植物內(nèi)生菌定居在健康植物組織內(nèi)部,與宿主植物之間形成了一種互惠共生的關系,可以影響宿主植物的生長發(fā)育及其次級代謝產(chǎn)物的合成代謝,協(xié)調(diào)植物與環(huán)境的關系。而內(nèi)生菌所在的宿主特殊環(huán)境,又使其可以產(chǎn)生新型活性次生代謝產(chǎn)物。近年來,內(nèi)生菌及其代謝產(chǎn)物在醫(yī)藥、農(nóng)林、環(huán)境等領域具有廣泛的應用前景。黃花蒿（Artemisia annuaL.）是我國傳統(tǒng)藥用植物,已報道的內(nèi)生菌資源豐富多樣,具有巨大的開發(fā)潛力。本文針對一株有生物活性的黃花蒿內(nèi)生草酸青霉菌（Penicillium oxalicum B4）在青蒿素生物合成調(diào)控、青蒿酸轉(zhuǎn)化和三氯生的降解方面開展深入探討,挖掘內(nèi)生菌對青蒿素合成的調(diào)控機制,尋找新型有活性的青蒿酸衍生物,開拓內(nèi)生菌在環(huán)境污染物的降解應用。主要結果如下:本文從野生黃花蒿中分離得到一株內(nèi)生真菌B4,通過形態(tài)觀察以及核糖體基因ITS序列分析,并構建系統(tǒng)發(fā)育樹,發(fā)現(xiàn)該內(nèi)生真菌與草酸青霉（P.oxalicum EU434727.1）等很多草酸青霉菌株的同源性達到99%。該序列已提交GenBank,登記號為FJ196840,定名為Penicillium oxalicum B4。通過對黃花嵩組... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：235 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－６內(nèi)生菌對黃花蒿生長的影響［１５Ｇ］??

黃花蒿內(nèi)生草酸青霉菌（尸如ｍ〇ｘａ／／ｇ＜ｍＢ４）促進青蒿素合成、轉(zhuǎn)化青蒿酸和降解三氣生的研究?第二章??青蒿素的含量也提高了?１．７２倍。而Ｂ４在侵染種子萌發(fā)苗后，也表現(xiàn)一致的趨勢。從??種子萌發(fā)苗的株高和干重來看，平均值小于對照組的株高和干重，但無統(tǒng)計學意義。??并且明顯刺激黃花蒿中青蒿酸及青蒿素的合成。經(jīng)Ｂ４處理過的黃花蒿中青蒿素的含??量為０．０２５?ｍｇ／ｇ，與對照相比青蒿素的含量提高了?７．７倍。青蒿酸的含量２．３６?ｍｇ／ｇ，??與對照相比青蒿酸的含量提高了?２．４倍。說明本研究所分離得到的戶ａｘａ／／ｃＭｍ?Ｂ４對??黃花蒿的生長的高度有抑制作用，但對生物量無影響，同時對青蒿素和青蒿酸的合成??有促進作用。??圖２－１內(nèi)生菌回接黃花蒿組培苗照片??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ａ．?ａｎｎｕａ?ｐｌａｎｔｌｅｔ?ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ??１２?—??＾?＊?＊?ＤＡ．?ａｎｎｕａ?ｐ?ｌａｎｔｌｅｔ??５－??１??Ｔ?■?Ａ．?ａｎｎｕａ?ｓｅｅｄｌｉｎｇ??１?８??１６?丁?１??Ｈｉ??０?＿Ｌ＿??ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｂ４??Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ??５３??

黃花蒿內(nèi)生草酸青霉菌促進青蒿素合成、轉(zhuǎn)化青蒿酸和降解三氯生的研究?第二章??２．３．２活性菌種的鑒定??內(nèi)生真菌（Ｂ４）形態(tài)學觀察，如圖２－３。該菌在ＰＤＡ培養(yǎng)基中生長迅速，２８°Ｃ??下僅需５ｄ培養(yǎng)即可形成成熟的菌斑。在培養(yǎng)初期，菌斑表面為白色絨毛狀。隨著培??養(yǎng)時間的延長，菌斑表面逐漸形成青綠色。最終大量孢子產(chǎn)生表面為暗綠色，背面淡??黃色。在光學顯微鏡下分生孢子梗叢生，成帚狀分枝，頂端輪生穗狀小梗并排列著分??生孢子，分生孢子橢圓形，表面光滑，并形成分生孢子鏈。這些特征符合青霉屬形態(tài)??特征。??經(jīng)過ＰＣＲ擴增，獲得Ｂ４菌的ｒＤＮＡＩＴＳｌ－ＩＴＳ４?（５．８ＳｒＤＮＡ及ＩＴＳ）片段。經(jīng)測??序獲得亞基，共５６４個堿基。該序列己提交ＧｅｎＢａｎｋ，登記號為ＦＪ１９６８４０。該菌測??序堿基片段序列與ＧｅｎＢａｎｋ己知菌種的序列進行Ｂｌａｓｔ比對，進一步利用ＭＥＧＡ５構??建系統(tǒng)進化樹，結果見圖２－４，可知Ｂ４與／５?ｏｘａ／／ｃｗｍ?ＥＵ４３４７２７．１、Ｚ５?ｏｘａ／／ｃ訓??ＡＦ０３４４５５．１、戶ｏ；ｒａ／／ｃ＿?ｓｔｒａｉｎ?ＴＭＰＳ３?ＤＱ９８６３５５．１等很多草酸青霉菌株的同源性達??到９９％，結合所觀察的菌的形態(tài)特征，確定Ｂ４為草酸青霉，并將其命名為戶ｏｘａｆｃｗｍ??Ｂ４。??Ｈｎ??Ｋｍ??圖２－３內(nèi)生真菌Ｂ４的形態(tài)特征??Ａ：菌落形態(tài)正面；Ｂ：菌落形態(tài)背面；Ｃ：分生孢子梗；Ｄ：孢子??Ｆｉｇ．?２－３?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｆｅａｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ?ｆｕｎｇｉ?Ｂ４??５５??

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[5]黃花蒿內(nèi)生放線菌A5次生代謝產(chǎn)物的研究[D]. 于哲.西北農(nóng)林科技大學 2014
[6]黃花蒿青蒿酸資源及其制備工藝研究[D]. 徐定華.吉首大學 2014
[7]菌根真菌對黃花蒿青蒿素含量的影響[D]. 陳思安.東北林業(yè)大學 2011



本文編號：3315703