發(fā)布時(shí)間：2023-02-05 09:43

　　口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的急性、熱性、高度接觸性傳染病。機(jī)體的天然免疫反應(yīng)和接種疫苗后產(chǎn)生的適應(yīng)性免疫應(yīng)答是抵抗病原菌感染的重要防線。然而,FMDV變異快,血清型眾多,且各血清型之間缺乏交叉保護(hù),給FMD的防控增加了難度。因此,天然免疫應(yīng)答在抵抗FMDV感染過(guò)程中至關(guān)重要。FMDV在長(zhǎng)期增殖過(guò)程中已經(jīng)進(jìn)化多種策略抑制宿主的天然免疫應(yīng)答,促進(jìn)自身復(fù)制。例如,FMDV可通過(guò)多種途徑拮抗TLRs和RLRs受體介導(dǎo)的天然免疫信號(hào)通路。NOD2信號(hào)通路是2009年發(fā)現(xiàn)的在抗病毒感染中發(fā)揮重要作用的天然免疫路徑,NOD2蛋白及其下游RIP2蛋白是該通路中獨(dú)特的分子,本實(shí)驗(yàn)室前期研究揭示了FMDV抑制NOD2信號(hào)通路的分子機(jī)制,然而RIP2在FMDV感染過(guò)程中發(fā)揮的作用仍不清楚。因此,本研究主要以FMDV與RIP2調(diào)控的天然免疫信號(hào)通路為切入點(diǎn),探討FMDV拮抗RIP2抗病毒作用的機(jī)制。具體內(nèi)容如下:(1)利用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)證實(shí)RIP2可影響FMDV誘導(dǎo)的IFN-β和NF-...

【文章頁(yè)數(shù)】：118 頁(yè)

【文章目錄】：
摘要
Summary
英文縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)的概況
        1.1.1 口蹄疫病毒的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 FMDV的流行趨勢(shì)及致病性
        1.1.3 FMDV的防控及疫苗
    1.2 天然免疫系統(tǒng)
        1.2.1 TLRs介導(dǎo)的抗病毒天然免疫
        1.2.2 RLRs介導(dǎo)的抗病毒天然免疫
        1.2.3 NLRs介導(dǎo)的抗病毒天然免疫
        1.2.4 胞漿DNA受體介導(dǎo)的抗病毒天然免疫
        1.2.5 泛素化修飾調(diào)控的抗病毒天然免疫
        1.2.6 磷酸化修飾調(diào)控的抗病毒天然免疫
    1.3 FMDV調(diào)控宿主抗病毒天然免疫的研究
    1.4 本研究的目的意義及研究?jī)?nèi)容
第二章 RIP2 影響FMDV誘導(dǎo)的信號(hào)通路
    2.1 材料與方法
        2.1.1 細(xì)胞、病毒和工程菌
        2.1.2 質(zhì)粒和抗體
        2.1.3 工具酶和主要試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 主要試劑的配置
        2.1.6 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.1.7 質(zhì)粒的大量提取
        2.1.8 真核表達(dá)質(zhì)粒和RNA的轉(zhuǎn)染
        2.1.9 細(xì)胞RNA的提取及cDNA反轉(zhuǎn)錄
        2.1.10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)
        2.1.11 細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇
        2.1.12 FMDV的增殖
        2.1.13 FMDV感染
        2.1.14 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot,WB)
        2.1.15 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CO-IP)
        2.1.16 雙熒光素酶報(bào)告基因的檢測(cè)
        2.1.17 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 FMDV感染激活RIP2 介導(dǎo)的信號(hào)通路
        2.2.2 RIP2 影響FMDV誘導(dǎo)的P65和IRF3 的磷酸化
        2.2.3 RIP2 影響FMDV誘導(dǎo)的下游抗病毒基因的表達(dá)水平
    2.3 討論
第三章 RIP2對(duì)FMDV復(fù)制的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 細(xì)胞、病毒和工程菌
        3.1.2 質(zhì)粒和抗體
        3.1.3 工具酶和主要試劑
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 主要試劑的配置
        3.1.6 質(zhì)粒的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染(Lipofectamine3000)
        3.1.7 病毒滴度
        3.1.8 細(xì)胞RNA的提取及cDNA反轉(zhuǎn)錄
        3.1.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)
        3.1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 過(guò)表達(dá)RIP2 抑制FMDV復(fù)制
        3.2.2 小RNA干擾RIP2 蛋白表達(dá)水平后促進(jìn)FMDV復(fù)制
    3.3 討論
第四章 FMDV感染降低RIP2 的蛋白表達(dá)水平
    4.1 材料與方法
        4.1.1 細(xì)胞與病毒
        4.1.2 抗體
        4.1.3 工具酶和主要試劑
        4.1.4 主要儀器
        4.1.5 細(xì)胞RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        4.1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)
        4.1.7 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blotting,WB)
        4.1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 FMDV感染上調(diào)RIP2 mRNA表達(dá)水平
        4.2.2 FMDV感染降低RIP2 蛋白表達(dá)水平
        4.2.3 FMDV感染降低RIP和 RIP3 蛋白表達(dá)水平
        4.2.4 EV71感染降低RIP2蛋白表達(dá)水平
    4.3 討論
第五章 FMDV降低RIP2 蛋白表達(dá)水平的機(jī)制
    5.1 材料與方法
        5.1.1 細(xì)胞與病毒
        5.1.2 質(zhì)粒與抗體
        5.1.3 工具酶和主要試劑
        5.1.4 主要儀器
        5.1.5 細(xì)胞RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        5.1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)
        5.1.7 MTS實(shí)驗(yàn)
        5.1.8 主要試劑的配制
        5.1.9 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blotting,WB)
        5.1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 FMDV2B、2C、L^pro和3C^pro蛋白降低內(nèi)源性RIP2 蛋白表達(dá)水平
        5.2.2 FMDV2B、2C、L^pro和3C^pro不降低RIP2 mRNA水平
        5.2.3 FMDV2B降低RIP2 蛋白表達(dá)水平的機(jī)制
        5.2.4 FMDV2C降低RIP2 蛋白表達(dá)水平的機(jī)制
        5.2.5 FMDV L^pro和3C^pro降低RIP2 蛋白表達(dá)水平的機(jī)制
    5.3 討論
第六章 FMDV2C與 RIP2 相互作用
    6.1 材料與方法
        6.1.1 細(xì)胞、病毒和工程菌
        6.1.2 質(zhì)粒和抗體
        6.1.3 工具酶和主要試劑
        6.1.4 主要儀器
        6.1.5 主要試劑的配置
        6.1.6 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
    6.2 結(jié)果
        6.2.1 FMDV2C與 RIP2 外源性互作
        6.2.2 FMDV2C與 RIP2 內(nèi)源性互作
        6.2.3 FMDV2C與 RIP2 的互作位點(diǎn)
    6.3 討論
第七章 FMDV2C降低RIP2 蛋白表達(dá)水平的機(jī)制
    7.1 材料與方法
        7.1.1 細(xì)胞與病毒
        7.1.2 質(zhì)粒與抗體
        7.1.3 工具酶和主要試劑
        7.1.4 主要儀器
        7.1.5 RNA的轉(zhuǎn)染
        7.1.6 細(xì)胞RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        7.1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)
        7.1.8 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blotting,WB)
        7.1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    7.2 結(jié)果
        7.2.1 FMDV2C降低PABPC1 的蛋白表達(dá)水平
        7.2.2 FMDV2C降低PABPC1 蛋白表達(dá)水平的位點(diǎn)
        7.2.3 PABPC1 蛋白干擾后抑制了RIP2 的蛋白表達(dá)水平
    7.3 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3734748