目的:膿毒癥是機(jī)體對感染反應(yīng)失調(diào)引起的危及生命的器官功能障礙綜合征,而肺臟是膿毒癥主要的靶器官。膿毒癥疾病發(fā)展引起的ALI及ARDS至今無特效的治療藥物,死亡率極高。因此,本實驗研究的主要目的是明確PD-1/PD-L1抑制劑是否能減少肺泡巨噬細(xì)胞凋亡,恢復(fù)肺泡巨噬細(xì)胞免疫功能,提高清除細(xì)菌能力。另一方面,明確PD-1/PD-L1抑制劑是否能減少肺泡巨噬細(xì)胞炎癥因子的釋放,從而減輕炎癥反應(yīng)及肺組織損傷程度,起到肺保護(hù)作用。方法:在無菌的6孔板中培養(yǎng)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞MH-S,并將其分為對照組（control）,LPS和LPS+BMS-1組。將脂多糖（LPS）（10 ng/mL）添加到LPS和LPS+BMS-1組中培養(yǎng)24小時。隨后,將PD-1/PD-L1抑制劑BMS-1（1μM）添加到LPS+BMS-1組中培養(yǎng)72小時。通過qRT-PCR檢測PD-1 mRNA的表達(dá)水平;蛋白印跡檢Western blot測PD-1蛋白表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測MH-S細(xì)胞凋亡情況;ELISA檢測炎性因子IL-1β,IL-6,TNF-α和IL-10的水平。結(jié)果:小鼠肺泡巨噬細(xì)胞在分子和蛋白水平上均表達(dá)PD-1... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：35 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

BMS-1的化學(xué)結(jié)構(gòu)

山西醫(yī)科大學(xué)（博）碩士學(xué)位論文52結(jié)果2.1BMS-1抑制LPS誘導(dǎo)的MH-S細(xì)胞中PD-1mRNA和蛋白的表達(dá)為了探索BMS-1對LPS誘導(dǎo)的MH-S細(xì)胞的影響，通過qRT-PCR和Westernblot方法評估了BMS-1對PD-1mRNA和PD-1蛋白的影響。與control組相比，LPS處理過的MH-S細(xì)胞中PD-1mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高。MH-S細(xì)胞經(jīng)BMS-1干預(yù)后，與對照組相比，并未觀察到PD-1mRNA或PD-1蛋白表達(dá)水平有顯著差異。但值得注意的是，與LPS組相比，用BMS-1處理的MH-S細(xì)胞中PD-1mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低（圖2、圖3）。BMS-1能夠抑制LPS誘導(dǎo)的MH-S細(xì)胞中PD-1的表達(dá)。圖2.BMS-1對LPS誘導(dǎo)的MH-S細(xì)胞中PD-1mRNA表達(dá)的影響（用10ng/mLLPS刺激MH-S細(xì)胞24h，然后用1μMBMS-1干預(yù)72h。通過qRT-PCR方法檢測處理的MH-S細(xì)胞中mRNA表達(dá)水平。實驗重復(fù)三次。實驗數(shù)據(jù)均表示為平均值±SD。*：LPS組與對照組比較，P=0.000，P<0.01；＆：LPS+BMS-1組與LPS組相比，P=0.003，P＜0.01。）

山西醫(yī)科大學(xué)（博）碩士學(xué)位論文6圖3.BMS-1對LPS誘導(dǎo)的MH-S細(xì)胞PD-1蛋白表達(dá)的影響(用10ng/mLLPS刺激MH-S細(xì)胞24h，然后用1μMBMS-1處理72h。通過Westernblot印跡測定處理的MH-S細(xì)胞中PD-1蛋白表達(dá)水平。實驗重復(fù)三次。實驗數(shù)據(jù)均表示為平均值±SD。*：LPS組與對照組比較，P<0.01；＆：LPS+BMS-1組與LPS組相比，P＜0.01。)2.2BMS-1抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠肺泡巨噬細(xì)胞凋亡為了研究BMS-1在LPS刺激的MH-S細(xì)胞中的凋亡作用，進(jìn)行了流式細(xì)胞術(shù)并計算了凋亡細(xì)胞的數(shù)量。如圖4所示，用LPS處理的MH-S細(xì)胞與對照組相比凋亡增強(qiáng)，而用BMS-1干預(yù)過的MH-S細(xì)胞凋亡明顯較LPS組減弱。結(jié)合圖2、圖3的結(jié)果，LPS組PD-1表達(dá)增加，LPS+BMS-1組PD-1表達(dá)較LPS組明顯降低。這說明LPS刺激后，小鼠肺泡巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出高水平的PD-1與MH-S細(xì)胞凋亡增加程度呈正相關(guān)。用PD-1/PD-L1抑制劑BMS-1干預(yù)后，PD-1表達(dá)和肺泡巨噬細(xì)胞凋亡均降低。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-155對膿毒癥急性肺損傷肺泡巨噬細(xì)胞IL-6、IL-10及MIP-2的影響[J]. 付玉梅,周佳偉,劉凱,侯林義,張文凱.  中華重癥醫(yī)學(xué)電子雜志(網(wǎng)絡(luò)版). 2019(02)
[2]程序性細(xì)胞死亡因子-1在大鼠肺缺血再灌注損傷中的作用[J]. 何義,林飛,潘靈輝,杜學(xué)柯,葛萬運,王甜甜,肖靖遠(yuǎn).  實用醫(yī)學(xué)雜志. 2019(08)



本文編號：3536216