楊樹菇凝集素（Agrocybe aegerita lectin,AAL）是從楊樹菇中提取的一種活性成分,前期研究證明其具有抗病毒、刺激小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖的作用,作為滅活病毒疫苗佐劑,可以提高小鼠抗病毒的抗體水平。禽流感病毒在全世界范圍內(nèi)流行,不僅會感染禽,給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大損失,引發(fā)公共衛(wèi)生問題,還會感染哺乳動物和人。疫苗免疫被證實(shí)是防治禽流感流行的有效方法。前期研究表明原核表達(dá)重組的AAL（rAAL）也具有增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用,為了研究rAAL的佐劑效果,探討佐劑的作用機(jī)理,開展以下試驗(yàn):一、rAAL對滅活禽流感病毒H9N2的佐劑作用選擇20±2g健康雄性Babl/c小鼠50只,隨機(jī)分成5組,每組10只,分別為空白對照組、佐劑陰性對照組、佐劑陽性對照組（鋁鹽組）、0.5mg rAAL組、2.5mg rAAL組�？瞻讓φ战M每只小鼠僅注射0.2ml PBS,其余各組每只小鼠注射0.1ml H9N2滅活病毒（滅活前病毒血凝效價(jià)27、70℃加熱15min滅活）;佐劑陰性對照組再混合注射0.1ml PBS、佐劑陽性對照組（鋁鹽組）混合注射0.1ml鋁鹽,其余兩組分別混合注射0.1ml rAAL（... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：173 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)錄組原理（岳桂東等2012）

N2抗體水平。結(jié)果如圖2-1所示，PBS組（佐劑陰性對照組）、鋁鹽組（佐劑陽性對照組）、0.5mg rAAL組、2.5mg rAAL組血清中H9N2抗體滴度分別為5.43±1.94、9.64±1.00、7.28±0.82、7.79±0.77；與PBS組對比，鋁鹽組血清抗體水平顯著升高（P＜0.05），2.5mg rAAL組血清抗體水平顯著提高（P＜0.05），0.5mg rAAL組沒有顯著改變血清中H9N2抗體水平。圖 2-1 免疫小鼠血清 H9N2抗體水平。**P＜0.01、*P＜0.05。Fig. 2-1 H9N2-specific IgG levels of immunized mice. **P＜0.01 , *P＜0.05.2.2 免疫小鼠脾臟淋巴細(xì)胞體外增殖能力分離得到了rAAL、鋁鹽、PBS與滅活禽流感病毒H9N2共同免疫小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)，并用滅活H9N2病毒對脾臟淋巴細(xì)胞進(jìn)行體外刺激，通過CCK-8

華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆博士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文30試劑盒檢測免疫小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖能力，結(jié)果如圖2-2所示。A圖為用PBS組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞繪制的CCK-8標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)過比較加入CCK-8試劑后2、3、4h的OD值，繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)加入CCK-8 3h的OD值標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)最高為0.995。因此，分離各組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞，體外培養(yǎng)，滅活H9N2病毒刺激后24h，加入CCK-8試劑后3h測定各處理組的OD值，計(jì)算細(xì)胞增殖能力，如圖2-2B所示，佐劑陰性對照組、佐劑陽性對照組、0.5mg rAAL組、2.5mg rAAL組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)分別為3.49±2.01、3.91±1.95、5.53±2.57、2.47±1.78。與空白組（0.99±0.46）相比，佐劑陰性對照組、佐劑陽性對照組和0.5mg rAAL組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖能力極顯著性增強(qiáng)（P＜0.01）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]ISCOM型白血病瘤苗對小鼠巨噬細(xì)胞作用的研究[J]. 吳隼,黃琰,楊滿,字友梅,馬棟,賀立山.  重慶醫(yī)學(xué). 2016(04)
[2]不同佐劑對奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌多價(jià)毒力因子疫苗免疫效果的影響[J]. 楊嵐,郝永清,潘海婷,何焱,黃海碧.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(11)
[3]RNA-Seq技術(shù)在瘤胃微生物研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 廖奇,劉旭川,李清,樊月圓,張春勇,楊舒黎,毛華明,冷靜.  動物營養(yǎng)學(xué)報(bào). 2015(04)
[4]免疫佐劑研發(fā)和臨床轉(zhuǎn)化的現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢[J]. 劉洋,曹雪濤.  中國腫瘤生物治療雜志. 2014(02)
[5]轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-seq）策略及其數(shù)據(jù)在分子標(biāo)記開發(fā)上的應(yīng)用[J]. 李小白,向林,羅潔,胡標(biāo)林,田勝平,謝鳴,孫崇波.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2013(05)
[6]H5N1亞型禽流感病毒HA基因桿狀病毒雙表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建及其在小鼠的免疫原性分析[J]. 樊惠英,林文耀,佟鐵鑄,張杰,葉昱,靳立明,張春雷,廖明.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(03)
[7]IL-2對免疫激活和免疫耐受的雙向調(diào)節(jié)作用[J]. 翟志敏.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2013(03)
[8]吲哚2,3-雙加氧酶作為信號分子參與免疫耐受的調(diào)節(jié)[J]. 楊陽,于益芝.  中國腫瘤生物治療雜志. 2012(03)
[9]高通量測序技術(shù)在動植物研究領(lǐng)域中的應(yīng)用[J]. 岳桂東,高強(qiáng),羅龍海,王軍一,許姣卉,尹燁.  中國科學(xué):生命科學(xué). 2012(02)
[10]miR-124基因家族的分子進(jìn)化與靶基因預(yù)測[J]. 彭娟,李思光,羅丹丹,羅玉萍.  生物技術(shù)通報(bào). 2011(10)

博士論文
[1]NF-κB p65 siRNA轉(zhuǎn)染體外抑制VSMC增殖和防治移植靜脈內(nèi)膜增生的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 孟祥斌.山東大學(xué) 2015
[2]花生晚斑病抗性遺傳特性研究[D]. 夏友霖.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]HIV-1 DNA疫苗佐劑及兩種病毒載體基因表達(dá)譜研究[D]. 侯爵.中國疾病預(yù)防控制中心 2013
[4]黃芪多糖脂質(zhì)體免疫增強(qiáng)劑的研究與應(yīng)用[D]. 袁海星.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[5]H9N2亞型禽流感病毒與鴨坦布蘇病毒的生物學(xué)特性研究及疫苗的初步研制[D]. 徐大偉.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[6]哮喘小鼠CD4+T細(xì)胞中miRNA的異常表達(dá)及其對Th2分化的靶向調(diào)控[D]. 酆孟潔.暨南大學(xué) 2012
[7]黃芪多糖納米乳的制備及其免疫佐劑效應(yīng)研究[D]. 李樹鵬.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2012
[8]中藥黃酮復(fù)方免疫增強(qiáng)劑EPI及其作用機(jī)理研究[D]. 范云鵬.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[9]ITGB4BP調(diào)控TGF-β1表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 彭旭.第三軍醫(yī)大學(xué) 2011

碩士論文
[1]miR-3473b在局灶性腦缺血再灌注損傷中的作用及其機(jī)制研究[D]. 王小玉.蘇州大學(xué) 2016
[2]煙曲霉感染小鼠肺組織相關(guān)microRNA的篩選與鑒定[D]. 陳菲.南方醫(yī)科大學(xué) 2014
[3]藥用真菌楊樹菇中免疫佐劑效應(yīng)組分的鑒定[D]. 楊青.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]一種新的Th2高表達(dá)蛋白—嗜中性顆粒蛋白（NGP）的表達(dá)、純化及其性質(zhì)與功能初探[D]. 謝德鄂.華東師范大學(xué) 2006



本文編號：3405147