目的:本研究通過岡田酸（Okadaic acid,OA）誘導(dǎo)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系（SH-SY5Y）內(nèi)TAU蛋白過度磷酸化,建立阿爾茲海默癥（Alzheimer’s disease,AD）病理機(jī)制體外細(xì)胞模型,在此基礎(chǔ)上研究人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞（human Olfactory Mucosa mesenchymal stem cells,h OM-MSCs）共培養(yǎng)對AD細(xì)胞模型的治療效果,為h OM-MSCs用于AD治療提供理論和實(shí)驗依據(jù)。方法:1.SH-SY5Y細(xì)胞復(fù)蘇,待細(xì)胞性狀良好,密度滿意后進(jìn)行傳代培養(yǎng);2.用不同濃度OA（0、10、20、30、40nmol/L）處理SH-SY5Y細(xì)胞不同時間（8h、24h）后,通過觀察細(xì)胞形態(tài)、檢測細(xì)胞凋亡率、免疫熒光觀察細(xì)胞微絲、微管結(jié)構(gòu)以及免疫印跡法（WB）檢測細(xì)胞內(nèi)磷酸化TAU（PTAU）蛋白的含量變化來確定AD造模最適合的OA濃度及處理時間;3.鼻內(nèi)鏡下獲取人嗅黏膜組織塊,組織剪碎貼壁后進(jìn)行h OM-MSCs原代培養(yǎng),鏡下觀察,待細(xì)胞形狀良好,密度滿意后傳代培養(yǎng);4.按照摸索出的最適OA處理時間及濃度進(jìn)行隨機(jī)分組實(shí)驗造模（對照組、造模組、... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度OA造模處理24h后SH-SY5Y光鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變注：A1、B1、C1、D1、E1為40倍、A2、B2、C2、D2、E2為100倍

人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞對阿爾茲海默癥模型細(xì)胞治療作用研究113.2不同濃度OA處理后細(xì)胞凋亡率改變不同濃度OA溶液作用于SH-SY5Y細(xì)胞后，用AnnexinV-APC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測細(xì)胞凋亡率，結(jié)果如圖3所示；計數(shù)凋亡細(xì)胞占總細(xì)胞的比例，計算均值，統(tǒng)計結(jié)果如表1所示，分析后繪制柱形圖用于顯示直觀對比，見圖4（*p<0.05，**p<0.01）。根據(jù)圖3結(jié)果可知，與對照組相比，OA處理后，SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率上升，尤其是早期凋亡（右下LR）上升尤為明顯；聯(lián)系表1及圖4，可知，8h組造模后凋亡率在數(shù)值上有所上升，但這一差距無統(tǒng)計學(xué)意義，p>0.05；而24h組中，與對照組相比，除10nmol/L濃度外，其余濃度差導(dǎo)致的凋亡率上升均有統(tǒng)計學(xué)意義。因此，可得出結(jié)論，當(dāng)OA濃度處于20nmol/L以上時，造模時間24h，SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡率升高，且與OA濃度呈正相關(guān)。ABCD圖3SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率A：8h空白；B：8h40nmol/L；C：24h空白；D：24h40nmol/L

碩士學(xué)位論文144.討論AD作為一種神經(jīng)退行性疾病，已經(jīng)成為了老年癡呆癥中最常見、發(fā)病率最高的類型。AD威脅了很多中老年人的生命健康，甚至近年來，其發(fā)病年齡越來越趨于年輕化，許多不足50歲的患病者屢見不鮮。AD的主要病理特點(diǎn)是β淀粉樣蛋白（Aβ）的沉積以及神經(jīng)纖維纏結(jié)（NFT）的形成。同時近年來也有更多研究結(jié)果表明，以往一直作為一個重要病理機(jī)制提出的Aβ沉積，很有可能是由于TAU蛋白的異常磷酸化而引起的Aβ在病變區(qū)域異常聚集，從而導(dǎo)致AD進(jìn)一步的病理改變[19]。TAU是一種微管相關(guān)蛋白，主要表達(dá)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)[20]，其主要功能是穩(wěn)定微管，調(diào)節(jié)微管形態(tài)[21]，同時還能促進(jìn)神經(jīng)營養(yǎng)因子、分泌蛋白等物質(zhì)在軸突內(nèi)運(yùn)輸，協(xié)助細(xì)胞之間的交換，保證細(xì)胞存活及維持細(xì)胞功能穩(wěn)定[22]。在正常情況下，TAU蛋白是一種天然不折疊的蛋白，較為均勻地分布于細(xì)胞質(zhì)中，并沒有明顯的聚集傾向。雖然現(xiàn)階段關(guān)于0-8h0-24h10-8h10-24h20-8h20-24h30-8h30-24h40-8h40-24hT-TauP-Tauactin圖6不同濃度OA處理后細(xì)胞內(nèi)磷酸化TAU蛋白的蛋白印跡圖A8hconcentrationofOA(nmol/L)P-Tau/actin0102030400.000.050.100.150.2024hwbconcentrationofOA(nmol/L)P-Tau/actin0102030400.00.10.20.3ns*****B圖7P-TAU/actin灰度比值圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)、鑒定及誘導(dǎo)分化的研究[J]. 葛麗特,段答,王磊,趙振宇,滕曉華,盧明.  湖南師范大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2015(01)
[2]人嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性[J]. 葛麗特,卓毅,段答,趙振宇,滕曉華,王磊,盧明.  中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2015(01)



本文編號：3572799