研究目的:分析蛋白質(zhì)精氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶1(protein arginine methyltransferase 1,PRMT1)在肝正常組織及肝癌組織中表達(dá)量的差別。檢測PRMT1在三種肝癌細(xì)胞系(HepG2、Bel-7402及SMMC-7721)的基礎(chǔ)表達(dá)量。探討PRMT1對肝癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)行為的影響,并研究PRMT1在肝癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition,EMT)中作用,進(jìn)一步探究其作用的分子機(jī)制。研究方法:在生物信息數(shù)據(jù)庫中分析肝正常組織及肝癌組織中PRMT1的mRNA及蛋白質(zhì)水平的表達(dá),進(jìn)一步分析PRMT1表達(dá)量與肝癌患者生存期的關(guān)系。用Western Blot、定量PCR分別檢測HepG2、Bel-7402及SMMC-7721三種肝癌細(xì)胞中PRMT1蛋白質(zhì)及mRNA的基礎(chǔ)表達(dá)水平;用干擾質(zhì)粒sh-PRMT1進(jìn)行慢病毒包裝,收集病毒感染PRMT1表達(dá)量相對較高的肝癌細(xì)胞,篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株;構(gòu)建PRMT1過表達(dá)Flag-PRMT1質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染至PRMT1表達(dá)量相對較低的肝癌細(xì)胞中,用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)株,并用Wes...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 肝癌
        1.1.2 蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶 1
        1.1.3 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition, EMT）
        1.1.4 TGF-β/Smad信號通路
    1.2 研究目的、內(nèi)容與技術(shù)路線
        1.2.1 研究目的
        1.2.2 研究內(nèi)容
        1.2.3 研究技術(shù)路線圖
第二章 應(yīng)用數(shù)據(jù)庫分析PRMT1在肝癌組織中的表達(dá)
    2.1 所用數(shù)據(jù)庫
    2.2 分析過程
        2.2.1 分析PRMT1在肝癌組織中mRNA水平的表達(dá)
        2.2.2 分析PRMT1在肝癌組織中蛋白質(zhì)表達(dá)量
        2.2.3 分析PRMT1表達(dá)量與肝癌患者生存期的關(guān)系
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 肝癌組織中PRMT1的mRNA水平呈高表達(dá)
        2.3.2 肝癌組織中PRMT1的蛋白質(zhì)水平呈高表達(dá)
        2.3.3 PRMT1的表達(dá)量與肝癌患者生存期相關(guān)
    2.4 討論
第三章 構(gòu)建質(zhì)粒并篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株
    3.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        3.1.1 肝癌細(xì)胞和質(zhì)粒
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.5 試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 DH-5α/ Stbl3感受態(tài)細(xì)胞制備
        3.2.3 過表達(dá)質(zhì)粒Flag-PRMT1構(gòu)建
        3.2.4 過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞篩選
        3.2.5 病毒包裝
        3.2.6 干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞篩選
        3.2.7 RNA提取
        3.2.8 定量PCR
        3.2.9 Western Blot
    3.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 PRMT1在不同肝癌細(xì)胞系中表達(dá)的差異
        3.4.2 PCR擴(kuò)增PRMT1
        3.4.3 pCMV6-Entry質(zhì)粒雙酶切鑒定
        3.4.4 sh-PRMT1及Flag-PRMT1質(zhì)粒測序
        3.4.5 驗(yàn)證質(zhì)粒sh-PRMT1干擾效率
        3.4.6 驗(yàn)證質(zhì)粒Flag-PRMT1過表達(dá)效果
    3.5 討論
第四章 PRMT1對肝癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.4 試劑配制
        4.1.5 主要細(xì)胞及質(zhì)粒
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        4.2.3 CCK-8 實(shí)驗(yàn)
        4.2.4 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
        4.2.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        4.2.6 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)
        4.2.7 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)
        4.2.8 Western Blot
    4.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 PRMT1對肝癌細(xì)胞增殖能力的影響
        4.4.2 PRMT1對肝癌細(xì)胞克隆形成能力的影響
        4.4.3 PRMT1對肝癌細(xì)胞遷移能力的影響
        4.4.4 PRMT1對肝癌細(xì)胞侵襲能力的影響
        4.4.5 PRMT1對肝癌細(xì)胞侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)MMP2及MMP9表達(dá)的影響
    4.5 討論
第五章 PRMT1對肝癌細(xì)胞EMT的影響極其分子機(jī)制
    5.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.4 試劑配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、Western Blot
    5.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法
    5.4 結(jié)果
        5.4.1 PRMT1對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白的影響
        5.4.2 Western Blot檢測PRMT1對TGF-β/Smad信號通路的影響
    5.5 討論
結(jié)論與展望
    結(jié)論
    展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3784730