目的:應用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)構(gòu)建慢病毒載體以降低缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）基因在精索靜脈曲張（varicocele,VC）大鼠睪丸組織中的表達。通過測定附睪精子的密度和活力,分析降低HIF-1α表達后對VC大鼠睪丸生精功能的改善作用;通過HE染色觀察睪丸組織形態(tài)結(jié)構(gòu),分析降低HIF-1α表達后對VC大鼠睪丸組織形態(tài)的改善作用;通過檢測凋亡相關(guān)蛋白,分析HIF-1α在誘導生精細胞凋亡中的作用,從而探索精索靜脈曲張大鼠的生精功能改變機制。方法:1.構(gòu)建慢病毒載體并感染于VC大鼠睪丸組織內(nèi)30只SD大鼠隨機分為對照組（C組）、VC模型組（V組）、VC+HIF-1α慢病毒組（H組）、VC+Luc慢病毒組（L組）,采用經(jīng)典的左腎靜脈部分結(jié)扎的方法制備VC模型。構(gòu)建HIF-1α基因低表達的慢病毒載體,并選擇滴度大于1×10⁹ TU/ml的慢病毒用于感染大鼠。2.HIF-1α在大鼠睪丸組織中的沉默效果慢病毒-HIF-1α和慢病毒-Luc分別轉(zhuǎn)染于H組和L組大鼠睪丸,兩個月后提取睪丸組織,通過RT-PCR、Western blot和免疫熒光技術(shù)檢測HIF-... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠左側(cè)精索靜脈直徑測量結(jié)果

山西醫(yī)科大學碩士學位論文21圖2菌落PCR鑒定結(jié)果Fig2.PCRidentificationresultsofmonoclonalcolonies2.3陽性克隆測序結(jié)果HIF-1α基因序列經(jīng)過退火和磷酸化形成雙鏈，然后與慢病毒載體lenticrisprv2進行連接，將重組產(chǎn)物送去生工生物進行測序。下圖是重組載體測序圖譜，測序圖譜顯示插入慢病毒的核苷酸序列與設(shè)計的序列一致，說明載體構(gòu)建成功(圖3)。圖3陽性克隆的測序結(jié)果。A：HIF-1α慢病毒載體；B：Luc慢病毒載體。Fig3.Sequencingresultsofpositiveclones.A:HIF-1αlentivirusvector;B:Luclentivirusvector

山西醫(yī)科大學碩士學位論文21圖2菌落PCR鑒定結(jié)果Fig2.PCRidentificationresultsofmonoclonalcolonies2.3陽性克隆測序結(jié)果HIF-1α基因序列經(jīng)過退火和磷酸化形成雙鏈，然后與慢病毒載體lenticrisprv2進行連接，將重組產(chǎn)物送去生工生物進行測序。下圖是重組載體測序圖譜，測序圖譜顯示插入慢病毒的核苷酸序列與設(shè)計的序列一致，說明載體構(gòu)建成功(圖3)。圖3陽性克隆的測序結(jié)果。A：HIF-1α慢病毒載體；B：Luc慢病毒載體。Fig3.Sequencingresultsofpositiveclones.A:HIF-1αlentivirusvector;B:Luclentivirusvector

【參考文獻】：
期刊論文
[1]一氧化氮、一氧化氮合酶與伴精索靜脈曲張不育患者精液參數(shù)的關(guān)系[J]. 許苑,徐慶陽,楊本海,朱向明,彭弋峰.  中華男科學雜志. 2008(05)

碩士論文
[1]缺氧在精索靜脈曲張導致不育中的研究[D]. 曹歡.第二軍醫(yī)大學 2013



本文編號：3535994