細胞表面人表皮生長因子受體2（HER2）異常二聚體化是引起乳腺癌等腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵驅(qū)動事件,是預(yù)測HER2靶向治療效果的潛在新型標志物。但是HER2二聚體的臨床應(yīng)用研究卻受制于缺乏簡單實用、靈敏的細胞表面蛋白質(zhì)二聚體分析技術(shù)。因此,HER2二聚體作為新型乳腺癌標志物的臨床應(yīng)用研究急需簡單、靈敏、實用的蛋白二聚體原位檢測新方法。本課題利用適體鄰位雜交的特異性和無莖環(huán)式非線性HCR的高靈敏性,研發(fā)了一種適體共定位觸發(fā)DNA納米組裝（CtDNA）的新策略用于HER2二聚體的原位放大成像。首先利用聚丙烯酰胺凝膠電泳、原子力顯微鏡和熒光分光光度計驗證了無莖環(huán)式非線性HCR逐步組裝形成DNA樹枝狀納米結(jié)構(gòu)的可行性。結(jié)果表明DNA樹枝狀納米結(jié)構(gòu)的組裝具有較高的特異性、靈敏度和可控性。然后探索基于CtDNA策略用于乳腺癌細胞表面HER2/HER2同源二聚體和HER2/HER3異源二聚體檢測的新方法。最后驗證了新方法用于臨床乳腺癌FFPE組織標本中HER2同源二聚體原位成像和定量分析的可行性。結(jié)果表明CtDNA策略是一種簡單實用、靈敏的細胞表面蛋白質(zhì)二聚體成像新技術(shù),可用于乳腺癌HER2二聚體的原位檢測。 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

基于鄰位觸發(fā)DNA納米組裝用于乳腺癌細胞表面HER2二聚體原位成像的示意圖

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文15圖2A)聚丙烯酰胺凝膠電泳表征圖。泳道1-4分別是S1、S2、B1、B2，泳道5是T和S1的反應(yīng)產(chǎn)物，泳道6是T、S1和A1的反應(yīng)產(chǎn)物，泳道7是T、S1、A1和S2的反應(yīng)產(chǎn)物，泳道8是T、S1、A1、S2和A2的反應(yīng)產(chǎn)物；B)泳道1-4分別是S1、S2、B1和B2，泳道5是S1、S2、A1、A2的反應(yīng)產(chǎn)物，泳道6是T、S1、S2、A1、A2的反應(yīng)產(chǎn)物；C)和D)分別是非線性HCR反應(yīng)60分鐘和90分鐘的原子力顯微鏡圖；E)是S1、S2、A1、A2反應(yīng)產(chǎn)物的原子力顯微鏡圖；F)熒光分光光度計表征圖。S1（a），T和S1的反應(yīng)產(chǎn)物(b)，T、S1、A1的反應(yīng)產(chǎn)物(c)，T、S1、A1和S2的反應(yīng)產(chǎn)物(d)，T、S1、A1、S2和A2的反應(yīng)產(chǎn)物(e)。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文17圖3聚丙烯酰胺凝膠電泳表征圖。A)泳道1-2分別是T與SS1-4、SS2-4和PS12-4的反應(yīng)產(chǎn)物，泳道3-4分手別是T與SS1-5、SS2-5和PS12-5的反應(yīng)產(chǎn)物，泳道5-6分別是T與SS1-6、SS2-6和PS12-6的反應(yīng)產(chǎn)物，泳道7-8分手別是T與SS1-8、SS2-8和PS12-8的反應(yīng)產(chǎn)物；B)中泳道1-4分別是Apt1、Apt2、T、PS12–6，泳道5是T和Apt1的混合產(chǎn)物，泳道6是T和Apt2的混合產(chǎn)物，泳道7是T、Apt1和Apt2的反應(yīng)產(chǎn)物，泳道8是T和PS12–6的反應(yīng)產(chǎn)物；Fig.3A)PAGEanalysisofthereactionproductsofTwithSS1-4andSS2-4(lane1),PS12-4(lane2),SS1-5andSS2-5(lane3),PS12-5(lane4),SS1-6andSS2-6(lane5),PS12-6(lane6),SS1-8andSS2-8(lane7),PS12-8(lane8)afterincubationfor60min,respectively.B)PAGEanalysisofsingleApt1,Apt2,T,andPS12–6(Lanes1–4),andthereactionproductsofTandApt1(Lane5),TandApt2(Lane6),T,Apt1andApt2(Lane7),andTandPS12–6(Lane8),respectively.圖4Apt1、Apt2、T或Apt-T誘導(dǎo)的非線性HCR用于孔板上HER2單體蛋白的熒光分析。Fig.4FluorescenceanalysisofnonlinearHCRproductsinducedwithApt1,Apt2,andT,orsingleApt-TtestedinHER2monomerprotein-coatedplatewells.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cell-SELEX-based aptamer-conjugated nanomaterials for enhanced targeting of cancer cells[J]. KONG RongMei, CHEN Zhuo, YE Mao, ZHANG XiaoBing & TAN WeiHong State Key Laboratory for Chemo/Biosensing and Chemometrics; College of Chemistry and Chemical Engineering, Hunan University, Changsha 410082, China.  Science China（Chemistry）. 2011(08)



本文編號：3563669