目的:研究雌三醇對乙型肝炎病毒（HBV）轉錄和復制水平的影響。方法:采用不同濃度（從640μmol/L到5μmol/L倍比稀釋）的雌三醇作用于體外培養(yǎng)的HepG2. 2. 15和HepG2-NTCP細胞,MTS法檢測雌三醇的細胞毒性。用10、20和40μmol/L雌三醇處理HepG2. 2. 15和HepG2-NTCP細胞,以恩替卡韋（25 nmol/L）作為陽性對照,6 d后采用RT-qPCR法檢測細胞中HBV DNA和RNA水平,ELISA法檢測上清中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）水平。對雄性HBV轉基因小鼠腹腔注射雌三醇（5 mg/kg）,以恩替卡韋（0. 02 mg/kg）作為陽性對照,28 d后取小鼠血清和肝臟,采用ELISA法檢測血清中丙氨酸轉氨酶（ALT）、天冬氨酸轉氨酶（AST）、HBsAg和HBeAg水平,RT-qPCR法檢測血清和肝臟中HBV DNA水平及肝臟中HBV RNA水平。結果:與對照組相比,10、20和40μmol/L雌三醇可以顯著降低HepG2. 2. 15和HepG2-NTCP細胞分泌的HBsAg和HBeAg水平及細胞中H... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2020,36(07)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

雌三醇對HepG2.2.15和HepG2-NTCP細胞活力的影響

牛磺膽酸鈉共轉運多肽（sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP）是HBV感染肝細胞的受體，HepG2-NTCP細胞能夠模擬自然狀態(tài)下HBV的復制過程。進一步，我們利用此模型研究了雌三醇對HBV復制的影響。我們對感染HBV的HepG2-NTCP細胞分別用10、20和40μmol/L雌三醇處理，并以25 nmol/L ETV為陽性對照，6 d后，RT-qPCR結果顯示，HepG2-NTCP細胞中HBV core DNA水平分別降低27%、40%和57%（圖3A),HBV RNA水平分別降低16%、32%和49%（圖3B);ELISA結果顯示，HBsAg水平分別降低17%、26%和33%,HBeAg水平分別降低19%、31%和41%（圖3C、D）。4 雌三醇在HBV轉基因小鼠模型中的抗病毒效能

雌激素及雌激素受體在HBV感染及相關肝病中的作用已比較明確[16-17]。存在于人體中的雌激素有3種，包括雌二醇、雌酮和雌三醇，其中雌二醇可通過上調雌激素受體的表達而抑制HBV的轉錄活性，發(fā)揮抑制HBV復制的作用[18]，而雌三醇作為雌二醇的代謝產物，在HBV復制和轉錄中的作用目前尚無報道。本研究首先利用HBV穩(wěn)定表達細胞模型HepG2.2.15細胞和HBV感染細胞模型HepG2-NTCP細胞研究了雌三醇對HBV復制的調控作用。在HBV生活周期中，HBV的復制過程首先由HBV的共價閉合環(huán)狀DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA）轉錄成不同大小的HBV RNAs，并表達HBV蛋白，HBV RNAs中的3.5 kb RNA可作為模板逆轉錄形成HBV DNA。我們的細胞研究結果顯示，在IC50范圍內雌三醇明顯下調了HBV RNA和DNA水平以及HBsAg和HBeAg分泌水平，并呈濃度依賴性，表明雌三醇在體外可顯著抑制HBV生活周期中的轉錄和復制過程。為了證實研究結果的可靠性，我們又利用HBV轉基因小鼠模型證實了雌三醇在體內也具有較強的抑制HBV轉錄和復制的作用，這些研究結果充分證實了雌三醇對HBV復制過程發(fā)揮負向調控作用。圖4 雌三醇在HBV轉基因小鼠模型中的抗病毒效能

【參考文獻】：
期刊論文
[1]乙型肝炎病毒與性激素相互作用的研究進展[J]. 孫健,王甦.  實用臨床醫(yī)藥雜志. 2019(21)
[2]HBV PC區(qū)和BCP區(qū)變異與Peg-IFNα-2b療效的關系及治療前后的變化[J]. 汪波,劉艷艷,李家斌.  中國病理生理雜志. 2018(09)
[3]雌激素在慢性肝病發(fā)生發(fā)展中的作用研究現(xiàn)狀[J]. 趙雷,張瑋.  實用肝臟病雜志. 2015(05)



本文編號：3525861