精子發(fā)生是一個(gè)有著嚴(yán)格時(shí)空特異性調(diào)控的生物學(xué)過(guò)程。該過(guò)程主要分為三個(gè)時(shí)期,有絲分裂期(精原細(xì)胞增殖和分化)、減數(shù)分裂期(精母細(xì)胞染色體減半)和精子形成期(精細(xì)胞變形)。從原始生殖細(xì)胞分化為成熟的精子,主要受到下丘腦-垂體-睪丸軸分泌的激素及生長(zhǎng)因子的調(diào)控,與此同時(shí),松果腺對(duì)雄性動(dòng)物的生殖也起著重要的調(diào)控作用。褪黑素的分泌主要來(lái)自松果體細(xì)胞,通過(guò)特異性膜受體和非受體介導(dǎo),影響神經(jīng)激素以及睪酮的分泌,從而參與了睪丸的發(fā)育調(diào)控。mi RNAs是一類非編碼小RNA,通過(guò)與非編碼區(qū)(以3’UTR為主)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平及翻譯水平實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。一系列的條件性敲除試驗(yàn)證實(shí),mi RNAs對(duì)睪丸功能以及精子發(fā)生起著重要的調(diào)控作用。高通量測(cè)序結(jié)果也表明,不同發(fā)育階段的生殖細(xì)胞以及初情期前不同階段的睪丸中,mi RNAs的表達(dá)圖譜呈現(xiàn)出顯著差異。因此,mi RNAs被認(rèn)為參與了生殖細(xì)胞和睪丸的發(fā)育調(diào)控。本課題組前期的研究結(jié)果表明,褪黑素改變了小鼠睪丸中mi RNAs的表達(dá)圖譜,mi RNAs生成過(guò)程中相關(guān)基因的表達(dá)顯著上調(diào)。但褪黑素是否通過(guò)調(diào)控mi RNAs參與了精子發(fā)生及其相關(guān)作用機(jī)制,目前仍沒...

【文章頁(yè)數(shù)】：120 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第1章 褪黑素及其生理學(xué)功能研究進(jìn)展
        1.1 褪黑素的生物合成及其受體
            1.1.1 褪黑素的生物合成
            1.1.2 褪黑素的受體
        1.2 褪黑素與生殖調(diào)控
            1.2.1 褪黑素與雄性生殖
            1.2.2 褪黑素與雌性生殖
        1.3 褪黑素的其他生物學(xué)功能
            1.3.1 褪黑素在延緩衰老、抗氧化方面發(fā)揮的作用
            1.3.2 褪黑素在抗腫瘤方面發(fā)揮的作用
            1.3.3 褪黑素在免疫調(diào)節(jié)方面發(fā)揮的作用
            1.3.4 褪黑素在緩解糖尿病癥狀方面發(fā)揮的作用
    第2章 MicroRNA的生成、作用機(jī)制及其在哺乳動(dòng)物生殖中的生物學(xué)功能研究進(jìn)展
        2.1 miRNA簡(jiǎn)介
        2.2 miRNA的生成和靶向作用機(jī)制
        2.3 miRNA在睪丸中的作用
            2.3.1 睪丸中miRNA表達(dá)譜
            2.3.2 miRNA和精原干細(xì)胞自我更新
            2.3.3 miRNA和精子發(fā)生
            2.3.4 支持細(xì)胞中miRNA的作用
        2.4 miRNA在卵巢中的作用
            2.4.1 miRNA在卵母細(xì)胞中的作用
            2.4.2 miRNA在顆粒細(xì)胞中的作用
    第3章 金屬硫蛋白及其生物學(xué)功能研究進(jìn)展
        3.1 MT特性
        3.2 MT的生物學(xué)功能
            3.2.1 MT在機(jī)體抗氧化方面發(fā)揮的作用
            3.2.2 MT在調(diào)控金屬離子穩(wěn)態(tài)及修復(fù)氧化損傷方面發(fā)揮的作用
            3.2.3 MT在促進(jìn)維生素吸收方面發(fā)揮的作用
            3.2.4 MT在生殖方面發(fā)揮的作用
第二篇 研究?jī)?nèi)容
    第1章 褪黑素通過(guò)改變GC-1spg細(xì)胞中miRNAs表達(dá)圖譜促進(jìn)細(xì)胞增殖
        1.1 材料
            1.1.1 試驗(yàn)材料
            1.1.2 主要儀器設(shè)備
            1.1.3 主要試劑
        1.2 方法
            1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.2.2 細(xì)胞活力檢測(cè)
            1.2.3 Trizol法提取細(xì)胞總RNA
            1.2.4 總RNA純化
            1.2.5 microRNA測(cè)序
            1.2.6 qRT-PCR對(duì)測(cè)序結(jié)果的驗(yàn)證
            1.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        1.3 結(jié)果
            1.3.1 褪黑素提高了GC-1spg細(xì)胞活力
            1.3.2 miRNAs文氏圖
            1.3.3 差異表達(dá)miRNAs靶基因預(yù)測(cè)
            1.3.4 差異表達(dá)miRNAs靶基因GO功能富集分析
            1.3.5 差異表達(dá)miRNAsKEGG通路分析
            1.3.6 差異表達(dá)miRNAsqRT-PCR驗(yàn)證
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 褪黑素通過(guò)改變mRNAs表達(dá)圖譜促進(jìn)GC-1spg的增殖
        2.1 材料
            2.1.1 試驗(yàn)材料
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 主要試劑
        2.2 方法
            2.2.1 mRNA測(cè)序建庫(kù)實(shí)驗(yàn)流程
            2.2.2 cDNA合成(熒光定量用)
            2.2.3 引物設(shè)計(jì)與合成
            2.2.4 熒光定量PCR
            2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.6 熒光素酶報(bào)告基因活性檢測(cè)
            2.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 差異表達(dá)基因
            2.3.2 差異表達(dá)基因GO功能富集分析
            2.3.3 差異表達(dá)基因KEGG富集分析
            2.3.4 差異表達(dá)基因qRT-PCR驗(yàn)證
            2.3.5 miR-223與Mt2之間的靶標(biāo)關(guān)系
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 miR-223/Mt2介導(dǎo)的調(diào)控通路對(duì)GC-1spg增殖和凋亡的影響
        3.1 材料
            3.1.1 試驗(yàn)材料
            3.1.2 主要儀器設(shè)備
            3.1.3 主要試劑
            3.1.4 主要試劑配制
        3.2 方法
            3.2.1 GC-1spg細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            3.2.2 細(xì)胞周期檢測(cè)
            3.2.3 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            3.2.4 線粒體膜電位檢測(cè)
            3.2.5 引物設(shè)計(jì)與合成
            3.2.6 熒光定量PCR
            3.2.7 Westernblot相關(guān)
            3.2.8 過(guò)表達(dá)載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)
            3.2.9 過(guò)表達(dá)載體質(zhì)粒提取
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 Mt2對(duì)GC-1spg細(xì)胞增殖和凋亡的影響
            3.3.2 miR-223對(duì)GC-1spg細(xì)胞增殖和凋亡的影響
            3.3.3 褪黑素激活ERK1/2信號(hào)通路提高了Mt2的表達(dá),促進(jìn)GC-1spg增殖
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
作者簡(jiǎn)介
攻讀博士期間取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3810397