[目的]注射用藤黃酸（Gambogic Acid,GA）作為一種新型的、高效廣譜抗腫瘤藥物,對(duì)減輕廣大癌癥患者的痛苦,提高患者的生活質(zhì)量具有非常重要的作用。然而,藤黃酸是否抑制被認(rèn)為是癌癥治療失敗主要原因的腫瘤干細(xì)胞（Cancer Stem Cells,CSCs）,這在很大程度上尚不清楚。本研究探討了藤黃酸是否抑制結(jié)直腸癌（Colorectal Cancer,CRC）的腫瘤干細(xì)胞擴(kuò)增及其可能機(jī)制。[方法]本研究對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞進(jìn)行藤黃酸藥物處理后,采用CCK-8實(shí)驗(yàn)來評(píng)估藤黃酸對(duì)結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞的抑制作用;通過腫瘤球形成實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)對(duì)側(cè)群細(xì)胞以及CD133+CD44+細(xì)胞的百分比進(jìn)行比較和分析,并檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá),進(jìn)而評(píng)估藤黃酸對(duì)結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞的殺傷作用。再進(jìn)行mRNA微陣列鑒定受藤黃酸影響的下游基因,并進(jìn)行Rescue實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步闡明下游基因參與藤黃酸殺傷結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞的機(jī)制。本研究為了在體內(nèi)和體外直觀地觀察腫瘤干細(xì)胞,構(gòu)建了在Nanog啟動(dòng)子控制下的攜帶綠色熒光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）和熒光素酶（Luciferase,Lu... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

GA體外殺傷腫瘤活性的評(píng)價(jià)（A-B)用CCK-8法評(píng)估了經(jīng)GA處理后的CRC細(xì)胞的增殖能力；(C)GA（0.5或1μmol/l）處理

廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文28圖2GA對(duì)CRC腫瘤干細(xì)胞的殺傷作用（A)GA使CRC細(xì)胞的腫瘤球形成數(shù)量降低；(B)經(jīng)GA處理后，HCT116細(xì)胞的CD133+CD44+細(xì)胞比例降低；(C)GA使SW480細(xì)胞中的SP細(xì)胞百分比降低；(D)GA對(duì)CD133+CD44+和非CD133+CD44+CRC細(xì)胞的抗腫瘤活性相同；(E)GA以及5-FU處理CRC細(xì)胞48h后進(jìn)行CCK-8測(cè)定（*，P<0.05；**，P<0.01）。3、GA下調(diào)了結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞中干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)干細(xì)胞相關(guān)的基因(即Nanog、Oct4、Sox2、ALDH1和Bmi-1)經(jīng)常被用于從臨床樣本和各種癌細(xì)胞系中識(shí)別腫瘤干細(xì)胞的群體。為了評(píng)價(jià)GA治療對(duì)CRC細(xì)胞干細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響，采用RT-PCR和WB對(duì)具有代表性的干細(xì)胞標(biāo)記物進(jìn)行了分析。而研究結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組（GA處理組）的干細(xì)胞相關(guān)基因(Nanog、Oct4、ALDH1、CD133和Bmi-1)在RNA轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)顯著降低（圖3A）。如圖3B所示，干細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)(Nanog、Oct4、ALDH1和Bmi-1)在蛋白質(zhì)水平上的表達(dá)也顯著下降。綜上所述，GA能顯著下調(diào)結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞中干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)。

結(jié)果29圖3GA降低了CRC細(xì)胞中干性相關(guān)基因的表達(dá)。（A)通過RT-PCR檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組（GA處理）中CRC細(xì)胞的干細(xì)胞相關(guān)基因（ALDH1、Bmi-1、Nanog、Oct-4和CD133）表達(dá)，在mRNA水平上分析表達(dá)差異性；(B)采用WB技術(shù)，在蛋白質(zhì)水平上分析對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組（GA處理）中CRC細(xì)胞干細(xì)胞相關(guān)基因（Bmi-1、Nanog、Oct-4和ALDH1）的表達(dá)差異性（*，P<0.05；**，P<0.01）。4、GA能顯著下調(diào)EMT相關(guān)基因的表達(dá)，降低CRC細(xì)胞的遷移侵襲能力EMT已被證明為腫瘤干細(xì)胞的特征標(biāo)志物之一[35]。因此，本研究通過RT-PCR和WB評(píng)估GA對(duì)CRC細(xì)胞EMT相關(guān)基因表達(dá)的影響。與預(yù)期一樣，經(jīng)GA處理的CRC細(xì)胞在轉(zhuǎn)錄水平上表現(xiàn)出間質(zhì)分子特征，E-cadherin表達(dá)增加，N-cadherin、vimentin和纖連蛋白表達(dá)減少(圖4A)。并通過WB技術(shù)進(jìn)一步在蛋白質(zhì)水平上驗(yàn)證β-catenin和vimentin表達(dá)的下降(圖4B)。而為了進(jìn)一步驗(yàn)證GA能否能降低CRC細(xì)胞的遷移侵襲能力，本研究運(yùn)用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)以及Boyden侵襲實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)GA對(duì)CRC細(xì)胞遷移侵襲能力的

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Gambogic Acid Induces Cell Apoptosis and Inhibits MAPK Pathway in PTEN-/-/p53-/- Prostate Cancer Cells In Vitro and Ex Vivo[J]. PAN Hong,LU Li-yuan,WANG Xue-qian,LI Bin-xue,Kathleen Kelly,LIN Hong-sheng.  Chinese Journal of Integrative Medicine. 2018(02)

碩士論文
[1]藤黃科的民族植物學(xué)研究[D]. 張昕勃.中央民族大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3536833