目的:1、通過(guò)構(gòu)建CRISPR/Cas9慢病毒載體,感染SMMC-7721細(xì)胞,獲得穩(wěn)定表達(dá)Cas9蛋白的SMMC-7721-Cas9細(xì)胞以及My D88基因敲除的SMMC-7721-My D88-/-/My D88+/+混合細(xì)胞,搭建CRISPR/Cas9基因編輯平臺(tái)。2、SMMC-7721-My D88-/-單克隆細(xì)胞的篩選與敲除鑒定。方法:1、CRISPR/Cas9基因編輯平臺(tái)的搭建:（1）設(shè)計(jì)合成My D88基因特異性的3對(duì)sg RNA（sg RNA-1、sg RNA-2、sg RNA-3）,并將其連接到表達(dá)質(zhì)粒GV375上,重組的GV375表達(dá)質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞內(nèi),產(chǎn)生慢病毒顆粒,并通過(guò)熒光法檢測(cè)病毒滴度;（2）確定慢病毒感染的最適MOI,以及嘌呤霉素篩選的最適劑量;（3）首先將Lenti-Cas9-puro慢病毒感染SMMC-7721細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選得到SMMC-7721-Cas9細(xì)胞,然后用Lenti-sg RNA-Cherry病毒感染SMMC-7721-Cas9細(xì)胞,獲得SMMC-7721-My D88-/-/My D88+/+混合細(xì)胞,并通過(guò)PCR... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3529181