口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）引起的、以偶蹄動(dòng)物發(fā)病為主的一種急性、熱性、高度接觸傳染性動(dòng)物疫病。FMD是對(duì)畜牧業(yè)發(fā)展威脅最大烈性傳染病之一,被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（World Organisation for Animal Health,OIE）列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病。目前,包括我國(guó)在內(nèi)的許多國(guó)家,采取免疫接種疫苗的措施控制口蹄疫。不同時(shí)期,口蹄疫弱毒疫苗、滅活疫苗等使用,在控制口蹄疫的大流行中發(fā)揮了重要作用。弱毒疫苗因毒力返強(qiáng)引起口蹄疫流行而被停用。目前,大多使用的滅活疫苗,雖然較弱毒疫苗安全,但在病毒大量培養(yǎng)和滅活等生產(chǎn)過(guò)程中仍然存在極大的生物安全風(fēng)險(xiǎn),而且對(duì)疫苗生產(chǎn)的設(shè)施條件要求高,同樣存在滅活不完全而引起口蹄疫暴發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。因此,需要研究安全、有效的口蹄疫新型疫苗。隨著免疫學(xué)和基因工程技術(shù)的快速發(fā)展,表達(dá)口蹄疫病毒主要功能結(jié)構(gòu)蛋白基因,在體外組裝病毒樣顆粒,以此為抗原研制疫苗成為口蹄疫疫苗研究熱點(diǎn)。本研究利用原核表達(dá)系統(tǒng),將Asia 1型口蹄疫病毒的VP0、VP1、V... 

【文章來(lái)源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

目的基因的凝膠電泳Fig.2-1IdentificationoftargetgenebyRT-PCR250

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文第二章重組載體的構(gòu)建及其表達(dá)和病毒樣顆粒組裝24圖2-2重組融合蛋白SDS-PAGE（A，1-4）和Westernblot（B，5-8）鑒定Fig.2-2ExpressionandassemblyofpurifiedFMDVcapsidproteins.單獨(dú)表達(dá)：SUMO-VP3（1和8）36Kd，SUMO-VP1（2和7）35kD，SUMO-VP0（3和6）45kD同時(shí)表達(dá)：SUMO標(biāo)記蛋白復(fù)合物（4和5）A.SDS-PAGE(leftpanel,lanesM,1–4)andBWesternblot(rightpanel,lanes5–8)analysisofthepurifiedcapsidproteincomplexeswithoutUlp1proteasetreatment,includingtheSUMO-taggedFMDVVP3proteinexpressedindividually(lanes1and8),theSUMO-taggedFMDVVP1proteinexpressedindividually(lanes2and7),theSUMO-taggedFMDVVP0proteinexpressedindividually(lanes3and6)andthethreeSUMO-taggedproteincompleximultaneouslyexpressed(lanes4and5).3.4病毒樣顆粒的體外組裝用小泛素樣修飾蛋白酶酶切融合蛋白的SUMO標(biāo)簽，經(jīng)SDS-PAGE和Westernblot可見(jiàn)預(yù)期大小的VP0（33kD）、VP3（24kD）和VP1（23kD）蛋白（圖2-3）。酶切產(chǎn)物經(jīng)磷鎢酸染色，用透射電鏡觀察，可見(jiàn)約20nm左右，形態(tài)如口蹄疫病毒的圓形顆粒，電鏡觀察結(jié)果證實(shí)在體外成功組裝獲得了病毒樣顆粒（圖2-4）。AB圖2-3酶切純化融合蛋白SDS-PAGE(1)和Westernblot（2）鑒定Fig.2-3SDS-PAGE(lane1)andWesternblot(lane2)analysisofthepurifiedthreeSUMO-taggedproteincomplexafterproteasedigestionandthesecondaffinitychromatographyM:蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；VP0：33kD；VP3：24kD；VP1：23kDM：ProteinMarker；VP0：33kD；VP3：24kD；VP1：23kDSDS-PAGE(lane1)andWesternblot(lane2)analysisofthepurifiedthreeSUMO-taggedproteincomplexafterp

analysisofthepurifiedcapsidproteincomplexeswithoutUlp1proteasetreatment,includingtheSUMO-taggedFMDVVP3proteinexpressedindividually(lanes1and8),theSUMO-taggedFMDVVP1proteinexpressedindividually(lanes2and7),theSUMO-taggedFMDVVP0proteinexpressedindividually(lanes3and6)andthethreeSUMO-taggedproteincompleximultaneouslyexpressed(lanes4and5).3.4病毒樣顆粒的體外組裝用小泛素樣修飾蛋白酶酶切融合蛋白的SUMO標(biāo)簽，經(jīng)SDS-PAGE和Westernblot可見(jiàn)預(yù)期大小的VP0（33kD）、VP3（24kD）和VP1（23kD）蛋白（圖2-3）。酶切產(chǎn)物經(jīng)磷鎢酸染色，用透射電鏡觀察，可見(jiàn)約20nm左右，形態(tài)如口蹄疫病毒的圓形顆粒，電鏡觀察結(jié)果證實(shí)在體外成功組裝獲得了病毒樣顆粒（圖2-4）。AB圖2-3酶切純化融合蛋白SDS-PAGE(1)和Westernblot（2）鑒定Fig.2-3SDS-PAGE(lane1)andWesternblot(lane2)analysisofthepurifiedthreeSUMO-taggedproteincomplexafterproteasedigestionandthesecondaffinitychromatographyM:蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；VP0：33kD；VP3：24kD；VP1：23kDM：ProteinMarker；VP0：33kD；VP3：24kD；VP1：23kDSDS-PAGE(lane1)andWesternblot(lane2)analysisofthepurifiedthreeSUMO-taggedproteincomplexafterproteasedigestionandthesecondaffinitychromatography

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3314600