本文關(guān)鍵詞：α-烯醇化酶對籽鵝卵泡顆粒細胞功能的影響及相關(guān)機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：籽鵝是世界上產(chǎn)蛋性能較高的鵝品種之一，研究籽鵝卵泡發(fā)育的調(diào)控機制具有重要的理論與實際意義。顆粒細胞是卵泡中十分重要的細胞，，其在數(shù)量、分泌功能、激素受體表達量等方面的變化對卵泡發(fā)育具有重要的影響。在前期試驗中，我們發(fā)現(xiàn)產(chǎn)蛋期籽鵝卵巢中α-烯醇化酶（α-enolase，ENO1）相對表達量顯著高于產(chǎn)蛋前籽鵝卵巢，推測ENO1可能對卵泡發(fā)育具有重要調(diào)控作用。ENO1是一種糖酵解酶，主要催化2-磷酸甘油酸（2-glyceric acid phosphate，PGA）脫水，生成含高能磷酸鍵的磷酸烯醇式丙酮酸（Phosphoenolpyruvic acid，PEP）。 本試驗依據(jù)禽類卵泡發(fā)育特點，研究ENO1在產(chǎn)蛋期籽鵝卵巢各級卵泡的組織學定位及表達規(guī)律，同時構(gòu)建ENO1基因過表達和干擾表達重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的籽鵝F1級卵泡顆粒細胞，通過流式細胞術(shù)、實時熒光定量PCR、Westernblot等方法研究ENO1對籽鵝卵泡顆粒細胞糖酵解、激素分泌功能、生殖相關(guān)激素受體表達及增殖、凋亡的影響，為明確ENO1在禽類生殖生理中的作用提供實驗和理論依據(jù)。 （1）采用H-E染色、免疫組化、Western blot等方法研究籽鵝不同等級卵泡顆粒細胞組織學結(jié)構(gòu)及ENO1的表達規(guī)律，同時獲得了不同等級卵泡ENO1mRNA、生殖相關(guān)激素受體促卵泡激素受體（Follicle stimulating hormone receptor,FSHR）、促黃體生成素受體（Luteinizing hormone receptor, LHR)、雌激素受體α（Estrogen receptor alpha, ERα)、雌激素受體β（Estrogen receptor beta, ERβ)、生長激素受體（Growth hormone receptor, GHR）、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1（Insulin-like growth factor binding protein-1, IGFBP-1）mRNA及凋亡相關(guān)基因Bcl-2和Caspase-3mRNA表達量的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為研究禽類產(chǎn)蛋機制奠定基礎(chǔ)。 （2）成功構(gòu)建了ENO1基因過表達和干擾表達重組質(zhì)粒，獲得了感染滴度能夠達到1.1×1011pfu/mL的過表達重組腺病毒；實現(xiàn)了在原代培養(yǎng)籽鵝F1級卵泡顆粒細胞中的過表達和干擾表達，說明所構(gòu)建ENO1基因重組質(zhì)粒可用于下一步試驗。 （3）ENO1基因干擾表達結(jié)果如下：①使籽鵝卵泡顆粒細胞攝取葡萄糖能力下降，細胞上清液丙酮酸、乳酸濃度下降；細胞三磷酸腺苷（Adenosinetriphosphate, ATP）含量和丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）mRNA表達量下降，提示ENO1基因干擾表達可減緩糖酵解進程；②促進卵泡顆粒細胞雌激素、孕酮和睪酮的分泌，降低抑制素分泌，同時下調(diào)生殖相關(guān)激素受體ERα、ERβ、GHR和IGFBP-1mRNA的表達量，說明ENO1基因干擾表達可通過調(diào)控顆粒細胞激素分泌功能和生殖相關(guān)激素受體基因的表達影響卵泡的生長發(fā)育；③使卵泡顆粒細胞增殖變慢，凋亡增加，G2/M期顆粒細胞比例增高，提示ENO1基因干擾表達可使原代培養(yǎng)籽鵝卵泡顆粒細胞發(fā)生G2/M期阻滯，誘導(dǎo)細胞發(fā)生凋亡，抑制細胞增殖。 （4）ENO1基因過表達結(jié)果如下：①使籽鵝卵泡顆粒細胞上清液葡萄糖濃度下降，丙酮酸、乳酸濃度升高，細胞ATP含量和PK mRNA表達量升高，提示ENO1基因過表達可加速糖酵解進程，使顆粒細胞糖酵解供能所占比例增加；②促進顆粒細胞活化素、抑制素的分泌，抑制睪酮的分泌，同時促進ERα、ERβ、GHR和IGFBP-1mRNA的表達，提示ENO1基因過表達可通過下調(diào)顆粒細胞睪酮分泌、上調(diào)抑制素和活化素分泌及多種生殖激素受體基因表達進而調(diào)節(jié)顆粒細胞的功能和卵泡的發(fā)育；③促進顆粒細胞增殖、減少細胞凋亡并使G0/G1期顆粒細胞比例下降，S期和G2/M期顆粒細胞比例增高，提示ENO1基因過表達可誘導(dǎo)顆粒細胞DNA合成增加，使處于增殖期的顆粒細胞數(shù)量增加，促進細胞增殖，抑制細胞凋亡。 上述結(jié)果說明，ENO1可通過調(diào)控卵泡顆粒細胞的糖酵解、分泌功能、生殖激素受體表達、凋亡和細胞周期的時相性影響籽鵝卵泡的生長發(fā)育和排卵。
【關(guān)鍵詞】：α-烯醇化酶 顆粒細胞 籽鵝 分泌 增殖 凋亡 激素受體
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S835
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文縮寫詞表12-14
• 前言14-18
• 第一篇 文獻綜述18-40
• 第1章 α-烯醇化酶研究進展18-30
• 1.1 ENO1的基本特征18-20
• 1.2 ENO1相關(guān)功能20-29
• 1.3 結(jié)語29-30
• 第2章 顆粒細胞的內(nèi)分泌、生殖激素受體表達和增殖凋亡30-40
• 2.1 雌禽生殖生理基本特征30-31
• 2.2 顆粒細胞的內(nèi)分泌功能31-35
• 2.3 促性腺激素及顆粒細胞生殖相關(guān)激素受體表達35-38
• 2.4 顆粒細胞的增殖和凋亡38-39
• 2.5 結(jié)語39-40
• 第二篇 研究內(nèi)容40-116
• 第1章 不同等級卵泡ENO1的表達規(guī)律及生殖相關(guān)激素受體、凋亡相關(guān)基因表達量的檢測40-62
• 1.1 材料與方法40-46
• 1.2 結(jié)果46-57
• 1.3 討論57-61
• 1.4 小結(jié)61-62
• 第2章 ENO1基因過表達和干擾表達重組質(zhì)粒的構(gòu)建及在籽鵝卵泡顆粒細胞中的表達62-78
• 2.1 材料與方法62-69
• 2.2 結(jié)果69-75
• 2.3 討論75-77
• 2.4 小結(jié)77-78
• 第3章 ENO1基因干擾表達對籽鵝卵泡顆粒細胞糖酵解、內(nèi)分泌、生殖相關(guān)激素受體表達、增殖和凋亡的影響78-100
• 3.1 材料與方法78-81
• 3.2 結(jié)果81-91
• 3.3 討論91-97
• 3.4 小結(jié)97-100
• 第4章 ENO1基因過表達對籽鵝卵泡顆粒細胞糖酵解、內(nèi)分泌、生殖相關(guān)激素受體、增殖和凋亡的影響100-116
• 4.1 材料與方法100-101
• 4.2 結(jié)果101-110
• 4.3 討論110-114
• 4.4 小結(jié)114-116
• 結(jié)論116-118
• 參考文獻118-140
• 導(dǎo)師簡介140-142
• 作者簡介142-144
• 在學期間所取得的科研成果144-146
• 致謝146-147

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃炎坤,王彩玲,趙金艷;激素對家禽卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)[J];動物醫(yī)學進展;2002年05期

2 田錦;李志敏;傅衍;王振玲;周珍輝;齊軍U

本文編號：350987