豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）引起的一種高度接觸性傳染病。PRRSV屬于動脈炎病毒科,是一種單股正鏈RNA病毒,基因組全長為15kb左右,可編碼至少10個開放閱讀框。PRRSV有兩種基因型,分別為基因1型和基因2型。我國目前普遍流行的高致病性PRRSV毒株大部分屬于Lineage8（JXA1、HuN4等）。Lineage1,也被稱作是NADC30-like株,于2013年開始在我國境內流行,并再次引起了PRRS疫情。Lineage1和Lineage8均屬于基因2型。豬2型圓環(huán)病毒（Porcine Circovirus 2,PCV2）是一種單股負鏈DNA病毒,屬于環(huán)狀病毒科,是引起豬圓環(huán)病毒相關疾病的主要病原體。PCV2單獨感染很少引起臨床癥狀,常見與PRRSV發(fā)生混合感染。PRRSV和PCV2混合感染,與兩種病毒單獨感染相比能夠加重疾病,產生許多種明顯的... 

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要 Abstract 前言 第一章 廣西壯族自治區(qū)PRRSV病原學檢測
1.1 材料
    1.1.1 細胞
    1.1.2 病料采集
    1.1.3 主要試劑
    1.1.4 主要儀器設備
    1.1.5 相關試劑配制
    1.1.6 引物設計與合成
    1.1.7 分子生物學軟件
1.2 實驗方法
    1.2.1 病料的采集與處理
    1.2.2 組織樣品總RNA提取
    1.2.3 RNA反轉錄
    1.2.4 PCR檢測
    1.2.5 PRRSVPCR擴增產物回收
    1.2.6 pEASY-Bluntcloning載體的構建
    1.2.7 PRRSV病毒的分離鑒定
    1.2.8 PRRSV致病性分析
1.3 結果
    1.3.1 PRRSVRT-PCR檢測結果
    1.3.2 PRRSV主要基因片段遺傳進化分析及氨基酸序列比對
    1.3.3 PRRSV分離鑒定
    1.3.4 GXBB16-1致病性檢測
    1.3.5 GXBB16-1全基因序列分析
1.4 討論
1.5 小結 第二章 廣西壯族自治區(qū)PCV3病原學檢測
2.1 材料
    2.1.1 病料采集
    2.1.2 主要試劑
    2.1.3 相關試劑配制
    2.1.4 引物設計與合成
2.2 實驗方法
    2.2.1 病料的采集和處理
    2.2.2 組織樣品中基因組DNA提取
    2.2.3 PCR檢測DNA樣品中的PCV
    2.2.4 pMD18T載體的構建
    2.2.5 pMD18T載體轉化Trans5α感受態(tài)細胞
    2.2.6 質粒PCR、酶切鑒定
    2.2.7 RealtimePCR反應
    2.2.8 PCV3熒光定量檢測方法的建立
    2.2.9 PCV3全基因序列擴增測序
    2.2.10 PCV3全基因序列生物信息學分析
2.3 結果
    2.3.1 PCV3熒光定量檢測方法的建立
    2.3.2 廣西地區(qū)PCV3基因全長測序及遺傳進化分析
2.4 討論
2.5 小結 第三章 豬IFITM抗PRRSV作用研究
3.1 材料方法
    3.1.1 毒株
    3.1.2 質粒
    3.1.3 實驗動物
    3.1.4 主要試劑
    3.1.5 主要儀器設備
    3.1.6 引物設計與合成
3.2 實驗方法
    3.2.1 原代豬肺泡巨噬細胞(PAM)的分離
    3.2.2 豬原代外周血淋巴細胞(PBMC)的分離
    3.2.3 接毒
    3.2.4 接種PRRSV的PAM、PBMC細胞中IFITM基因表達變化
    3.2.5 豬IFITM慢病毒包裝
    3.2.6 Marc145嘌呤霉素敏感性實驗
    3.2.7 慢病毒感染構建Marc145-IFITM穩(wěn)定表達細胞系
    3.2.8 熒光定量PCR分析IFITM抑制PRRSV復制作用
    3.2.9 間接免疫熒光分析IFITM抑制PRRSV復制作用
    3.2.10 Westernblot分析IFITM抑制PRRSV復制作用
    3.2.11 siRNA轉染
3.3 結果
    3.3.1 熒光定量PCR引物擴增產物的特異性判斷
    3.3.2 感染GXBB16-1后的PAM細胞IFITM基因轉錄水平顯著上調
    3.3.3 感染GXBB16-1后的PBMC細胞IFITM基因轉錄水平顯著上調
    3.3.4 豬IFITM分子氨基酸序列比對
    3.3.5 Marc145細胞對嘌呤霉素敏感性檢測
    3.3.6 Marc145-IFITMs細胞系構建及鑒定
    3.3.7 IFITM在Marc145細胞中穩(wěn)定表達對PRRSV復制的影響
    3.3.8 SiRNA干擾效率檢測
    3.3.9 敲低IFITM3的表達對病毒復制的影響
3.4 討論
3.5 小結 第四章 結論與展望 參考文獻 作者在學期間取得的學術成果 主要簡歷 致謝



本文編號：3734176