miR-211-5p通過下調(diào)COX2的表達(dá)改善大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷
發(fā)布時(shí)間：2022-01-02 13:30
第一部分mi R-211-5p對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦損傷的影響目的:篩選出在局灶性腦缺血再灌注（MCAO/R）大鼠腦中有明顯表達(dá)變化的mi RNAs;觀察mi R-211-5p與COX2在MCAO/R大鼠皮層和海馬再灌注時(shí)間不同情況下的表達(dá)變化,并分析其相關(guān)性;通過給予mi R-211-5pagomir和antagomir進(jìn)行干預(yù)觀察其對MCAO/R大鼠腦損傷的影響,以及對COX2及其下游產(chǎn)物、相關(guān)炎癥因子的影響。方法:1.生物信息學(xué)初篩mi RNAs在本研究中,我們希望找到靶向COX2內(nèi)源性表達(dá)的mi RNAs以抑制炎癥。我們使用靶標(biāo)預(yù)測數(shù)據(jù)庫（Target Scan,mi RBase和mi Randa）評估哪些mi RNAs能靶向COX2基因。在三個(gè)數(shù)據(jù)庫中均能被檢索到的mi RNA用于缺血再灌注損傷大鼠腦組織表達(dá)檢測,以確定后續(xù)觀察研究采用的mi RNA。2.MCAO/R大鼠腦卒中模型建立雄性8周齡SD大鼠,用1%戊巴比妥鈉（45mg/kg）腹腔麻醉,于右側(cè)頸總動脈插入尼龍栓線（L3600,廣州佳靈）至大腦中動脈起始段（栓線插入深度約18mm）,阻塞右側(cè)大腦中動脈血流90mi...
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
大鼠局灶腦缺血再灌注損傷模型（x±SD,n=3）
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文30組。圖1大鼠局灶腦缺血再灌注損傷模型（x±SD,n=3）Fig.1Ratmodeloffocalcerebralischemiareperfusion（MCAO/R）injury（mean±SD,n=3）2.3局灶腦缺血再灌注24小時(shí)大鼠皮層及海馬miRNAs的表達(dá)如圖2A和2B所示，與假手術(shù)組相比，模型組miR-211-5p與miR-204-5p在皮層顯著下降，海馬顯著上升�？紤]到在生物信息學(xué)網(wǎng)站targetscan檢測，miR-211-5p與COX2的結(jié)合分?jǐn)?shù)比miR-204-5p要高，因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)以miR-211-5p為主要觀察目標(biāo)。圖2miRNAs在局灶腦缺血再灌注24小時(shí)大鼠皮層及海馬的變化（x±SD,n=3）Fig.2ChangesofmiRNAsincortexandhippocampusinMCAO/R-treatedrats（mean±SD,n=3）*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001VSShamgroup2.4免疫熒光雙標(biāo)觀察大腦皮層與海馬神經(jīng)元的分布圖3A紅色Neun為神經(jīng)元標(biāo)記蛋白，藍(lán)色DAPI為細(xì)胞核特異染色。從圖
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文31可以看出，大鼠皮層和海馬神經(jīng)元占比不同。通過ImageJ軟件計(jì)算（Neun數(shù)目/DAPI數(shù)目）出，皮層神經(jīng)元陽性細(xì)胞率約占57%，海馬神經(jīng)元陽性細(xì)胞率約占97%。圖3免疫熒光雙標(biāo)觀察大腦皮層與海馬神經(jīng)元的分布（x±SD,n=3）Fig.3Neuronaldistributionofratcortexandhippocampalbyimmunofluorescencedoublestandardstaining（mean±SD,n=3）2.5miR-211-5p與COX2在SD大鼠皮層、海馬以及血漿的表達(dá)變化通過q-PCR實(shí)驗(yàn)可以看出，COX2mRNA的表達(dá)在體內(nèi)外均是先升高后降低的，皮層和海馬均在再灌注12h達(dá)到峰值（圖4B,D），這表明在局灶缺血再灌注模型中炎癥的水平是先升高后降低的。miR-211-5p在皮層呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，12h達(dá)到谷值（圖4A）；在海馬呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，48h達(dá)到峰值（圖4C）；與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血漿miR-211-5p明顯降低，COX2mRNA與蛋白明顯升高（圖4E-G）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]美洛昔康對全腦缺血/再灌注大鼠腦損傷的作用觀察[J]. 羅維楠,楊俊卿,姜蓉,石斌. 中國藥理學(xué)通報(bào). 2010(11)
[2]環(huán)氧酶-2在大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷中的表達(dá)及意義[J]. 于維東,范紅杰,楊軍,胡新華. 中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2007(16)
[3]塞來昔布對大鼠局灶性腦缺血再灌注的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J]. 羅傳銘,畢桂南,曹立梅,李浩,邱燕東,黎彬如,石勝良. 中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志. 2007(02)
本文編號：3564263
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
大鼠局灶腦缺血再灌注損傷模型（x±SD,n=3）
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文30組。圖1大鼠局灶腦缺血再灌注損傷模型（x±SD,n=3）Fig.1Ratmodeloffocalcerebralischemiareperfusion（MCAO/R）injury（mean±SD,n=3）2.3局灶腦缺血再灌注24小時(shí)大鼠皮層及海馬miRNAs的表達(dá)如圖2A和2B所示，與假手術(shù)組相比，模型組miR-211-5p與miR-204-5p在皮層顯著下降，海馬顯著上升�？紤]到在生物信息學(xué)網(wǎng)站targetscan檢測，miR-211-5p與COX2的結(jié)合分?jǐn)?shù)比miR-204-5p要高，因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)以miR-211-5p為主要觀察目標(biāo)。圖2miRNAs在局灶腦缺血再灌注24小時(shí)大鼠皮層及海馬的變化（x±SD,n=3）Fig.2ChangesofmiRNAsincortexandhippocampusinMCAO/R-treatedrats（mean±SD,n=3）*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001VSShamgroup2.4免疫熒光雙標(biāo)觀察大腦皮層與海馬神經(jīng)元的分布圖3A紅色Neun為神經(jīng)元標(biāo)記蛋白，藍(lán)色DAPI為細(xì)胞核特異染色。從圖
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文31可以看出，大鼠皮層和海馬神經(jīng)元占比不同。通過ImageJ軟件計(jì)算（Neun數(shù)目/DAPI數(shù)目）出，皮層神經(jīng)元陽性細(xì)胞率約占57%，海馬神經(jīng)元陽性細(xì)胞率約占97%。圖3免疫熒光雙標(biāo)觀察大腦皮層與海馬神經(jīng)元的分布（x±SD,n=3）Fig.3Neuronaldistributionofratcortexandhippocampalbyimmunofluorescencedoublestandardstaining（mean±SD,n=3）2.5miR-211-5p與COX2在SD大鼠皮層、海馬以及血漿的表達(dá)變化通過q-PCR實(shí)驗(yàn)可以看出，COX2mRNA的表達(dá)在體內(nèi)外均是先升高后降低的，皮層和海馬均在再灌注12h達(dá)到峰值（圖4B,D），這表明在局灶缺血再灌注模型中炎癥的水平是先升高后降低的。miR-211-5p在皮層呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，12h達(dá)到谷值（圖4A）；在海馬呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，48h達(dá)到峰值（圖4C）；與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血漿miR-211-5p明顯降低，COX2mRNA與蛋白明顯升高（圖4E-G）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]美洛昔康對全腦缺血/再灌注大鼠腦損傷的作用觀察[J]. 羅維楠,楊俊卿,姜蓉,石斌. 中國藥理學(xué)通報(bào). 2010(11)
[2]環(huán)氧酶-2在大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷中的表達(dá)及意義[J]. 于維東,范紅杰,楊軍,胡新華. 中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2007(16)
[3]塞來昔布對大鼠局灶性腦缺血再灌注的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J]. 羅傳銘,畢桂南,曹立梅,李浩,邱燕東,黎彬如,石勝良. 中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志. 2007(02)
本文編號：3564263
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