本文關鍵詞：黑皮質素受體-3與黑皮質素受體-4基因敲除大鼠的代謝表型研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肥胖是指機體由于長期的能量攝入超過消耗而引起能量平衡紊亂,從而導致機體過多的能量以脂肪的形式儲存在體內,且這種脂肪的聚集可能引起機體生理功能出現(xiàn)異�；驖摲T發(fā)其他疾病的一種病理狀態(tài)。肥胖已經(jīng)是一個全球性的健康問題。現(xiàn)階段,發(fā)達國家的肥胖人數(shù)(體重指數(shù)BMI30kg/m2)急劇上升,這種現(xiàn)象如今在發(fā)展中國家也開始出現(xiàn)。肥胖會對身體多個器官造成影響,引起機體代謝紊亂,誘發(fā)2型糖尿病、心血管疾病等慢性病。目前,世界衛(wèi)生組織(World Health Organization, WHO)指出肥胖已經(jīng)成為了世界上危害公共健康問題之一。在科研領域,了解肥胖的機理及如何引起代謝綜合征等相關的研究越來越受到人們的關注,這就需要尋找一個適合的動物模型。下丘腦黑皮質素系統(tǒng)在體重維持和能量穩(wěn)態(tài)中起著非常重要的作用。它在機體內發(fā)揮著整合連接代謝狀態(tài)與控制食欲的神經(jīng)元回路及控制代謝的自主神經(jīng)內分泌系統(tǒng)之間的信號的作用。黑皮質素受體是G蛋白偶聯(lián)受體家族中的成員。目前發(fā)現(xiàn)黑皮質素受體一共有5種,MC1R-MC5R。MC3R和MC4R這兩個中樞黑皮質素受體在調節(jié)能量平衡方面發(fā)揮著重要的作用。MC3R在能量穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著一定調節(jié)作用,而MC4R通過控制食欲調節(jié)能量攝入和能量消耗,并且MC4R突變也是導致人類單基因肥胖的主要原因。與小鼠相比較而言,大鼠模型更適合模擬人類的一些疾病和進行毒理、行為學及營養(yǎng)學的研究。本課題主要利用我們實驗室采用CRISPR/Cas9技術對大鼠基因進行高效敲除獲得的首建MC3R、MC4R單基因敲除和MC3R、MC4R雙基因敲除大鼠。研究MC3R、MC4R單基因敲除和雙基因敲除在大鼠表型的差異,以期分析這些模型在肥胖、糖尿病等代謝性疾病研究中的應用前景。通過對野生型和基因突變型大鼠的表型比較,我們發(fā)現(xiàn)MC3R基因突變型大鼠的腹腔總脂肪比例上升,腎周脂肪細胞體積增大,血液中脂質含量升高,表現(xiàn)出一定的脂代謝異常,但無明顯糖代謝異常。MC4R單基因敲除大鼠和MC3R、MC4R雙基因敲除大鼠則同時表現(xiàn)出明顯的脂質代謝和葡萄糖糖代謝異常,如體重明顯升高,血脂升高,血糖升高,糖耐量異常等一系列代謝紊亂癥狀。并且MC3R、MC4R雙基因敲除大鼠的表型相對于MC4R單基因敲除大鼠要出現(xiàn)的更早。初步認為MC4R單基因敲除大鼠和MC3R、MC4R雙基因敲除大鼠可以作為研究肥胖和由肥胖引起的2型糖尿病模型用于將來的實驗研究。
【關鍵詞】：大鼠 基因敲除 肥胖 MC3R MC4R
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R589.2
【目錄】：

• 內容摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 引言12-17
• 1.1 肥胖的定義及其發(fā)病因素12-13
• 1.2 肥胖的危害及治療13-14
• 1.3 中樞黑皮質素系統(tǒng)的研究進展14
• 1.4 黑皮質素受體(melanocortin receptors,MCRs)的研究進展14-16
• 1.5 本課題研究的目的和意義16-17
• 第二章 材料與方法17-32
• 2.1 實驗材料17-22
• 2.1.1 實驗動物17
• 2.1.2 主要試劑與試劑盒17-18
• 2.1.3 實驗儀器18-20
• 2.1.4 主要實驗耗材20
• 2.1.5 常用試劑配制20-22
• 2.2 實驗方法22-32
• 2.2.1 大鼠基因型鑒定22-25
• 2.2.2 大鼠血糖測量方法25-26
• 2.2.3 大鼠口服葡萄糖耐量實驗(Oral Glucose Tolerance Test,OGTT)26
• 2.2.4 大鼠胰島素耐量實驗(Insulin Tolerance Test, ITT)26
• 2.2.5 大鼠眼眶取血26-27
• 2.2.6 HE染色27-30
• 2.2.7 油紅O染色30
• 2.2.8 大鼠飲食量的測量方法30
• 2.2.9 大鼠飲水量的測量方法30-31
• 2.2.10 大鼠體重測量方法31
• 2.2.11 大鼠體長測量方法31
• 2.2.12 大鼠腰圍測量方法31
• 2.2.13 大鼠血液生化指標的檢測31
• 2.2.14 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析31-32
• 第三章 實驗結果與討論32-71
• 3.1 MC3R與MC4R基因敲除對大鼠個體表型的影響32-38
• 3.1.1 對攝食量、飲水量的影響32-35
• 3.1.2 對體重、腰圍、體長和Lee's指數(shù)的影響35-38
• 3.2 MC3R與MC4R基因敲除對大鼠血液中生化指標的影響38-63
• 3.2.1 對血清中甘油三酯、總膽固醇、脂蛋白膽固醇及游離脂肪酸的影響38-48
• 3.2.2 對血清中丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、尿酸和肌酐的影響48-56
• 3.2.3 對血清中胰島素、瘦素和血漿中糖化血紅蛋白的影響56-60
• 3.2.4 MC3R與MC4R基因敲除對大鼠血口服葡萄糖耐量的影響60-63
• 3.3 MC3R與MC4R基因敲除對大鼠組織器官的影響63-71
• 3.3.1 對大鼠臟器系數(shù)的影響63-66
• 3.3.2 對大鼠脂肪組織和肝臟組織的影響66-71
• 全文總結與討論71-76
• 1. 總結71-73
• 2. 討論73-75
• 3. 展望75-76
• 參考文獻76-83
• 附錄Ⅰ 縮略詞表83-84
• 附錄Ⅱ 攻讀碩士學位期間所獲學術成果84-85
• 致謝85-86

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