黃體是雌性哺乳動物卵巢中的暫時性分泌組織,由卵泡排卵后的泡膜細(xì)胞和顆粒細(xì)胞分化形成,其重要功能是分泌孕酮。黃體維持與退化與發(fā)情周期、生殖道發(fā)育以及妊娠維持和分娩密切相關(guān)。已經(jīng)清楚,黃體退化主要是在前列腺素F2α(PGF2α)的作用下完成的,細(xì)胞凋亡的調(diào)控伴隨著黃體的維持和退化進(jìn)程。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)作為合成和加工蛋白質(zhì)、膽固醇的場所,是細(xì)胞重要的細(xì)胞器,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)態(tài)對于黃體的孕酮合成分泌功能十分重要,超負(fù)荷的蛋白堆積及Ca²⁺的失衡導(dǎo)致的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)環(huán)境紊亂被稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ER stress),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘發(fā)未折疊蛋白反應(yīng)(UPR),通過降低蛋白合成、促進(jìn)蛋白的折疊、運(yùn)輸緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)重新恢復(fù)穩(wěn)態(tài),但當(dāng)UPR不足以恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)時,則會啟動細(xì)胞的凋亡。有研究證明,UPR還參與了自噬的調(diào)節(jié),自噬也是影響細(xì)胞生存的因素之一。研究發(fā)現(xiàn),在大鼠和牛退化時期的黃體中發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,但未折疊蛋白反應(yīng)信號通路的活化方式并不相同,提示未折疊蛋白反應(yīng)參與調(diào)控黃體的退化,但在不同物種中的調(diào)控方式不同,且未折疊蛋白反應(yīng)對黃體退化的調(diào)控機(jī)制尚不明確。另外,未折疊蛋白反應(yīng)是否通過影響自噬從而參...

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 暫時性的分泌腺—黃體
        1.1 黃體的形成和功能
            1.1.1 形成黃體的主要細(xì)胞來源
            1.1.2 黃體的形成過程
            1.1.3 黃體的功能及其調(diào)控機(jī)制
        1.2 黃體的退化
            1.2.1 PGF2α的產(chǎn)生和作用
            1.2.2 PGF2α引起的黃體功能性退化
            1.2.3 PGF2α引起的黃體結(jié)構(gòu)性退化
    第二章 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬與凋亡的調(diào)控作用
        2.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及其內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的調(diào)控機(jī)制
            2.1.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能
            2.1.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其調(diào)控機(jī)制
            2.1.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡
        2.2 自噬
            2.2.1 自噬的發(fā)生及其調(diào)控機(jī)制
            2.2.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬和凋亡之間的相互影響
第二部分 試驗研究
    第三章 未折疊蛋白反應(yīng)和自噬在山羊卵巢中的活化規(guī)律
        3.1 材料
            3.1.1 組織
            3.1.2 主要試劑
            3.1.3 主要儀器
        3.2 方法
            3.2.1 山羊卵巢組織的收集和黃體的分離
            3.2.2 免疫組化法檢測GRP78在山羊卵巢中的表達(dá)定位
            3.2.3 不同時期黃體的鑒定
            3.2.4 Western blot檢測不同時期山羊黃體中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬、凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)變化
        3.3 結(jié)果與分析
            3.3.1 山羊卵巢中GRP78的表達(dá)定位
            3.3.2 不同時期山羊黃體的鑒定
            3.3.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因在山羊不同時期黃體中的表達(dá)規(guī)律
            3.3.4 自噬相關(guān)基因在山羊不同時期黃體中的表達(dá)規(guī)律
            3.3.5 凋亡相關(guān)基因在山羊不同時期黃體中的表達(dá)規(guī)律
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬在PGF2α誘導(dǎo)山羊黃體細(xì)胞凋亡過程中的作用
        4.1 材料
            4.1.1 細(xì)胞
            4.1.2 主要試劑
            4.1.3 主要儀器
        4.2 方法
            4.2.1 永生化山羊黃體細(xì)胞系的復(fù)蘇、傳代和凍存
            4.2.2 山羊黃體細(xì)胞凋亡模型的構(gòu)建
            4.2.3 檢測PGF2α對山羊黃體細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬水平的影響
            4.2.4 檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬在調(diào)控山羊黃體細(xì)胞凋亡過程中的作用
        4.3 結(jié)果與分析
            4.3.1 PGF2α濃度的篩選
            4.3.2 PGF2α對山羊黃體細(xì)胞凋亡的影響
            4.3.3 PGF2α對山羊黃體細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬的影響
            4.3.4 改變內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)對黃體細(xì)胞凋亡的影響
            4.3.5 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對山羊黃體細(xì)胞線粒體凋亡信號通路的影響
            4.3.6 CQ對PGF2α誘導(dǎo)的山羊黃體細(xì)胞凋亡的影響
            4.3.7 4-PBA和CQ對 PGF2α引起的山羊黃體細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬的影響
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 未折疊蛋白反應(yīng)調(diào)控山羊黃體細(xì)胞凋亡過程的作用機(jī)制
        5.1 材料
            5.1.1 細(xì)胞
            5.1.2 質(zhì)粒
            5.1.1 主要試劑
            5.1.2 主要儀器
        5.2 方法
            5.2.1 山羊EIF2S1基因shRNA慢病毒載體的構(gòu)建
            5.2.2 慢病毒包裝和濃縮
            5.2.3 慢病毒感染山羊黃體細(xì)胞及干擾效率的檢測
            5.2.4 敲低EIF2S1表達(dá)對PGF2α誘導(dǎo)黃體細(xì)胞凋亡的影響
            5.2.5 山羊ATF6、IRE1基因siRNA轉(zhuǎn)染黃體細(xì)胞及干擾效率的檢測
            5.2.6 敲低ATF6、IRE1表達(dá)對PGF2α誘導(dǎo)黃體細(xì)胞凋亡的影響
        5.3 結(jié)果與分析
            5.3.1 重組載體pCD513B-U6-shEIF2S1的鑒定
            5.3.2 包裝慢病毒所需的輔助質(zhì)粒鑒定
            5.3.3 轉(zhuǎn)染效率的鑒定
            5.3.4 慢病毒滴度測定
            5.3.5 針對EIF2S1基因的慢病毒干擾效率檢測及有效片段的篩選
            5.3.6 干擾EIF2S1 基因的表達(dá)對PGF2α誘導(dǎo)的黃體細(xì)胞凋亡的影響
            5.3.7 干擾EIF2S1對PGF2α引起的黃體細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬的影響
            5.3.8 siATF6干擾效率的檢測及有效片段的篩選
            5.3.9 干擾ATF6對PGF2α引起的黃體細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬的影響
            5.3.10 干擾ATF6 基因的表達(dá)對PGF2α誘導(dǎo)的黃體細(xì)胞凋亡的影響
            5.3.11 siIRE1干擾效率的檢測及有效片段的篩選
            5.3.12 干擾IRE1對PGF2α引起的黃體細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬的影響
            5.3.13 干擾IRE1 基因的表達(dá)對PGF2α誘導(dǎo)的黃體細(xì)胞凋亡的影響
            5.3.14 干擾IRE1基因的表達(dá)對黃體細(xì)胞線粒體凋亡信號通路的影響
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)和不足
參考文獻(xiàn)
縮略詞
致謝
作者簡介



本文編號：3750359