本文關(guān)鍵詞：水稻BAHD�；D(zhuǎn)移酶的功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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水稻t-dna插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和osatrz2的克隆與功能鑒定.pdf

文檔介紹：
水稻T-DNA皤入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和偽aTRZ2的克隆與功能鑒定目錄摘要?????????????????????????????????iAbs訂act???.......?.................?...????????????????????????..??.?.fii縮略詞表???????????????????????????????vi1前言????????????????????????????????.11.1水稻功能基因組學(xué)研究進展????????????????????l1.1.1水稻基因組測序??????????????????????.11.1.2水稻全基因組的表達分析??????????????????.21.1.3利用突變體開展功能基因組學(xué)研究??????????????.31.1.3.1%DNA插入突變體庫的創(chuàng)建與利用????????????31.1.3.2轉(zhuǎn)座子插入突變體庫的構(gòu)建與利用????????????81.1.3.3反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子插入突變體庫的構(gòu)建與利用?????????91.1.3.4物理和化學(xué)誘變突變體庫的構(gòu)建與利用?????????.101.1.3.5其它產(chǎn)生突變體的方法及利用?????????????.111.1.4利用種質(zhì)資源進行功能基因組學(xué)研究?????????????121.2側(cè)翼序列分離方法和數(shù)據(jù)庫介紹?????????????????..13—1.2.1分離側(cè)寞序列的常用方法??????????????????131.2.2主要的水稻側(cè)翼序列數(shù)據(jù)庫介紹???????????????171.3水稻基因組中T-DNA和Tosl7插入位點的分布與序列特征??????181.3.1T-DNA插入位點的分布與序列特征??????????????181.3.2Tosl7插入位點的分布與序列特征??????????????一191.4葉綠體的發(fā)育及其分子調(diào)控機制?????????????????.19r.4.1葉綠體的結(jié)構(gòu)和發(fā)育過程??????????????????191.4.2葉綠體發(fā)育的分子基礎(chǔ)???????????????????211.4.2.1葉綠體的發(fā)育受到細胞核和葉綠體基因組的雙重調(diào)控???.211.4.2.2葉綠體DNA復(fù)制和代謝相關(guān)基因????????????221.4.2.3葉綠體轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)相關(guān)基因???????????????.221.4.2.4葉綠體翻譯系統(tǒng)相關(guān)基因和突變體???????????.231.4.2.5葉綠體蛋白輸入相關(guān)基因???????????????.24萬方數(shù)據(jù)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2014屆博士研究生學(xué)位(畢業(yè))論文114.2.6核.質(zhì)信號傳導(dǎo)途徑相關(guān)基因??????????????.251.5tRNaseZ研究進展????????????????????????251.5.1tRNA3’末端加工與tRNaseZ的發(fā)現(xiàn)?????????????..251.5.2tRNaseZ的種類和分布???????????????????..261.5.3tRNageZ屬于金屬一p一內(nèi)酰***酶(metallo—p—lactamase)超家族???271.5.4tRNaseZ的功能????????.??????????????281.5.5植物中tRNaseZ的研究進展?????????????????291.6研究目的和意義????????????????????????。302材料和方法?????????????????????????????32.1實驗材料???????????????????????????.。3l2.1.1植物材料??????????????????????????3l2.1.2載體和菌株????????????????????????3l2.2實驗方法???????????????????????????。322.2.1突變體的種植和篩選????????????????????322.2.2水稻DNA的抽提?????????????????????.322.2.2.1小樣法快速制備少量水稻總DNA????????????322.2.2.22mL離心管法快速制備水稻高質(zhì)量總DNA????????.322.2.2.3大樣法制備水稻高質(zhì)量總DNA?????????????332.2.3PCR陽性檢測??????????????????????????????332.2.4T-DNA和Tosl7側(cè)翼序列的分離方法?????????????342.2.4.1TAIL.PCR?????????????????????????????..342.2.4.2反向PCR?????????????????????????????.352.2.4.3接頭PCR?????????????????????????..362.2.4.4電泳檢測和測序???????????????????..372.2.5側(cè)翼序列的分析??????????????????????372.2.6其他研究小組側(cè)翼序列的收集????????????????382.2.7芯片表達譜數(shù)據(jù)的處理???????????????????382.2.8葉綠素含量測定??????????????????????382.2.9osatrz2葉片和愈傷的超微結(jié)構(gòu)觀察和分析???????????392.2.10PCR檢測插入突變體后代基因型??????????????一39萬方數(shù)據(jù)水稻T.DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定2.2.1l遺傳轉(zhuǎn)化載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)化????????????????.402.2.12osatrz2互補植株的分子鑒定????????????????.412.2.13水稻各組織總RNA抽提、檢測及濃度測定??????????422.2.14反轉(zhuǎn)錄、反轉(zhuǎn)錄PCR和實時定量PCR????????????422.2.15小RNA分子的PAGE.northern雜交?????????????442.2.16OsaTRZ2亞細胞定位分析?????????????????..452.2.17OsaTRZ2蛋白的原核表達與純化??????????????..452.2.18tRNA前體的體外轉(zhuǎn)錄???????????????????462.2.19tRNA3’末端體外加工實驗?????????????????.463結(jié)果與分析?????????????????????????????..483.1水稻T-DNA插入突變體庫To代植株陽性檢測???????????..483.2T-DNA和Tosl7側(cè)翼序列的分離、命名與驗證???????????..483-3T-DNA和Tosl7插入位點的分布與序列特征?????????????493.3.1側(cè)翼序列的分類和插入位點的確定??????????????493.3.2不同遺傳背景下T-DNA和Tosl7插入位點的分布特征相似???.

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