金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是引起機(jī)體感染的重要致病菌之一,其可引起菌血癥、肺炎等多種疾病,近年來(lái),由于抗生素的濫用導(dǎo)致耐藥性菌株越來(lái)越多,針對(duì)S.aureus感染的控制越來(lái)越難,對(duì)于我們預(yù)防和治療的難度也隨之加大。而金黃色葡萄球菌疫苗的研發(fā)可能是防治其感染的有效手段,因此,安全有效的金黃色葡萄球菌疫苗研發(fā)迫在眉睫。金黃色葡萄球菌可通過(guò)粘膜途徑感染機(jī)體,金黃色葡萄球菌粘膜疫苗可能是防止金黃色葡萄球菌感染的有效途徑。粘膜免疫需要一個(gè)能有效避免降解的抗原呈遞系統(tǒng),同時(shí)可以刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答;乳酸菌和減毒的致病菌均可作為遞送載體遞送抗原,但減毒的致病菌存在毒力回復(fù)的可能,而乳酸桿菌應(yīng)用廣泛且安全無(wú)毒,因此成為良好的遞送載體。本研究從傳統(tǒng)奶制品中進(jìn)行乳酸菌的分離鑒定及篩選,從中選取益生效果較好的乳酸桿菌遞送金黃色葡萄球菌抗原Csa1、TraP、MntC、Hla_H35L,對(duì)其免疫保護(hù)效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。具體研究結(jié)果如下:1.從傳統(tǒng)奶制品中共分離得到155株乳酸菌,其中桿菌73株,大致分為9種:包括:Lactobacillus p...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 乳酸菌概述
        1.1.1 益生菌
        1.1.2 益生性乳酸菌的生理功能
    1.2 乳酸菌作為遞送載體的研究進(jìn)展
        1.2.1 粘膜免疫概述
        1.2.2 以乳酸菌為遞送載體的研究現(xiàn)狀
    1.3 金黃色葡萄球菌概述及疫苗研究進(jìn)展
        1.3.1 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)候選抗原Csa1、TraP、MntC、Hla概述
    1.4 本研究的目的及意義
第二章 乳酸菌的分離鑒定及益生性篩選
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)樣品來(lái)源
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)菌株、動(dòng)物及細(xì)胞
        2.1.3 試驗(yàn)材料
        2.1.4 試驗(yàn)儀器及設(shè)備
        2.1.5 試驗(yàn)相關(guān)試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 乳酸菌的分離純化及菌種保藏
        2.2.2 革蘭氏染色及過(guò)氧化氫酶促試驗(yàn)
        2.2.3 16S rDNA擴(kuò)增及系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分析
        2.2.4 乳酸菌的粘膜遞送載體潛質(zhì)篩選
        2.2.5 乳酸菌體內(nèi)拮抗金黃色葡萄球菌的研究
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        2.3.1 乳酸菌的分離鑒定結(jié)果
        2.3.2 乳酸菌革蘭氏染色及過(guò)氧化氫酶促實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.3 16S rDNA擴(kuò)增及系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分析
        2.3.4 乳酸菌的粘膜遞送載體潛質(zhì)篩選結(jié)果
        2.3.5 乳酸菌體內(nèi)拮抗金黃色葡萄球菌的研究結(jié)果
    2.4 討論
    結(jié)論
第三章 乳酸桿菌遞送金黃色葡萄球菌抗原
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株、感受態(tài)細(xì)胞及載體
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料及試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        3.1.4 試驗(yàn)相關(guān)試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 目的基因的設(shè)計(jì)及合成
        3.2.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建(pNZ8148-csa1、pNZ8148-traP、pNZ8148-mntC)
        3.2.3 乳酸菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        3.2.4 重組乳酸菌的制備
        3.2.5 重組乳酸菌的抗原誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.6 重組乳酸菌的生理生化及遺傳穩(wěn)定性分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        3.3.1 雙酶切重組質(zhì)粒pUC57-csa1、pUC57-traP、pUC57-mntC
        3.3.2 表達(dá)質(zhì)粒與基因的連接鑒定結(jié)果
        3.3.3 重組乳酸桿菌鑒定結(jié)果
        3.3.4 乳酸桿菌誘導(dǎo)抗原表達(dá)結(jié)果
        3.3.5 重組乳酸桿菌在不同溫度下的生長(zhǎng)情況
        3.3.6 重組乳酸桿菌在不同pH下的生長(zhǎng)情況
        3.3.7 重組乳酸桿菌在不同濃度NaCl下的生長(zhǎng)情況
        3.3.8 重組乳酸桿菌對(duì)人工胃液的耐受情況
        3.3.9 重組乳酸桿菌在對(duì)含膽鹽的人工腸液耐受情況
        3.3.10 重組乳酸桿菌質(zhì)粒遺傳穩(wěn)定性的檢測(cè)
    3.4 討論
    結(jié)論
第四章 乳桿菌遞送抗原在小鼠肺炎模型中免疫效果的評(píng)價(jià)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)所需試劑
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)所需設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 WXD114(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)重組菌免疫小鼠
        4.2.2 WXD176/WXD171(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)重組菌免疫小鼠
        4.2.3 WXD234(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)重組菌免疫小鼠
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        4.3.1 WXD114(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)免疫小鼠對(duì)存活率的影響
        4.3.2 WXD171/WXD176(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)免疫小鼠對(duì)存活率的影響
        4.3.3 WXD234(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hla_H35L)免疫小鼠對(duì)存活率的影響
    4.4 討論
    結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)及展望
    創(chuàng)新點(diǎn)
    展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3758763