金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是引起機體感染的重要致病菌之一,其可引起菌血癥、肺炎等多種疾病,近年來,由于抗生素的濫用導致耐藥性菌株越來越多,針對S.aureus感染的控制越來越難,對于我們預防和治療的難度也隨之加大。而金黃色葡萄球菌疫苗的研發(fā)可能是防治其感染的有效手段,因此,安全有效的金黃色葡萄球菌疫苗研發(fā)迫在眉睫。金黃色葡萄球菌可通過粘膜途徑感染機體,金黃色葡萄球菌粘膜疫苗可能是防止金黃色葡萄球菌感染的有效途徑。粘膜免疫需要一個能有效避免降解的抗原呈遞系統(tǒng),同時可以刺激機體產生免疫應答;乳酸菌和減毒的致病菌均可作為遞送載體遞送抗原,但減毒的致病菌存在毒力回復的可能,而乳酸桿菌應用廣泛且安全無毒,因此成為良好的遞送載體。本研究從傳統(tǒng)奶制品中進行乳酸菌的分離鑒定及篩選,從中選取益生效果較好的乳酸桿菌遞送金黃色葡萄球菌抗原Csa1、TraP、MntC、Hla_H35L,對其免疫保護效果進行評價。具體研究結果如下:1.從傳統(tǒng)奶制品中共分離得到155株乳酸菌,其中桿菌73株,大致分為9種:包括:Lactobacillus p...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1.1 乳酸菌概述
        1.1.1 益生菌
        1.1.2 益生性乳酸菌的生理功能
    1.2 乳酸菌作為遞送載體的研究進展
        1.2.1 粘膜免疫概述
        1.2.2 以乳酸菌為遞送載體的研究現(xiàn)狀
    1.3 金黃色葡萄球菌概述及疫苗研究進展
        1.3.1 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)候選抗原Csa1、TraP、MntC、Hla概述
    1.4 本研究的目的及意義
第二章 乳酸菌的分離鑒定及益生性篩選
    2.1 實驗材料
        2.1.1 試驗樣品來源
        2.1.2 實驗菌株、動物及細胞
        2.1.3 試驗材料
        2.1.4 試驗儀器及設備
        2.1.5 試驗相關試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 乳酸菌的分離純化及菌種保藏
        2.2.2 革蘭氏染色及過氧化氫酶促試驗
        2.2.3 16S rDNA擴增及系統(tǒng)發(fā)育進化樹分析
        2.2.4 乳酸菌的粘膜遞送載體潛質篩選
        2.2.5 乳酸菌體內拮抗金黃色葡萄球菌的研究
    2.3 實驗結果及分析
        2.3.1 乳酸菌的分離鑒定結果
        2.3.2 乳酸菌革蘭氏染色及過氧化氫酶促實驗結果
        2.3.3 16S rDNA擴增及系統(tǒng)發(fā)育進化樹分析
        2.3.4 乳酸菌的粘膜遞送載體潛質篩選結果
        2.3.5 乳酸菌體內拮抗金黃色葡萄球菌的研究結果
    2.4 討論
    結論
第三章 乳酸桿菌遞送金黃色葡萄球菌抗原
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗菌株、感受態(tài)細胞及載體
        3.1.2 實驗材料及試劑
        3.1.3 實驗儀器及設備
        3.1.4 試驗相關試劑配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 目的基因的設計及合成
        3.2.2 重組質粒的構建(pNZ8148-csa1、pNZ8148-traP、pNZ8148-mntC)
        3.2.3 乳酸菌感受態(tài)細胞的制備
        3.2.4 重組乳酸菌的制備
        3.2.5 重組乳酸菌的抗原誘導表達
        3.2.6 重組乳酸菌的生理生化及遺傳穩(wěn)定性分析
    3.3 實驗結果及分析
        3.3.1 雙酶切重組質粒pUC57-csa1、pUC57-traP、pUC57-mntC
        3.3.2 表達質粒與基因的連接鑒定結果
        3.3.3 重組乳酸桿菌鑒定結果
        3.3.4 乳酸桿菌誘導抗原表達結果
        3.3.5 重組乳酸桿菌在不同溫度下的生長情況
        3.3.6 重組乳酸桿菌在不同pH下的生長情況
        3.3.7 重組乳酸桿菌在不同濃度NaCl下的生長情況
        3.3.8 重組乳酸桿菌對人工胃液的耐受情況
        3.3.9 重組乳酸桿菌在對含膽鹽的人工腸液耐受情況
        3.3.10 重組乳酸桿菌質粒遺傳穩(wěn)定性的檢測
    3.4 討論
    結論
第四章 乳桿菌遞送抗原在小鼠肺炎模型中免疫效果的評價
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗菌株
        4.1.2 實驗動物
        4.1.3 實驗所需試劑
        4.1.4 實驗所需設備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 WXD114(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)重組菌免疫小鼠
        4.2.2 WXD176/WXD171(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)重組菌免疫小鼠
        4.2.3 WXD234(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)重組菌免疫小鼠
    4.3 實驗結果及分析
        4.3.1 WXD114(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)免疫小鼠對存活率的影響
        4.3.2 WXD171/WXD176(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)免疫小鼠對存活率的影響
        4.3.3 WXD234(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)免疫小鼠對存活率的影響
    4.4 討論
    結論
創(chuàng)新點及展望
    創(chuàng)新點
    展望
參考文獻
致謝



本文編號：3758763