發(fā)布時(shí)間：2021-12-19 08:17

　　目的:探討副交感神經(jīng)M1受體（muscarinic acetylcholine M1receptor,CHRM1）與前列腺癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移與抗凋亡之間的關(guān)系。初步探索CHRM1參與細(xì)胞自噬,并且影響腫瘤細(xì)胞進(jìn)展及其可能的分子機(jī)制。方法:（1）選用裸鼠皮下成瘤法、Western blot、免疫熒光等方法觀察CHRM1在前列腺癌組織及人體外細(xì)胞中表達(dá)情況。（2）體外培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞系細(xì)胞PC-3、LNCaP、DU145,用慢病毒感染方法建立CHRM1穩(wěn)定敲低的細(xì)胞模型,加入其激動(dòng)劑與抑制劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn),用CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CHRM1對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖能力與細(xì)胞克隆能力,選用Transwell和細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移與侵襲能力,選用流式細(xì)胞術(shù)和透射電鏡下觀察凋亡小體方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。（3）穩(wěn)定敲低CHRM1或加入抑制劑,選用qPCR、Western blot方法檢測(cè)CHRM1對(duì)前列腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)的基因及蛋白表達(dá)水平。（4）選用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）及轉(zhuǎn)染LC3的質(zhì)粒等方法饑餓誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞檢測(cè)其細(xì)胞自噬水平。（5）上調(diào)或下調(diào)CHRM1... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

結(jié)果統(tǒng)計(jì)圖；C）透射電鏡結(jié)果

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文35A）加入不同濃度CAR后透射電鏡下自噬小體圖。B）正常或饑餓條件下加入CAR或PIN后LC3及p62蛋白表達(dá)情況。C）圖8B的Westernblot統(tǒng)計(jì)結(jié)果。D）加入CAR或PIN與對(duì)照對(duì)比作用不同時(shí)間WB檢測(cè)LC3及p62表達(dá)情況。E）加或不加CAR在正常與饑餓情況下免疫熒光法激光共聚焦顯微鏡下結(jié)果顯示LC3表達(dá)情況。F）PC-3細(xì)胞轉(zhuǎn)染Ad-mCherry-GFP-LC3B質(zhì)粒后加入CAR或PIN后檢測(cè)細(xì)胞自噬流情況。G）運(yùn)用穩(wěn)定敲低CHRM1的PC-3細(xì)胞加或不加CAR后Westernblot檢測(cè)LC3蛋白表達(dá)情況。H）運(yùn)用穩(wěn)定敲低CHRM1的PC-3細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞加入CAR后進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LC3表達(dá)。A)ElectronmicroscopyshowstheultrastructureofPCacellstreatedwithdifferentconcentrationsofCARincompletemediumfor24h;B)Westernblotwasperformedtodetectchangesinp62,LC3-II,orGAPDHtreatedwith2μMCARor200μMPINforupto24hunderserum-freemediumorcompletemedium(CTRL)conditionsforupto36h;C)StatisticsontheLC3-I/LC3-IIratioobtainedfromtheWesternblotresultsinFig.8B;D)Westernblotwasperformedtodetectchangesinp62,LC3-II,orGAPDHincubatedinserum-freemediumforupto36haftertheadditionofCARorPINcomparedwithnonspecificdrugs;E)LC3punctawere

與10H結(jié)果統(tǒng)計(jì)


本文編號(hào)：3544079