雞馬立克氏病(MD)是由馬立克氏病病毒(MDV)引起的噬淋巴細(xì)胞腫瘤性疾病。前期miRNA 組測(cè)序結(jié)果顯示 gga-miR-219b、gga-miR-130b-3p 和 gga-miR-140-3p 在雞感染 MDV 的腫瘤樣本中顯著下調(diào)。本研究中,我們選取這3個(gè)miRNAs和MDV原癌基因Meq作為研究對(duì)象,研究它們?cè)贛D腫瘤形成過(guò)程中的作用機(jī)制。過(guò)表達(dá)或抑制gga-miR-219b的試驗(yàn)結(jié)果表明,該miRNA抑制MD淋巴細(xì)胞MSB1遷移,并通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡而不是阻滯細(xì)胞周期使細(xì)胞增殖發(fā)生抑制,抑制細(xì)胞侵襲相關(guān)基因MMP2和MMP9的表達(dá)。這表明gga-miR-219b在MD腫瘤發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮抑制作用。通過(guò)Targetscan和miRDB預(yù)測(cè)gga-miR-219b的候選靶基因,雙熒光素酶基因報(bào)告試驗(yàn)證明B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性/淋巴瘤11B(BCL11B)是gga-miR-219b的一個(gè)直接靶基因。利用RNA干擾技術(shù)抑制BCL11B的表達(dá),MSB1細(xì)胞增殖、遷移和侵襲情況與過(guò)表達(dá)gga-miR-219b結(jié)果類(lèi)似,說(shuō)明BCL11B基因在MD腫瘤轉(zhuǎn)化過(guò)程中起到促進(jìn)作用。過(guò)表達(dá)gga-miR...

【文章頁(yè)數(shù)】：138 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞表
引言
    本研究的目的與意義
    總體試驗(yàn)設(shè)計(jì)與技術(shù)路線
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 馬立克氏病概述
        1.1.1 馬立克氏病病毒
        1.1.2 馬立克氏病感染階段
        1.1.3 馬立克氏病流行與防控情況
        1.1.4 馬立克氏病研究進(jìn)展
    1.2 miRNA概述
        1.2.1 miRNA生成與作用機(jī)制
        1.2.2 miRNA與癌癥
        1.2.3 miRNA與馬立克氏病
        1.2.4 miR-219、miR-130和miR-140研究進(jìn)展
    1.3 DNA甲基化概述
        1.3.1 DNA甲基化檢測(cè)方法
        1.3.2 腫瘤中miRNA的異常表達(dá)與DNA甲基化
        1.3.3 馬立克氏病的遺傳抗性與DNA甲基化
第二章 gga-miR-219b和Meq在馬立克氏病腫瘤轉(zhuǎn)化過(guò)程中作用機(jī)制研究
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 試驗(yàn)樣本
        2.2.2 主要試劑及藥品
        2.2.3 主要儀器設(shè)備
        2.2.4 主要試劑配置
        2.2.5 試驗(yàn)方法與流程
        2.2.6 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 miRNA靶基因生物學(xué)預(yù)測(cè)
        2.3.2 gga-miR-219b和候選靶基因BCL11B在MDV引發(fā)的腫瘤化和未感染組織中的表達(dá)量
        2.3.3 雙熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)
        2.3.4 gga-miR-219b對(duì)MSB1細(xì)胞中靶基因BCL11B表達(dá)的影響
        2.3.5 gga-miR-219b對(duì)MSB1細(xì)胞特性的影響
        2.3.6 干擾靶基因BCL11B表達(dá)的siRNA篩選
        2.3.7 BCL11B干擾對(duì)MSB1細(xì)胞特性的影響
        2.3.8 gga-miR-219b和BCL11B干擾對(duì)MDV原癌基因Meq表達(dá)的影響
        2.3.9 Meq干擾對(duì)MSB1細(xì)胞特性的影響
        2.3.10 Meq干擾對(duì)BCL11B基因表達(dá)的影響
    2.4 討論
        2.4.1 gga-miR-219b和靶基因BCL11B在馬立克氏病腫瘤轉(zhuǎn)化過(guò)程中的作用機(jī)制
        2.4.2 Meq基因在馬立克氏病腫瘤轉(zhuǎn)化過(guò)程中的作用機(jī)制
    2.5 小結(jié)
第三章 gga-miR-130b-3p在馬立克氏病腫瘤轉(zhuǎn)化過(guò)程中作用機(jī)制研究
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 試驗(yàn)樣本
        3.2.2 主要試劑及藥品
        3.2.3 主要儀器設(shè)備
        3.2.4 主要試劑配置
        3.2.5 試驗(yàn)方法與流程
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 gga-miR-130b-3p在MDV引發(fā)的腫瘤化和未感染組織中的表達(dá)量
        3.3.2 腫瘤化和未感染脾臟中g(shù)ga-miR-130b-3p編碼基因上游的甲基化水平
        3.3.3 甲基化轉(zhuǎn)移酶和去甲基化相關(guān)酶在腫瘤化和未感染脾臟中的差異表達(dá)
        3.3.4 gga-miR-130b-3p對(duì)MSB1細(xì)胞特性的影響
        3.3.5 gga-miR-130b-3p對(duì)MDV原癌基因Meq表達(dá)量的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 gga-miR-140-3p在馬立克氏病腫瘤轉(zhuǎn)化過(guò)程中作用機(jī)制研究
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 試驗(yàn)樣本
        4.2.2 主要試劑及藥品
        4.2.3 主要儀器設(shè)備
        4.2.4 主要試劑配置
        4.2.5 試驗(yàn)方法與流程
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 gga-miR-140-3p在MDV引發(fā)的腫瘤化和未感染組織中的表達(dá)量
        4.3.2 gga-miR-140-3p對(duì)MSB1細(xì)胞增殖的影響
        4.3.3 gga-miR-140-3p對(duì)MSB1細(xì)胞遷移的影響
        4.3.4 gga-miR-140-3p對(duì)侵襲相關(guān)基因表達(dá)的影響
        4.3.5 gga-miR-140-3p對(duì)MDV原癌基因Meq表達(dá)量的影響
        4.3.6 gga-miR-219b、gga-miR-130b-3p和gga-miR-140-3p預(yù)測(cè)靶基因之間的互作關(guān)系
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 結(jié)論
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3742781