本文關(guān)鍵詞：PPENK-MIDGE-NLS轉(zhuǎn)染白細胞減輕心肌缺血再灌注損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:心肌缺血再灌注損傷是臨床的棘手難題,大量實驗表明心肌缺血預處理/后處理是對抗該損傷的重要機制,而腦啡肽可以模擬該機制從而產(chǎn)生顯著的心肌保護作用。但阿片類藥物用于心肌保護受到諸多限制,基因治療是增加內(nèi)源性腦啡肽的一種有前景的研究方向,本課題構(gòu)建的前腦啡肽原(Preproenkephalin,PPENK)PPENK-MIDGE-NLS基因載體克服了病毒載體和質(zhì)粒載體的缺點,利用其轉(zhuǎn)染免疫細胞,使其于心肌損傷區(qū)域靶向釋放內(nèi)源性腦啡肽,對心肌產(chǎn)生保護作用,并探索一種新的預防和治療心肌缺血再灌注損傷的新方法。方法:利用非病毒、非質(zhì)粒的微量免疫原定義的基因表達(Minimalistic Immunological defined gene expression,MIDGE)方法構(gòu)建前腦啡肽原PPENK-MIDGE-NLS基因載體,靜脈注射轉(zhuǎn)染白細胞,利用白細胞向缺血區(qū)聚集、浸潤的特性,在損傷區(qū)域持續(xù)產(chǎn)生、靶向釋放內(nèi)源性腦啡肽。流式細胞術(shù)證實轉(zhuǎn)染效果,分子生物、免疫組化和放射免疫法測定PPENK-MIDGE-NLS對心肌局部腦啡肽前體、腦啡肽及其代謝產(chǎn)物基因表達和含量的影響,結(jié)合心肌功能、梗死面積的測定及心肌酶譜和炎性因子的變化,評價PPENK-MIDGE-NLS基因載體減輕心肌缺血再灌注損傷的可行性、有效性及對炎性反應的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果:1、利用生物化學方法成功構(gòu)建PPENK-MIDGE-NLS基因載體;2、PPENK-MIDGE-NLS基因載體局部注射時可以轉(zhuǎn)染活體細胞并增加局部PENK蛋白的表達量,靜脈注射時可以轉(zhuǎn)染白細胞并發(fā)生心肌浸潤;3、大鼠心肌缺血再灌注損傷時靜脈注射PPENK-MIDGE-NLS基因載體能夠改善大鼠血流動力學指標,心肌梗死面積減小,CK-MB活性較對照組下降,心肌細胞壞死程度較對照組減輕,心肌細胞凋亡指數(shù)顯著低于對照組(P0.05)。結(jié)論:前腦啡肽原PPENK-MIDGE-NLS基因載體能夠轉(zhuǎn)染大鼠白細胞,在大鼠發(fā)生心肌缺血再灌注損傷時于損傷處心肌靶向釋放內(nèi)源性腦啡肽,對心肌具有保護作用。
【關(guān)鍵詞】：心肌缺血再灌注損傷 腦啡肽 基因載體 白細胞
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R542.2
【目錄】：

• 縮略語表5-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-13
• 文獻回顧13-18
• 實驗一 PPENK-MIDGE-NLS基因載體的構(gòu)建18-36
• 1 材料18-22
• 1.1 主要儀器18-19
• 1.2 主要試劑及耗材19-20
• 1.3 試劑配制20-21
• 1.4 質(zhì)粒及菌株21-22
• 2 方法22-31
• 2.1 重組質(zhì)粒pEGFP-N1-PPENK的構(gòu)建22
• 2.2 NLS與基因載體的連接22-25
• 2.3 MIDGE表達框25-29
• 2.4 PPENK-MIDGE-NLS基因載體的構(gòu)建29-31
• 3 結(jié)果31-34
• 3.1 ODN1與NLS的連接31
• 3.2 HPLC對ODN1-NLS連接產(chǎn)物的檢測31-32
• 3.3 MIDGE表達框的獲得32-33
• 3.4 PPENK-MIDGE-NLS基因載體33-34
• 4 討論34-36
• 實驗二 PPENK-MIDGE-NLS基因載體對活體細胞的轉(zhuǎn)染36-51
• 1 材料36-41
• 1.1 主要儀器36-37
• 1.2 主要試劑及耗材37
• 1.3 試劑配制37-41
• 1.4 實驗動物41
• 2 方法41-45
• 2.1 局部注射PPENK-MIDGE-NLS基因載體的轉(zhuǎn)染效果41-43
• 2.2 靜脈注射PPENK-MIDGE-NLS基因載體的轉(zhuǎn)染效果43-45
• 3 結(jié)果45-49
• 3.1 PPENK-MIDGE-NLS基因載體局部注射對活體細胞的轉(zhuǎn)染效果45-47
• 3.2 靜脈注射基因載體對白細胞的轉(zhuǎn)染47-49
• 4 討論49-51
• 實驗三 PPENK-MIDGE-NLS基因載體減輕心肌缺血再灌注損傷51-62
• 1 材料51-52
• 1.1 主要儀器51-52
• 1.2 主要試劑及耗材52
• 1.3 試劑配制52
• 1.4 實驗動物52
• 2 方法52-55
• 2.1 心肌缺血再灌注損傷模型的建立52-53
• 2.2 PPENK-MIDGE-NLS基因載體對損傷心肌的保護作用53-55
• 3 結(jié)果55-60
• 3.1 血流動力學改變55-57
• 3.2 心肌酶譜的改變57
• 3.3 心肌梗死面積的變化57-58
• 3.4 基因載體在心肌組織的表達58-59
• 3.5 心肌凋亡半定量分析59-60
• 3.6 心肌損傷區(qū)域PENK蛋白表達量的改變60
• 4 討論60-62
• 小結(jié)62-64
• 參考文獻64-67
• 個人簡歷和研究成果67-68
• 致謝68

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