本文關(guān)鍵詞：宿主蛋白NPM1、EB3和HSP47對PEDV復(fù)制影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會論文集》2015年

豬流行性腹瀉病毒CHHeN-ZZ株培養(yǎng)特性研究

李勤楠  周兵強(qiáng)  吳志明  閆若潛  趙雪麗  謝彩華  王淑娟  馬震原  曹偉偉  王東方  李寧  

【摘要】：引言 2010年冬季以來,由豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea,PED)在全國范圍內(nèi)爆發(fā),對哺乳仔豬具有很高的致死率,造成哺乳仔豬腹瀉、嘔吐、脫水、最后衰竭而死,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。本研究通過將河南PEDV流行毒株在Vero細(xì)胞上傳代培養(yǎng),成功分離出適應(yīng)細(xì)胞的PEDV CHHeN-ZZ毒株,并對該分離株的培養(yǎng)特性及與不同背景的臨床血清的交叉保護(hù)性進(jìn)行研究,為后期開展PEDV變異株與疫苗株之間交叉保護(hù)性研究奠定基礎(chǔ)。材料與方法將鑒定為PEDV陽性的仔豬腸內(nèi)容物處理之后,接種于Vero細(xì)胞上,在不含血清的病毒維持液中加入終濃度為10μg/mL的胰酶,進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行RT-PCR、細(xì)胞免疫熒光(IFA)鑒定和基因序列測定;對PEDV分離株的細(xì)胞培養(yǎng),增殖規(guī)律及穩(wěn)定傳代等培養(yǎng)特性進(jìn)行研究;采用固定病毒-稀釋血清的方法,對不同臨床背景血清進(jìn)行抗體中和試驗(yàn)。結(jié)果與討論結(jié)果顯示:將病毒接種Vero細(xì)胞盲傳至第7代,出現(xiàn)細(xì)胞病變(CPE),隨著代次增加,CPE出現(xiàn)時(shí)間變短,呈現(xiàn)規(guī)律性變化,RT-PCR鑒定為陽性,IFA檢測可見特異性熒光,Sl、M、ORF3基因測序結(jié)果為PEDV對應(yīng)基因片段,確認(rèn)分離到一株P(guān)EDV(CHHeN-ZZ)。通過FQ-PCR,繪制胞內(nèi)、胞外病毒一步生長曲線,胞內(nèi)病毒含量0 h~12 h逐步上升,12 h達(dá)到峰值,之后逐漸下降,48 h下降幅度突然增大;胞外病毒24 h~72 h出現(xiàn)快速增加,72 h左右達(dá)到峰值,之后開始逐步下降。PEDV從第20代到第50代,TCID50穩(wěn)定在10~(-5.5)~10~(-6.2)/0.1mL之間,現(xiàn)已傳至50代,TCID50值為10~(-6.11)/0.1mL;對不同代次分離毒株的M基因和S1基因進(jìn)行序列分析,第7代與第50代之間的核苷酸同源性分別為99.6%~99.9%、99.8%~99.9%;分離毒株S1基因與CV777疫苗株同屬于基因Ⅰ群,利用分離毒株進(jìn)行抗體中和試驗(yàn)顯示:臨床上未曾免疫但感染過基因Ⅲ群PEDV的豬場血清中和抗體效價(jià)滴度幾乎為零,而疫苗免疫豬場血清中和抗體效價(jià)在54.1~74.9。本研究成功分離一株P(guān)EDV毒株,生長特性良好,能在細(xì)胞上穩(wěn)定傳代培養(yǎng)�？贵w中和試驗(yàn)證明CV777疫苗株所在基因Ⅰ群毒株與基因Ⅲ群流行毒株之間的免疫交叉性差。本研究為進(jìn)一步研究PEDV的免疫原性及交叉保護(hù)性提供了參考。

【作者單位】：河南科技大學(xué) 河南省動物疫病預(yù)防控制中心
【分類號】：S852.651
【正文快照】：

豬流行性腹瀉病毒CHHeN-ZZ株培養(yǎng)特性研究@李勤楠$河南科技大學(xué)!河南洛陽471003 @周兵強(qiáng)$河南科技大學(xué)!河南洛陽471003 @吳志明$河南省動物疫病預(yù)防控制中心!河南鄭州450008 @閆若潛$河南省動物疫病預(yù)防控制中心!河南鄭州450008 @趙雪麗$河南省動物疫病預(yù)防控制中心!

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