利用RT-PCR同源克隆以及3’,5’-RACE擴增技術(shù),從杜鵑紅山茶（Camellia azalea）嫩葉中分離獲得山茶花抗逆基因以及從云南山茶矮生品種‘恨天高’（C.reticulate Lindl.‘Hentiangao’）莖尖中分離獲得株型生長相關(guān)的同源基因c DNA全長序列,所分離的基因包括杜鵑紅山茶CaAPX（GenBank登錄號:KP635267）、杜鵑紅山茶CaCPI（GenBank登錄號:KP635269）以及‘恨天高’CrGA20ox1（GenBank登錄號:KP635268）。序列分析及生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),這些基因皆為所要分離的目的基因。利用熒光定量Real-time RT-PCR技術(shù),分別對CaAPX、CaCPI以及CrGA20ox1的表達模式進行了研究。CaAPX在杜鵑紅山茶7種檢測組織中均有表達,但表達水平不一,表達量由高到低依次為:未成熟果實>嫩葉>花苞>葉芽>種胚>花瓣>花芽,其中未成熟果實中的表達量最高,高達其他組織的2.68¹1.44倍。杜鵑紅山茶在溫度脅迫下的表達分析結(jié)果顯示,溫度脅迫可以誘... 

【文章來源】：中國林業(yè)科學(xué)研究院北京市

【文章頁數(shù)】：173 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 引言
        1.1.1 植物抗寒、耐熱性研究
        1.1.2 植物抗蟲性研究
        1.1.3 赤霉素與植物株高的研究
        1.1.4 山茶屬植物遺傳轉(zhuǎn)化過程中木糖篩選體系的研究
        1.1.5 研究目的和意義
        1.1.6 項目來源及經(jīng)費支持
    1.2 研究目標(biāo)和主要研究內(nèi)容
        1.2.1 關(guān)鍵的科學(xué)問題與研究目標(biāo)
        1.2.2 主要研究內(nèi)容
    1.3 研究技術(shù)路線
第二章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因全長克隆與生物信息學(xué)分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 杜鵑紅山茶CaAPX、CaCPI及‘恨天高’CrGA20ox1基因cDNA全長克隆
        2.2.2 生物信息學(xué)分析
    2.3 小結(jié)
第三章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因表達模式研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 CaAPX基因組織特異性及脅迫表達分析
        3.2.2 CaCPI基因組織特異性表達分析
        3.2.3 GA20ox1在不同株型山茶中的表達分析
    3.3 小結(jié)
第四章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因植物表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化煙草
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 目的基因植物表達載體的構(gòu)建
        4.2.2 轉(zhuǎn)基因煙草的RT-PCR鑒定
        4.2.3 轉(zhuǎn)基因煙草的Southern雜交鑒定
        4.2.4 轉(zhuǎn)基因植株不同株系間目的基因表達分析
    4.3 小結(jié)
第五章 山茶花APX、CPI、GA20ox1基因功能分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 正義CaAPX基因轉(zhuǎn)化煙草抗寒、耐熱性檢測
        5.2.2 正義CaCPI轉(zhuǎn)化煙草抗蟲檢測
        5.2.3 正、反義CrGA20ox1基因轉(zhuǎn)化煙草株型及內(nèi)源激素的檢測
    5.3 小結(jié)
第六章 木糖篩選系統(tǒng)對杜鵑紅山茶愈傷組織誘導(dǎo)及生長的影響
    6.1 材料與方法
        6.1.1 材料
        6.1.2 方法
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 xylA基因獲得及其酶切驗證
        6.2.2 pCAMBIA1300-xylA重組載體的鑒定
        6.2.3 xylA基因?qū)δＪ街参镞z傳轉(zhuǎn)化的影響
        6.2.4 杜鵑紅山茶各外植體木糖篩選濃度的優(yōu)化
        6.2.5 木糖篩選系統(tǒng)對杜鵑紅山茶愈傷誘導(dǎo)及生長的作用
    6.3 小結(jié)
第七章 結(jié)論與討論
    7.1 結(jié)論
    7.2 討論
    7.3 展望
參考文獻
在讀期間的學(xué)術(shù)研究
致謝
中文詳細(xì)摘要


【參考文獻】：
期刊論文
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[6]矮壯素對毛竹的矮化效應(yīng)研究[J]. 周建革,范明香,余水生,吳禮棟.  世界竹藤通訊. 2012(04)
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博士論文
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碩士論文
[1]擬南芥赤霉素20-氧化酶3基因在ABA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的功能分析[D]. 申醒.吉林大學(xué) 2014
[2]棉花GhGME基因的克隆及其表達分析[D]. 王江英.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]過量表達毛白楊A(yù)PX基因增強植物對非生物脅迫的抗性[D]. 馬箐.山東師范大學(xué) 2012
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[5]龍眼胚性培養(yǎng)物胞質(zhì)型apx基因克隆及其表達研究[D]. 邵巍.福建農(nóng)林大學(xué) 2008
[6]丹參APX和GPX基因克隆及其表達分析[D]. 韓立敏.陜西師范大學(xué) 2007
[7]毛白楊巰基蛋白酶抑制劑基因克隆研究[D]. 覃慶鋒.北京林業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3334373