β-螺旋蛋白相關(guān)性神經(jīng)變性病(β-propeller protein-associated neurodegeneration,BPAN),是一種X染色體顯性神經(jīng)退行性疾病,其臨床進(jìn)程主要分為兩個(gè)階段:在兒童時(shí)期患者表現(xiàn)為認(rèn)知和運(yùn)動(dòng)障礙,發(fā)育遲緩,基本上是靜止的;到青春期或成年早期患者發(fā)生肌張力障礙、帕金森綜合征,并且患者的腦部核磁共振圖像(MRI)顯示大腦蒼白球和黑質(zhì)部位存在異常的鐵積累。目前研究表明,BPAN患者體內(nèi)均存在自噬相關(guān)基因WDR45突變,并且WDR45突變后導(dǎo)致自噬受損是BPAN發(fā)病的主要原因。在此之前,我們實(shí)驗(yàn)室報(bào)道了一例3歲大的BPAN病例,該患者主要癥狀表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)和認(rèn)知障礙、發(fā)育遲緩、伴有癲癇性抽搐、鐵代謝異常等,經(jīng)全外顯子測(cè)序顯示該患者WDR45存在一個(gè)新發(fā)突變(NM₀07075.3,c.1040₁041del,p.Glu347Glyfs*7),并且她的姐姐與父親母親均不攜帶致病位點(diǎn),所以判定該患者是BPAN患者。為了進(jìn)一步研究BPAN的致病機(jī)制,本課題將以此突變位點(diǎn)通過(guò)一系列分子生物學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)行探索。1....

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 β-螺旋蛋白相關(guān)性神經(jīng)變性病
    1.2 自噬
    1.3 WDR45
    1.4 鐵沉積
    1.5 研究課題
第二章 WDR45 基因突變導(dǎo)致細(xì)胞自噬通路受損
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.3 試劑配制方法
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 DH5α感受態(tài)的制備
        2.2.4 載體構(gòu)建
        2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.6 細(xì)胞蛋白提取
        2.2.7 Western Blot
        2.2.8 免疫熒光
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 WDR45 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.3.2 瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建及自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平驗(yàn)證
        2.3.3 穩(wěn)定表達(dá)載體構(gòu)建及自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平驗(yàn)證
    2.4 討論
第三章 鑒定與WDR45 相互作用的蛋白
    3.1 實(shí)驗(yàn)儀器與實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.3 試劑配制方法
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 細(xì)胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.2.3 載體構(gòu)建
        3.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.2.5 蛋白提取
        3.2.6 Western Blot
        3.2.7 免疫共沉淀
        3.2.8 免疫熒光
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 互作蛋白的尋找及鑒定
        3.3.2 Tf R1 通過(guò)自噬降解
    3.4 討論
第四章 WDR45 突變后導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鐵含量增加
    4.1 實(shí)驗(yàn)儀器與實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.3 試劑配制方法
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 細(xì)胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        4.2.3 載體構(gòu)建
        4.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.2.5 蛋白提取
        4.2.6 Western Blot
        4.2.7 細(xì)胞總鐵含量測(cè)定
        4.2.8 活細(xì)胞Fe2+染色
    4.3 結(jié)果
    4.4 討論
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)況及聯(lián)系方式



本文編號(hào)：3786501