(guó)內(nèi)外的研究現(xiàn)狀37-39
- 4. 本研究的目的和意義39-41
- 第二章 毛蚶微衛(wèi)星標(biāo)記開發(fā)及微衛(wèi)星多元PCR技術(shù)體系的應(yīng)用41-73
- 第一節(jié) 毛蚶基因組微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)及微衛(wèi)星多元PCR技術(shù)體系的構(gòu)建41-50
- 0. 引言41
- 1. 材料與方法41-47
- 1.1. 樣品采集41
- 1.2. 基因組DNA提取41-44
- 1.3. 微衛(wèi)星富集文庫構(gòu)建44-47
- 1.4. TA克隆及微衛(wèi)星序列篩選47
- 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-50
- 2.1. DNA酶切及膠回收目的片段檢測(cè)48
- 2.2. 陽性克隆的篩選與鑒定48-49
- 2.3. 微衛(wèi)星位點(diǎn)的篩選49-50
- 第二節(jié) 毛蚶微衛(wèi)星多元PCR體系構(gòu)建50-60
- 0. 引言50-51
- 1. 材料方法51-55
- 1.1. 樣品的采集及DNA提取51
- 1.2. PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)程序51-52
- 1.3. 聚丙烯凝膠酰胺電泳檢測(cè)52-54
- 1.4. 微衛(wèi)星標(biāo)記的篩選及多元PCR組合配對(duì)54
- 1.5. 標(biāo)記加尾54-55
- 1.6. 數(shù)據(jù)分析55
- 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果55
- 3. 討論55-60
- 第三節(jié) 毛蚶微衛(wèi)星多元PCR體系在家系分析中的應(yīng)用60-73
- 0. 引言60-61
- 1. 材料方法61-62
- 1.1. 家系構(gòu)建與樣品收集61
- 1.2. 親本DNA提取61
- 1.3. 幼蟲DNA提取61-62
- 1.4. 微衛(wèi)星分析62
- 1.5. 數(shù)據(jù)處理62
- 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果62-73
- 2.1. 多重PCR中微衛(wèi)星標(biāo)記的特征62-63
- 2.2. 多元PCR中微衛(wèi)星標(biāo)記的遺傳分離模式63-71
- 2.3. 多元PCR家系鑒定成功率71
- 2.4. 討論71-73
- 第三章 毛蚶野生群體遺傳結(jié)構(gòu)分析73-83
- 0. 引言73
- 1. 材料方法73-74
- 1.1. 樣品采集及DNA提取73-74
- 2. 實(shí)驗(yàn)方法74-75
- 2.1. 線粒體COI分析74-75
- 2.2. 微衛(wèi)星分析75
- 3. 數(shù)據(jù)分析75-76
- 4. 結(jié)果76-82
- 4.1. 序列多樣性分析76-77
- 4.2. 系統(tǒng)發(fā)生分析77-79
- 4.3. 群體遺傳結(jié)構(gòu)分析79-82
- 5. 討論82-83
- 5.1. 毛蚶種內(nèi)的兩個(gè)進(jìn)化顯著性單元82-83
- 第四章 毛蚶養(yǎng)殖和野生群體遺傳多樣性比較83-95
- 0. 引言83
- 1. 材料方法83-86
- 1.1. 樣品采集及DNA提取83-84
- 1.2. 微衛(wèi)星分析84-86
- 1.3. 數(shù)據(jù)分析86
- 2. 結(jié)果86-92
- 2.1. 遺傳多樣性86-89
- 2.2. 遺傳分化89-92
- 3. 討論92-95
- 第五章 毛蚶有效繁殖群體數(shù)量研究95-103
- 0. 引言95
- 1. 材料方法95-98
- 1.1. 實(shí)驗(yàn)材料構(gòu)建及DNA提取95-96
- 1.2. 微衛(wèi)星分析96-97
- 1.3. 數(shù)據(jù)分析97-98
- 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果98-101
- 2.1. 家系鑒定成功率98-99
- 2.2. 親本繁殖成功比較和有效繁殖群體的估算99-101
- 3. 討論101-103
- 致謝103-105
- 個(gè)人簡(jiǎn)歷105-107
- 在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文107-109
- 參考文獻(xiàn)109-119
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,本文編號(hào):597943
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