精子發(fā)生是一個有著嚴格時空特異性調(diào)控的生物學過程。該過程主要分為三個時期,有絲分裂期(精原細胞增殖和分化)、減數(shù)分裂期(精母細胞染色體減半)和精子形成期(精細胞變形)。從原始生殖細胞分化為成熟的精子,主要受到下丘腦-垂體-睪丸軸分泌的激素及生長因子的調(diào)控,與此同時,松果腺對雄性動物的生殖也起著重要的調(diào)控作用。褪黑素的分泌主要來自松果體細胞,通過特異性膜受體和非受體介導,影響神經(jīng)激素以及睪酮的分泌,從而參與了睪丸的發(fā)育調(diào)控。mi RNAs是一類非編碼小RNA,通過與非編碼區(qū)(以3’UTR為主)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平及翻譯水平實現(xiàn)對基因表達的調(diào)控。一系列的條件性敲除試驗證實,mi RNAs對睪丸功能以及精子發(fā)生起著重要的調(diào)控作用。高通量測序結(jié)果也表明,不同發(fā)育階段的生殖細胞以及初情期前不同階段的睪丸中,mi RNAs的表達圖譜呈現(xiàn)出顯著差異。因此,mi RNAs被認為參與了生殖細胞和睪丸的發(fā)育調(diào)控。本課題組前期的研究結(jié)果表明,褪黑素改變了小鼠睪丸中mi RNAs的表達圖譜,mi RNAs生成過程中相關(guān)基因的表達顯著上調(diào)。但褪黑素是否通過調(diào)控mi RNAs參與了精子發(fā)生及其相關(guān)作用機制,目前仍沒...

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
前言
第一篇 文獻綜述
    第1章 褪黑素及其生理學功能研究進展
        1.1 褪黑素的生物合成及其受體
            1.1.1 褪黑素的生物合成
            1.1.2 褪黑素的受體
        1.2 褪黑素與生殖調(diào)控
            1.2.1 褪黑素與雄性生殖
            1.2.2 褪黑素與雌性生殖
        1.3 褪黑素的其他生物學功能
            1.3.1 褪黑素在延緩衰老、抗氧化方面發(fā)揮的作用
            1.3.2 褪黑素在抗腫瘤方面發(fā)揮的作用
            1.3.3 褪黑素在免疫調(diào)節(jié)方面發(fā)揮的作用
            1.3.4 褪黑素在緩解糖尿病癥狀方面發(fā)揮的作用
    第2章 MicroRNA的生成、作用機制及其在哺乳動物生殖中的生物學功能研究進展
        2.1 miRNA簡介
        2.2 miRNA的生成和靶向作用機制
        2.3 miRNA在睪丸中的作用
            2.3.1 睪丸中miRNA表達譜
            2.3.2 miRNA和精原干細胞自我更新
            2.3.3 miRNA和精子發(fā)生
            2.3.4 支持細胞中miRNA的作用
        2.4 miRNA在卵巢中的作用
            2.4.1 miRNA在卵母細胞中的作用
            2.4.2 miRNA在顆粒細胞中的作用
    第3章 金屬硫蛋白及其生物學功能研究進展
        3.1 MT特性
        3.2 MT的生物學功能
            3.2.1 MT在機體抗氧化方面發(fā)揮的作用
            3.2.2 MT在調(diào)控金屬離子穩(wěn)態(tài)及修復氧化損傷方面發(fā)揮的作用
            3.2.3 MT在促進維生素吸收方面發(fā)揮的作用
            3.2.4 MT在生殖方面發(fā)揮的作用
第二篇 研究內(nèi)容
    第1章 褪黑素通過改變GC-1spg細胞中miRNAs表達圖譜促進細胞增殖
        1.1 材料
            1.1.1 試驗材料
            1.1.2 主要儀器設備
            1.1.3 主要試劑
        1.2 方法
            1.2.1 細胞培養(yǎng)
            1.2.2 細胞活力檢測
            1.2.3 Trizol法提取細胞總RNA
            1.2.4 總RNA純化
            1.2.5 microRNA測序
            1.2.6 qRT-PCR對測序結(jié)果的驗證
            1.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        1.3 結(jié)果
            1.3.1 褪黑素提高了GC-1spg細胞活力
            1.3.2 miRNAs文氏圖
            1.3.3 差異表達miRNAs靶基因預測
            1.3.4 差異表達miRNAs靶基因GO功能富集分析
            1.3.5 差異表達miRNAsKEGG通路分析
            1.3.6 差異表達miRNAsqRT-PCR驗證
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 褪黑素通過改變mRNAs表達圖譜促進GC-1spg的增殖
        2.1 材料
            2.1.1 試驗材料
            2.1.2 主要儀器設備
            2.1.3 主要試劑
        2.2 方法
            2.2.1 mRNA測序建庫實驗流程
            2.2.2 cDNA合成(熒光定量用)
            2.2.3 引物設計與合成
            2.2.4 熒光定量PCR
            2.2.5 細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.6 熒光素酶報告基因活性檢測
            2.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 差異表達基因
            2.3.2 差異表達基因GO功能富集分析
            2.3.3 差異表達基因KEGG富集分析
            2.3.4 差異表達基因qRT-PCR驗證
            2.3.5 miR-223與Mt2之間的靶標關(guān)系
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 miR-223/Mt2介導的調(diào)控通路對GC-1spg增殖和凋亡的影響
        3.1 材料
            3.1.1 試驗材料
            3.1.2 主要儀器設備
            3.1.3 主要試劑
            3.1.4 主要試劑配制
        3.2 方法
            3.2.1 GC-1spg細胞轉(zhuǎn)染
            3.2.2 細胞周期檢測
            3.2.3 細胞凋亡檢測
            3.2.4 線粒體膜電位檢測
            3.2.5 引物設計與合成
            3.2.6 熒光定量PCR
            3.2.7 Westernblot相關(guān)
            3.2.8 過表達載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及細菌擴大培養(yǎng)
            3.2.9 過表達載體質(zhì)粒提取
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 Mt2對GC-1spg細胞增殖和凋亡的影響
            3.3.2 miR-223對GC-1spg細胞增殖和凋亡的影響
            3.3.3 褪黑素激活ERK1/2信號通路提高了Mt2的表達,促進GC-1spg增殖
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
導師簡介
作者簡介
攻讀博士期間取得的科研成果
致謝



本文編號：3810397