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《延邊大學(xué)》 2015年

Human iPS培養(yǎng)液對延邊黃牛體外受精卵發(fā)育的影響

高青山  

【摘要】：為加強(qiáng)延邊黃牛品種保存,保持物種的多樣性和保護(hù)生態(tài)平衡,為延邊黃牛品種資源開發(fā)和永續(xù)利用,本研究圍繞如何提高延邊黃牛體外生產(chǎn)胚胎移植妊娠率的關(guān)鍵點(diǎn),從體外受精胚胎各階段的培養(yǎng)方法,操作技術(shù)及移植囊胚質(zhì)量等環(huán)節(jié)展開了深入研究,結(jié)果如下：1.本試驗(yàn)對延邊黃牛體外胚胎生產(chǎn)體系中,如何提高妊娠率的同時,降低生產(chǎn)成本、簡化操作程序等方面進(jìn)行探索研究。試驗(yàn)結(jié)果表明同培養(yǎng)液條件下廉價的35mm dish組的卵裂率顯著高于(P0.05)昂貴的4孔板組,囊胚發(fā)育率沒有差異；PBS液精子處理組與BO液精子處理組卵裂率與囊胚率均沒有差異,但PBS組相比BO組操作簡便且成本低廉；受精時間的比較研究中PBS 22h組比PBS 6h組,BO 6h、22h組都有顯著性差異(P0.05)。2.提高囊胚質(zhì)量和增加囊胚細(xì)胞數(shù)是十分重要的,含有大量細(xì)胞數(shù)的囊胚有利于單囊胚分析。正常情況下想要進(jìn)行DNA的分析往往需要若干個囊胚才能做到,如果能增加單個囊胚的細(xì)胞數(shù),我們僅需一個囊胚便可進(jìn)行DNA分析。囊胚移植是目前為止牛胚胎移植技術(shù)最常用的方法,高質(zhì)量形態(tài)的囊胚和具有大量細(xì)胞數(shù)的囊胚移植后可提高妊娠率。胚胎干細(xì)胞(ES)是來源于囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(ICM),目前已建立人和小鼠的胚胎干細(xì)胞,但科學(xué)家試圖從家畜建立ES細(xì)胞系都失敗了,部分原因是由于沒有制定合適的培養(yǎng)條件,因此,制備一種可獲得更大內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的新型體外培養(yǎng)體系,來提高ES細(xì)胞系建立的成功率迫在眉睫。.本試驗(yàn)通過比較人誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞(hiPS)培養(yǎng)基與牛體外培養(yǎng)II型(B-IVC-Ⅱ)培養(yǎng)基,探究了兩種培養(yǎng)基對牛體外受精早期胚胎的影響。將體外受精后牛囊胚分別在hiPS培養(yǎng)基、B-IVC-Ⅱ培養(yǎng)基中培養(yǎng)2天,測量囊胚直徑,結(jié)果顯示hiPS培養(yǎng)基組顯著高于B-IVC-Ⅱ培養(yǎng)基組,直徑分別為150.30±29.49μm與195.58±41.59μm(P0.01),并且牛囊胚總細(xì)胞數(shù)hiPS培養(yǎng)基組顯著高于B-IVC-Ⅱ培養(yǎng)基組,相差2倍之多,細(xì)胞數(shù)分別為172.12±45.08,604.83±242.64(P0.01)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,hiPS培養(yǎng)基可以顯著提高牛囊胚的質(zhì)量。3.首次獲得地方特色品種延邊黃牛的體外受精胚胎移植牛。本試驗(yàn)通過以本地飼養(yǎng)量較大的延邊黃牛作為受體母牛,通過胚胎移植技術(shù)手段改善肉牛繁殖效率,增加母牛產(chǎn)仔率等。同期發(fā)情技術(shù)、胚胎移植技術(shù)等生物技術(shù)的研究、改良及推廣,能夠加速規(guī)�；B(yǎng)殖進(jìn)程,在地方特色品種的保護(hù)和擴(kuò)繁上發(fā)揮關(guān)鍵性作用。本實(shí)驗(yàn)表明同期發(fā)情組1(添加維生素ADE)、同期發(fā)情組2和自然發(fā)情各組之間無顯著差異(P0.05),其中受胎率最高組為同期發(fā)情組1,共同期發(fā)情43頭,胚胎移植27頭,妊娠8頭,產(chǎn)犢7頭,其受胎率和產(chǎn)犢率分別是29.63%和16.28%；受胎率最低組為自然發(fā)情組,共胚胎移植19頭,妊娠4頭,產(chǎn)犢2頭(雙胎)見圖4.1,其受胎率和產(chǎn)犢率分別是21.43%和10.53%；同期發(fā)情組2共同期發(fā)情49頭,胚胎移植38頭,妊娠10頭,產(chǎn)犢8頭,其受胎率和產(chǎn)犢率分別是26.28%和21.05%。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S823.81
【目錄】：

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 高青山;Human iPS培養(yǎng)液對延邊黃牛體外受精卵發(fā)育的影響[D];延邊大學(xué);2015年

2 金鑫;延邊黃牛肉質(zhì)性狀相關(guān)功能基因研究[D];延邊大學(xué);2010年

3 田萬年;延邊黃牛背最長肌差異表達(dá)基因的克隆鑒定及特征分析[D];延邊大學(xué);2011年

4 夏廣軍;MiRNA與功能基因轉(zhuǎn)錄組聯(lián)合分析篩選延邊黃牛肉質(zhì)性狀候選基因[D];延邊大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董玉影;貯藏期間不同部位延邊黃牛肉蛋白質(zhì)降解及品質(zhì)分析[D];延邊大學(xué);2015年

2 劉松;海蘭江牧業(yè)延邊黃牛產(chǎn)業(yè)擴(kuò)建項(xiàng)目的投資可行性研究[D];延邊大學(xué);2015年

3 陳娜;補(bǔ)飼亞麻籽對延邊黃牛肌內(nèi)共軛脂肪酸構(gòu)成及其相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];延邊大學(xué);2015年

4 徐曉菲;不同包被材料的γ-氨基丁酸對延邊黃牛瘤胃發(fā)酵特性的影響[D];延邊大學(xué);2015年

5 高嘉敏;延邊黃牛黃體中凋亡相關(guān)基因的表達(dá)研究[D];延邊大學(xué);2015年

6 金穎;成熟期間延邊黃牛肉脂肪酸的組成及品質(zhì)特性的研究[D];延邊大學(xué);2015年

7 吳曉峰;延邊黃牛區(qū)域品牌形象對購買意圖的影響研究[D];延邊大學(xué);2015年

8 唐丹;不同年齡延邊黃牛肉質(zhì)的比較研究[D];延邊大學(xué);2010年

9 元成振;韓延一代牛與延邊黃牛生長發(fā)育規(guī)律的比較研究[D];延邊大學(xué);2002年

10 孫武勝;延邊黃牛成纖維細(xì)胞凋亡及調(diào)控的研究[D];延邊大學(xué);2012年

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