目的:建立動物正畸牙齒移動模型,觀察大鼠牙齒移動距離和牙周組織改建情況,比較單獨應(yīng)用低強度激光或者骨微穿孔術(shù),以及聯(lián)合應(yīng)用這兩種方法加速正畸牙齒移動的效果。方法:1、確定有效激光劑量:選擇SD大鼠21只,隨機分成激光組（激光照射+加力,15只）、對照組（僅加力,3只）和空白組（無任何處理,3只）。按照射時間的長短,激光組又分成5組（A組:10s、B組:25s、C組:50s、D組:75s、E組:100s）。激光組與對照組均建立雙側(cè)上頜第一磨牙的正畸模型,各激光組還需在建模的第0-6天連續(xù)照射激光,每日1次。在建模第7天時處死大鼠,采用二次印模法記錄大鼠建模前后牙移動距離,并取大鼠上頜骨制作組織切片。經(jīng)HE染色后觀察牙槽骨改建情況及牙周膜組織形態(tài)和細胞組成的變化,篩選出能加速正畸的有效激光劑量用于后續(xù)實驗。2、探索不同干預(yù)措施下的正畸牙移動效果:選擇SD大鼠60只,隨機分成4組,即LLL組（激光照射+加力）、MOPs組（骨微穿孔術(shù)+加力）、聯(lián)合組（骨微穿孔術(shù)+激光照射+加力）和對照組。每組15只,分別于建模后第1、3、5、7、14天各處死3只。同樣方法記錄建模前后牙移動距離,并取雙側(cè)上頜骨... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠正畸模型建立過程

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文馬銳12正畸模型建立完成后，每天檢查鎳鈦拉簧有無損壞和脫落，若發(fā)現(xiàn)脫落應(yīng)立即重新安裝；將固體顆粒飼料用經(jīng)嚴格消毒的飲用水濕潤，待顆粒發(fā)脹軟化后喂食大鼠，每日更換飼料，降低大鼠加力裝置脫落風(fēng)險。1.2.3正畸牙移動距離的測量經(jīng)腹腔注射過量水合氯醛處死大鼠，取出鎳鈦拉簧，再次制取上牙列印模，注入超硬石膏備用。參照李高華等[38]的測量方法，將同一大鼠正畸前后的石膏模型分別水平放置于體視顯微鏡下，使牙齒咬合面與觀測臺平行，通過LeicaApplicationSuiteV4測量軟件（設(shè)置精度為0.0001mm）測量上頜第一磨牙與第二磨牙咬合面中央牙尖遠中邊緣嵴之間的距離，測量3次，取平均值（圖2）。將建模后測量數(shù)值減去建模前測量數(shù)值，即得到牙移動距離（Orthodontictoothmovement，OTM）。圖2正畸牙齒移動距離的測量（×20）a：建模前測量b：建模后測量Fig.2Measurementoforthodontictoothmovementdistance(×20)a:Measurementbeforemodelingb:Measurementaftermodeling1.2.4標本的采集與處理解剖取出雙側(cè)上頜骨，剔除軟組織后將上頜標本放入4％多聚甲醛液內(nèi)，固定48小時后轉(zhuǎn)移至10%EDTA脫鈣液中室溫脫鈣4周，隔天更換EDTA液，直到針尖能夠無阻力刺穿牙齒。脫鈣完成后將標本送至遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科行常規(guī)石蠟包埋、切片，厚2μm。將切好的片子放入56℃溫水中展平，并貼片于載玻片上用于HE染色和TRAP染色。1.2.5蘇木素-伊紅染色（hematoxylin-eosinstaining，HE）將上頜骨石蠟切片置于75℃恒溫箱中烘烤20min，然后放入全自動HE染色機配套的載玻片架中，上機后按設(shè)定好的程序染色（圖3）。完成染色后將切片放入自動封片機，中性樹膠封片。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文馬銳13圖3石蠟切片HE染色步驟Fig.3StepsofHEstaininginparaffinsections1.2.6抗酒石酸酸性磷酸酶染色（tartrate-resistantacidphosphatase，TRAP）（1）染色前準備：將石蠟切片置于75℃恒溫箱中烘烤2小時取出，待冷卻至室溫時放入切片盒待用，染色前取出于75℃恒溫箱內(nèi)烘烤15min。（2）脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各脫蠟20min，100%乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各水化5min，自來水洗30s，蒸餾水洗三遍。（3）配制工作液：亞硝酸鈉與副品紅溶液各取50ul混合均勻，加入醋酸鈉緩沖溶液1.8ml混勻，再加入萘酚AS-BI磷酸酯液0.1ml，稱取酒石酸鉀鈉0.0282g最后加入，充分溶解即為工作液，工作液即配即用。（4）孵育染色：將工作液滴加于切片組織上，置于37℃恒溫箱孵育2h，蒸餾水洗3遍。（5）蘇木素染色：切片入蘇木素染液染4min，自來水洗30s，1%鹽酸酒精分化5s，流動自來水沖洗3min。（6）脫水封片：切片依次放入95%乙醇、95%乙醇、100%乙醇、100%乙醇中各脫水5min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各透明5min，中性樹膠封片。（7）在顯微鏡下隨機選擇5個視野，計數(shù)TRAP陽性細胞數(shù)量，結(jié)果取平均值。1.3統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用spss18.0統(tǒng)計學(xué)處理軟件，采用單因素方差分析比較各組大鼠牙移動距離及破骨細胞計數(shù)，采用Dunnett、Tukey檢驗法對各組均數(shù)之間進行兩兩比較，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義，實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差（sx）表示。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]口腔微生物耐氟機制的研究進展[J]. 馬銳,郭饒,王倩,劉建國,管曉燕.  微生物學(xué)通報. 2020(05)
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[3]CC趨化因子受體2缺失降低正畸牙齒運動中破骨細胞和成骨細胞活性的研究[J]. 邢洪波,許桓溪,朱雪梅.  海軍醫(yī)學(xué)雜志. 2019(04)
[4]正畸牙移動的實驗?zāi)Ｐ脱芯窟M展[J]. 龍茜,管曉燕,劉建國.  遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2019(02)
[5]物理方法加速正畸牙移動的研究進展[J]. 王詩哲,潘曉崗.  中國實用口腔科雜志. 2019(04)
[6]不同強度的低能量激光照射對正畸牙齒移動速度影響的臨床研究[J]. 姜委杰,劉珺,林煒,弋中萍,劉昌翠,張晨.  全科口腔醫(yī)學(xué)電子雜志. 2019(07)
[7]中草藥在口腔正畸及牙周炎癥治療中的研究進展[J]. 胡紫菱,朱光勛.  臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2019(01)
[8]正畸治療與牙周軟組織健康的關(guān)系及處理[J]. 趙蕾,王曉宇,徐屹,孟姝.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2018(06)
[9]過量氟對大鼠成釉細胞KLK4蛋白表達的影響[J]. 王光平,顧瑜,吳迪,初可嘉,熊璟,管曉燕,季伯,李紹岳,劉建國.  中國地方病防治雜志. 2018(03)
[10]微創(chuàng)傷手術(shù)對加速正畸牙齒移動研究的系統(tǒng)評價[J]. 付騰飛,宋林,張瑞,曹猛.  實用口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2018(02)

碩士論文
[1]微骨穿孔在加速正畸牙齒移動中作用的研究[D]. 付騰飛.中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué) 2018
[2]Micro-CT觀測半導(dǎo)體激光照射對牙移動的影響[D]. 譚榮.河北醫(yī)科大學(xué) 2017
[3]弱激光照射對大鼠正畸移動牙牙周破骨細胞分化及PI3K/Akt通路影響的研究[D]. 孫娜.青島大學(xué) 2015



本文編號：3597451