目的:分泌型卷曲相關(guān)蛋白5（SFRP5）在調(diào)節(jié)組織器官分化和發(fā)育中發(fā)揮著重要作用,但是其對(duì)白癜風(fēng)的影響尚不清楚,本研究旨在探討SFRP5對(duì)黑色素細(xì)胞黑素合成的影響,并闡明其具體機(jī)理,進(jìn)一步探索其在白癜風(fēng)發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:首先我們通過免疫組織化學(xué)、q RT-PCR和Western blot檢測(cè)SFRP5在白癜風(fēng)組織和白癜風(fēng)黑色素細(xì)胞中的表達(dá)。然后,利用重組SFRP5腺病毒（Ad SFRP5）感染正常表皮黑色素細(xì)胞（PIG1）,并利用重組si SFRP5腺病毒（Adsi SFRP5）感染白癜風(fēng)黑色素細(xì)胞（PIG3V）,測(cè)定酪氨酸酶活性和黑色素含量。通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色、透射電鏡、掃描電鏡、q RT-PCR和Western blot對(duì)黑素合成和黑素合成相關(guān)蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行了分析。利用Western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SFRP5對(duì)黑色素細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響。最后,通過Western blot研究了β-catenin激動(dòng)劑SKL2001對(duì)SFRP5抑制黑素合成的逆轉(zhuǎn)作用。結(jié)果:首先,我們發(fā)現(xiàn)SFRP5在白癜風(fēng)皮損中高表達(dá),與PIG1細(xì)胞相比,SFRP... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

SFRP5在白癜風(fēng)皮損中表達(dá)上調(diào)Figure1.1SFRP5wasupregulatedinvitiligotissues

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文16圖1.2SFRP5在PIG3V細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)Figure1.2SFRP5isupregulatedinPIG3VcelllinesA：SFRP5在PIG1細(xì)胞和PIG3V細(xì)胞中mRNA水平的表達(dá)；B：Westernblot分析SFRP5在PIG1細(xì)胞和PIG3V細(xì)胞中的表達(dá)量。**P<0.01。A：ThemRNAlevelsofSFRP5inPIG1andPIG3V;B:TheproteinlevelsofSFRP5inPIG1andPIG3VweremeasuredbyWesternblotanalysis.**P<0.01.3討論由于白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，治療也十分棘手，一直是近年來皮膚學(xué)界研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。盡管白癜風(fēng)的發(fā)病涉及多重機(jī)制，但是遺傳因素和非遺傳因素導(dǎo)致的免疫介導(dǎo)的黑色素細(xì)胞功能和存活異常仍是學(xué)術(shù)界普遍接受的假說[22,23]。Wnt信號(hào)通路在調(diào)節(jié)黑色素細(xì)胞的增殖、分化、生長及黑素合成等過程中起著十分重要的作用[13]。SFRP5作為Wnt信號(hào)通路的調(diào)節(jié)劑，在白癜風(fēng)等色素性疾病中的作用也受到了一定關(guān)注。本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)：SFRP5能通過Wnt信號(hào)通路抑制黑色素瘤細(xì)胞的遷移與侵襲[24]，近年來，諸多權(quán)威論據(jù)均表明白癜風(fēng)與惡性黑色素瘤之間存在著負(fù)相關(guān)性[25-27]。因此我們也將研究的視角從惡性黑色素瘤轉(zhuǎn)移到了白癜風(fēng)。本研究中我們首先利用免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)、qRT-PCR和Westenblot分析檢測(cè)了SFRP5在白癜風(fēng)皮損組織和正常皮膚組織，白癜風(fēng)黑色素細(xì)胞和正常黑色素細(xì)胞中的差異表達(dá)。結(jié)果表明，SFRP5在白癜風(fēng)皮損組織和白癜風(fēng)黑色素細(xì)胞中的表達(dá)均增高。這些結(jié)果提示，SFRP5可能在白癜風(fēng)的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。因此，下一步我們將具體探討SFRP5對(duì)黑色素細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及其潛在機(jī)理。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文22Reverse：GCCATCACCCCAGGAGACAATRP2Forward：GGAGTGGTCCCTACATCCTACGReverse：GAATGGATGTTCTGCCGAATCTYRForward：GACAAATCCAGAACCCCAAGGReverse：GAGGCATCCGCTATCCCAGT1.4.12蛋白提取及Westernblot同第一部分。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析同第一部分。2結(jié)果2.1SFRP5對(duì)黑色素細(xì)胞的增殖和凋亡沒有明顯影響為了研究SFRP5對(duì)黑素合成調(diào)節(jié)的作用，我們分別用AdSFRP5和AdRFP感染PIG1細(xì)胞，AdsiSFRP5和AdGFP感染PIG3V細(xì)胞。Westernblot結(jié)果顯示，AdSFRP5能使PIG1細(xì)胞中的SFRP5水平明顯增高，同樣的，AdsiSFRP5能使PIG3V細(xì)胞中SFRP5的表達(dá)水平明顯下調(diào)（圖2.1A）。CCK-8結(jié)果顯示，過表達(dá)SFRP5并不影響PIG1細(xì)胞的增殖活性，SFRP5下調(diào)也不影響PIG3V細(xì)胞的增殖活性（圖2.1B）；此外，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，過表達(dá)SFRP5對(duì)PIG1細(xì)胞的凋亡無明顯影響，而且SFRP5下調(diào)也不影響PIG3V細(xì)胞的凋亡（圖2.1C）。圖2.1SFRP5對(duì)黑色素細(xì)胞增殖和凋亡的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3600307