本文關鍵詞：蛇莓提取物抗單純皰疹病毒的有效部位研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過蛇莓體外抗病毒效果,篩選出敏感病毒株,從蛇莓中提取分離出具有體外抗單純皰疹病毒(HSV-1)活性的有效部位,通過體內實驗驗證該有效部位的抗病毒效果,并初步探討該有效部位抗HSV-1的作用機制。方法:采用中性紅染色法和觀察細胞病變(CPE)法檢測蛇莓提取物的體外滅活病毒作用,并以體外抗病毒治療指數(shù)(TI)為指標,對蛇莓的抗病毒譜進行篩選,確立其病毒敏感株;將蛇莓水提液進行醇沉工藝優(yōu)化,得到最佳醇沉工藝;選取三種類型大孔吸附樹脂對蛇莓上清液進行分離,以體外抗病毒治療指數(shù)(TI)為指標,篩選出最佳的大孔吸附樹脂;蛇莓上清液經(jīng)過D101大孔樹脂吸附后,依次用水、25%乙醇進行洗脫,以體外抗病毒治療指數(shù)(TI)為指標,得到抗病毒有效部位,然后采用制備薄層分離,進一步確定其有效部位;用HSV-1建立小鼠肝炎模型,對蛇莓有效部位體內抗病毒活性進行評價;建立4種形式的病毒-細胞感染模型,對有效部位的抗HSV-1作用機制進行初步探討。結果:在體外抗病毒譜篩選實驗中,蛇莓提取物抗HSV-1的作用最為明顯,其治療指數(shù)(TI)是15.09;最佳醇沉工藝為藥液濃縮比1:1.3,醇沉濃度為60%,醇沉時間為24h;使用三種類型的大孔吸附樹脂對上清液進行分離,得出D101型大孔樹脂抗病毒效果較好;通過大孔樹脂及制備薄層分離得到斑點部位有顯著抗病毒效果,TI為51.34。以HSV-1建立小鼠肝炎模型,經(jīng)灌胃給藥,取蛇莓組肝組織與病毒組比較,從肝組織外觀可以觀察到肝組織的病變程度有所減輕,通過動物肝組織病理指數(shù)分析,蛇莓組與病毒模型組相比(P=0.0270.05)有顯著性差異。斑點部位抗HSV-1的作用機制結果發(fā)現(xiàn)該有效部位對病毒無直接殺滅作用,而是對病毒的穿入產(chǎn)生影響,減少細胞與病毒的結合,其次可能是對HSV-1的某功能蛋白產(chǎn)生了影響,抑制了病毒的反轉錄,復制過程。結論:本實驗以體外抗病毒治療指數(shù)(TI)為評價指標,對蛇莓中抗病毒活性部位逐步分離純化,通過體內實驗發(fā)現(xiàn)斑點部位可以抑制由HSV-1引起的小鼠肝組織感染,表明其具有較為顯著的體內抗病毒的作用。該有效部位可阻止病毒的穿入,并可抑制病毒的生物合成,但無直接殺傷作用。
【關鍵詞】：蛇莓 單純皰疹病毒 提取分離 有效部位 抗病毒
【學位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285;R284.2
【目錄】：

• 提要3-4
• Abstract4-10
• 引言10-11
• 實驗綜述11-25
• 1 蛇莓的研究概況11-16
• 1.1 蛇莓的形態(tài)特征及資源分布11
• 1.2 蛇莓的化學成分11-13
• 1.3 蛇莓的藥理作用13-14
• 1.4 蛇莓的臨床應用14-16
• 1.5 蛇莓的毒副作用16
• 2 單純皰疹病毒的研究概況16-23
• 2.1 HSV的生物學特性及結構17
• 2.2 HSV發(fā)病機制17-19
• 2.3 HSV疫苗研究的現(xiàn)狀19-20
• 2.4 化學藥物治療HSV現(xiàn)狀20-21
• 2.5 中草藥抗HSV現(xiàn)狀21-23
• 3 課題研究內容23-24
• 4 技術路線24-25
• 實驗研究25-52
• 第一部分 蛇莓體外抗病毒的篩選25-30
• 1 實驗材料25-26
• 1.1 儀器25
• 1.2 藥品與試劑25-26
• 1.3 細胞株26
• 1.4 病毒株26
• 1.5 培養(yǎng)液26
• 2 實驗方法26-28
• 2.1 蛇莓提取液的制備26
• 2.2 陽性對照藥物的制備26
• 2.3 病毒滴度的測定26-27
• 2.4 抗病毒實驗27-28
• 3 實驗結果28-29
• 3.1 各病毒TCID50的測定28
• 3.2 藥物抗病毒篩選結果28-29
• 4 討論29-30
• 第二部分 蛇莓水提液醇沉工藝優(yōu)化30-33
• 1 實驗材料30
• 1.1 實驗儀器30
• 1.2 藥品與試劑30
• 1.3 細胞株與病毒株30
• 1.4 培養(yǎng)液30
• 2 實驗方法30-31
• 2.1 醇沉工藝正交試驗30
• 2.2 體外抗病毒實驗30-31
• 3 實驗結果31-32
• 4 討論32-33
• 第三部分 大孔吸附樹脂的篩選33-37
• 1 實驗材料33
• 1.1 實驗儀器33
• 1.2 藥品與試劑33
• 1.3 細胞株與病毒株33
• 1.4 培養(yǎng)液33
• 2 實驗方法33-35
• 2.1 大孔吸附樹脂的預處理33
• 2.2 樣品溶液的制備33-34
• 2.3 上樣及洗脫34
• 2.4 體外抗病毒實驗34-35
• 3 實驗結果35
• 4 討論35-37
• 第四部分 蛇莓有效部位的精制及鑒定37-42
• 1 實驗材料37
• 1.1 實驗儀器37
• 1.2 試劑與藥品37
• 1.3 細胞株與病毒株37
• 1.4 培養(yǎng)液37
• 2 實驗方法37-40
• 2.1 D101大孔樹脂的分離37-38
• 2.2 制備薄層分離38-40
• 2.3 斑點部位的理化鑒定40
• 3 實驗結果40-41
• 3.1 薄層分離有效部位40-41
• 3.2 斑點部位鑒別結果41
• 4 討論41-42
• 第五部分 蛇莓有效部位的體內抗病毒實驗42-49
• 1 實驗儀器與材料42
• 1.1 儀器42
• 1.2 藥品與試劑42
• 1.3 病毒株42
• 1.4 動物42
• 2 實驗方法42-44
• 2.1 病毒ID50的測定42
• 2.2 蛇莓有效斑點對小鼠毒性的測定42-43
• 2.3 藥物體內抗病毒試驗43-44
• 2.4 統(tǒng)計學方法44
• 3 實驗結果44-48
• 3.1 病毒ID50的測定44
• 3.2 斑點部位對小鼠毒性的測定44
• 3.3 藥物體內抗病毒實驗44-48
• 4 討論48-49
• 第六部分 有效部位抗HSV-1 機理的初步研究49-52
• 1 實驗儀器與材料49
• 1.1 儀器49
• 1.2 藥品與試劑49
• 1.3 細胞株與病毒株49
• 1.4 培養(yǎng)液49
• 2 實驗方法49-50
• 2.1 制備多孔板內單層細胞49
• 2.2 病毒擴增49-50
• 2.3 藥物對細胞的毒性測定50
• 2.4 藥物體外抗HSV-1 機理實驗50
• 3 實驗結果50-51
• 4 討論51-52
• 結語52-54
• 參考文獻54-59
• 致謝59-60
• 附錄60-65
• 詳細摘要65-69

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