發(fā)布時(shí)間：2017-05-25 03:10

  本文關(guān)鍵詞：新型抗腫瘤五環(huán)三萜類化合物的篩選、相關(guān)分子機(jī)制探討及載藥PLGA納米粒的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:五環(huán)三萜類化合物存在于香料、水果、種子、蔬菜和草藥等植物中,具有廣泛的生物活性,如抗急、慢性炎癥,抑制腫瘤細(xì)胞增生,誘導(dǎo)凋亡,抗血管生成和抗腫瘤侵襲等。PLGA由單體乳酸和羥基乙酸隨機(jī)聚合而成,有良好的生物相容性、無(wú)毒、良好的成囊和成膜的性能。此外,PLGA是一種可降解的功能高分子有機(jī)化合物,PLGA共聚物通過(guò)水解乳酸和羥基乙酸間的酯鍵而降解,這些單體容易通過(guò)體內(nèi)三羧酸循環(huán)分解為二氧化碳和水而代謝掉。PLGA已通過(guò)美國(guó)FDA認(rèn)證,被正式作為藥用輔料收錄進(jìn)美國(guó)藥典,廣泛應(yīng)用于制藥、醫(yī)用工程材料和現(xiàn)代化工業(yè)領(lǐng)域。隨著納米技術(shù)的不斷發(fā)展,PLGA可制備成各種類型的聚合物,如微球、微膠囊、納米顆粒等,攜帶疫苗、多肽、蛋白質(zhì)和小分子藥物,應(yīng)用于納米藥物傳輸系統(tǒng)中。目的:篩選新合成的五環(huán)三萜類化合物的抗腫瘤活性;分析抗腫瘤活性最高的WZW-50誘導(dǎo)不同腫瘤細(xì)胞凋亡和阻遏細(xì)胞周期的的分子機(jī)制;優(yōu)化載藥PLGA納米粒的制備方法,獲得高包封率的載藥納米粒;對(duì)納米粒的形態(tài)特征進(jìn)行表征,并檢測(cè)其對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況。方法:1.MTT法篩選具有抗腫瘤活性的新型五環(huán)三萜類化合物。2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。3.Western blotting檢測(cè)細(xì)胞周期、凋亡相關(guān)通路蛋白。4.利用納米沉淀法制備載藥WZW-50 PLGA納米粒;利用馬爾文粒度測(cè)定儀檢測(cè)納米粒粒徑及Zeta電位。5.利用TEM檢測(cè)PLGA納米粒子的形態(tài)。6.利用HPLC法繪制WZW-50的標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算載藥WZW-50 PLGA納米粒的包封率。7.熒光顯微鏡檢測(cè)載有香豆素-6的PLGA納米粒的細(xì)胞攝取情況。結(jié)果:1.新型五環(huán)三萜類化合物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞存活率有一定影響,其中WZW-50的活性最高。WZW-50對(duì)Hela細(xì)胞的抑制作用呈濃度、時(shí)間依賴性。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示:WZW-50可誘導(dǎo)MCF-7和Hela細(xì)胞凋亡。10μM藥物誘導(dǎo)MCF-7和Hela的凋亡率分別為19.88%和14.01%。3.由Western blotting結(jié)果可推斷WZW-50可能通過(guò)線粒體凋亡通路引起細(xì)胞凋亡;WZW-50阻遏細(xì)胞周期G1/S的進(jìn)程。4.成功制備了PLGA載藥納米粒,PLGA納米粒粒徑為106±1.27 nm,Zeta電位-14.7±0.76 m V。5.TEM顯示載藥WZW-50 PLGA納米粒為形態(tài)均一的圓形粒子。6.HPLC法測(cè)得載藥WZW-50 PLGA納米粒的包封率為72.12±5.68%。7.熒光顯微鏡檢測(cè)結(jié)果表明:載有香豆素-6的PLGA納米粒能夠高效導(dǎo)入Hela和MCF-7細(xì)胞中。8.載藥PLGA納米粒對(duì)Hela和MCF-7細(xì)胞具有明顯的抑制效果。結(jié)論:五環(huán)三萜類衍生物WZW-50能有效地抑制不同腫瘤細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Western blotting結(jié)果表明:WZW-50可能通過(guò)線粒體凋亡通路引起細(xì)胞凋亡;WZW-50能阻遏細(xì)胞周期G1/S的進(jìn)程;平均粒徑為106±1.27 nm的PLGA載藥納米粒可以有效導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞,抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：五環(huán)三萜 抗腫瘤 PLGA納米粒
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R73-36
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-19
• 1. 材料14-16
• 1.1 細(xì)胞14
• 1.2 儀器與試劑14-16
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 2.1 新型抗腫瘤五環(huán)三萜化合物篩選及作用機(jī)理分析16-17
• 2.1.1 新型抗腫瘤五環(huán)三萜化合物的篩選16
• 2.1.2 細(xì)胞凋亡檢測(cè)16
• 2.1.3 Western Blotting分析周期凋亡相關(guān)蛋白16-17
• 2.2 PLGA納米粒的構(gòu)建、表征及效應(yīng)分析17-19
• 2.2.1 PLGA納米粒制備17
• 2.2.2 粒徑、Zeta電位檢測(cè)17
• 2.2.3 透射電鏡觀察納米粒形態(tài)17-18
• 2.2.4 HPLC法測(cè)載WZW-50 PLGA納米粒包封率18
• 2.2.5 熒光顯微鏡觀察腫瘤細(xì)胞攝取納米粒18
• 2.2.6 載藥納米粒對(duì)細(xì)胞存活率的影響18-19
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-26
• 1. 抗腫瘤五環(huán)三萜類化合物的篩選及作用機(jī)理19-23
• 1.1 五環(huán)三萜化合物的MTT結(jié)果19-21
• 1.2 流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)21-22
• 1.3 Western Blotting分析周期相關(guān)蛋白22-23
• 2. PLGA納米粒的構(gòu)建、表征及效應(yīng)分析23-26
• 2.1 PLGA納米粒的粒徑、Zeta電位檢測(cè)23
• 2.2 PLGA納米粒的透射電鏡形態(tài)分析23-24
• 2.3 載WZW-50的PLGA納米粒的包封率24
• 2.4 熒光顯微鏡檢測(cè)納米粒導(dǎo)入細(xì)胞24-25
• 2.5 載WZW-50 PLGA納米粒對(duì)腫瘤細(xì)胞存活率影響25-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-33
• 綜述33-43
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 附錄43-45
• 創(chuàng)新點(diǎn)43-44
• 英文縮寫44-45
• 致謝45-46

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