楊樹(shù)菇凝集素（Agrocybe aegerita lectin,AAL）是從楊樹(shù)菇中提取的一種活性成分,前期研究證明其具有抗病毒、刺激小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖的作用,作為滅活病毒疫苗佐劑,可以提高小鼠抗病毒的抗體水平。禽流感病毒在全世界范圍內(nèi)流行,不僅會(huì)感染禽,給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大損失,引發(fā)公共衛(wèi)生問(wèn)題,還會(huì)感染哺乳動(dòng)物和人。疫苗免疫被證實(shí)是防治禽流感流行的有效方法。前期研究表明原核表達(dá)重組的AAL（rAAL）也具有增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用,為了研究rAAL的佐劑效果,探討佐劑的作用機(jī)理,開(kāi)展以下試驗(yàn):一、rAAL對(duì)滅活禽流感病毒H9N2的佐劑作用選擇20±2g健康雄性Babl/c小鼠50只,隨機(jī)分成5組,每組10只,分別為空白對(duì)照組、佐劑陰性對(duì)照組、佐劑陽(yáng)性對(duì)照組（鋁鹽組）、0.5mg rAAL組、2.5mg rAAL組�？瞻讓�(duì)照組每只小鼠僅注射0.2ml PBS,其余各組每只小鼠注射0.1ml H9N2滅活病毒（滅活前病毒血凝效價(jià)27、70℃加熱15min滅活）;佐劑陰性對(duì)照組再混合注射0.1ml PBS、佐劑陽(yáng)性對(duì)照組（鋁鹽組）混合注射0.1ml鋁鹽,其余兩組分別混合注射0.1ml rAAL（... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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轉(zhuǎn)錄組原理（岳桂東等2012）

N2抗體水平。結(jié)果如圖2-1所示，PBS組（佐劑陰性對(duì)照組）、鋁鹽組（佐劑陽(yáng)性對(duì)照組）、0.5mg rAAL組、2.5mg rAAL組血清中H9N2抗體滴度分別為5.43±1.94、9.64±1.00、7.28±0.82、7.79±0.77；與PBS組對(duì)比，鋁鹽組血清抗體水平顯著升高（P＜0.05），2.5mg rAAL組血清抗體水平顯著提高（P＜0.05），0.5mg rAAL組沒(méi)有顯著改變血清中H9N2抗體水平。圖 2-1 免疫小鼠血清 H9N2抗體水平。**P＜0.01、*P＜0.05。Fig. 2-1 H9N2-specific IgG levels of immunized mice. **P＜0.01 , *P＜0.05.2.2 免疫小鼠脾臟淋巴細(xì)胞體外增殖能力分離得到了rAAL、鋁鹽、PBS與滅活禽流感病毒H9N2共同免疫小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)，并用滅活H9N2病毒對(duì)脾臟淋巴細(xì)胞進(jìn)行體外刺激，通過(guò)CCK-8

華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆博士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文30試劑盒檢測(cè)免疫小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖能力，結(jié)果如圖2-2所示。A圖為用PBS組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞繪制的CCK-8標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)過(guò)比較加入CCK-8試劑后2、3、4h的OD值，繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)加入CCK-8 3h的OD值標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)最高為0.995。因此，分離各組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞，體外培養(yǎng)，滅活H9N2病毒刺激后24h，加入CCK-8試劑后3h測(cè)定各處理組的OD值，計(jì)算細(xì)胞增殖能力，如圖2-2B所示，佐劑陰性對(duì)照組、佐劑陽(yáng)性對(duì)照組、0.5mg rAAL組、2.5mg rAAL組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)分別為3.49±2.01、3.91±1.95、5.53±2.57、2.47±1.78。與空白組（0.99±0.46）相比，佐劑陰性對(duì)照組、佐劑陽(yáng)性對(duì)照組和0.5mg rAAL組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖能力極顯著性增強(qiáng)（P＜0.01）

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