骨組織是人體行使運動、支撐、保護等功能的重要組成部分,但由外傷、感染、腫瘤和先天性疾病等因素造成的不同類型的骨缺損卻非常常見,且是臨床治療中的難點之一,同樣頜骨的缺損也一直是口腔外科、種植修復所面臨的一大難題。目前,為解決骨的來源、排異反應及力學要求等問題,骨組織再生工程成為解決骨缺損修復臨床治療問題的有效途徑之一。其中,骨組織工程的關鍵因素是成骨細胞,成骨細胞是骨形成的基礎細胞,如何獲得足夠數量的成熟的成骨細胞也就成為目前骨組織工程在基礎研究和臨床應用中的關注重點。人誘導多能干細胞（human induced pluripotent stem cells,hiPSCs）具有和人胚胎干細胞（human embryonic stem cells,hESCs）一樣的多能性,能進行無限增殖和分化為三胚層中的各種體細胞,且hiPSCs是由人體體細胞重編程獲得的,避免了hESCs存在的倫理問題,在組織發(fā)育、藥物篩選和細胞療法等領域顯示出良好的應用前景。因此本課題的主要研究目的是高效率誘導hiPSCs分化為成骨樣細胞,為骨組織工程提供足夠數量的高質量的種子細胞。針對目前hiPSCs成骨向誘導方法起... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：92 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

懸浮培養(yǎng)不同時間的擬胚體在成骨誘導分化過程中的細胞形貌圖（懸浮培養(yǎng)時間分別為：3天、5天、7天和10天

蘭州大學碩士學位論文人誘導多能干細胞向成骨樣細胞逐步誘導分化的研究23圖2-3懸浮培養(yǎng)不同時間的擬胚體在成骨誘導分化14天后的茜素紅染色形貌圖（a）和定量檢測結果（b）（懸浮培養(yǎng)時間分別為：3天、5天、7天和10天。*表示p<0.05，**表示p<0.01。標尺：200μm）

蘭州大學碩士學位論文人誘導多能干細胞向成骨樣細胞逐步誘導分化的研究24圖2-4懸浮培養(yǎng)不同時間的擬胚體在成骨誘導分化14天后相關蛋白（綠色）的免疫熒光結果（懸浮培養(yǎng)時間分別為：3天、5天、7天和10天。多能性蛋白：OCT4；成骨相關蛋白：RUNX2、COL1A1和OCN。細胞核經DAPI染色顯示為藍色。標尺：100μm）2.5本章小結綜上所述，我們首先研究了hiPSCs懸浮培養(yǎng)3-10天過程中EBs的自發(fā)分化過程。基因表達定量結果顯示，EBs在懸浮培養(yǎng)中會自發(fā)分化為中胚層細胞，繼而分化為成骨細胞，這對構建hiPSCs定向成骨分化體外誘導體系具有重要價值。此外，RT-PCR結果證實，懸浮時間為4天的EBs含有最多的中胚層樣細胞和間充質樣細胞。同時，將懸浮不同時間形成的EBs接種在明膠表面，經成骨誘導培養(yǎng)基誘導分化14天后，茜素紅染色結果顯示，懸浮培養(yǎng)3~5天的EBs經成骨誘導后沉積的鈣結節(jié)最大，鈣鹽沉積量最多，成骨分化效率更高。我們的研究結果對EB法從hiPSCs中提取MSC和成骨細胞具有重要的指導意義，必將促進hiPSCs在骨組織工程中的應用。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Overexpression of Dlx2 enhances osteogenic differentiation of BMSCs and MC3T3-E1 cells via direct upregulation of Osteocalcin and Alp[J]. Jianfei Zhang,Wenbin Zhang,Jiewen Dai,Xudong Wang,Steve Guofang Shen.  International Journal of Oral Science. 2019(02)
[2]氯原酸對成骨細胞Ⅰ型膠原及骨鈣蛋白基因表達的影響[J]. 張珠,尹美珍,易繼凌,王永紅,殷義霞.  武漢理工大學學報. 2014(12)
[3]人胚胎干細胞向類間充質干細胞的誘導分化及鑒定[J]. 石倫剛,唐鄭雅,陸峻泓,曹誼林,張文杰.  上海交通大學學報(醫(yī)學版). 2009(03)

博士論文
[1]FGF-2和BMP-2誘導低密度人骨髓間充質干細胞（hMSCs）成骨分化的協調機制研究[D]. 雷蕾.中南大學 2014



本文編號：3550315