目的:研究雌三醇對乙型肝炎病毒（HBV）轉(zhuǎn)錄和復(fù)制水平的影響。方法:采用不同濃度（從640μmol/L到5μmol/L倍比稀釋）的雌三醇作用于體外培養(yǎng)的HepG2. 2. 15和HepG2-NTCP細(xì)胞,MTS法檢測雌三醇的細(xì)胞毒性。用10、20和40μmol/L雌三醇處理HepG2. 2. 15和HepG2-NTCP細(xì)胞,以恩替卡韋（25 nmol/L）作為陽性對照,6 d后采用RT-qPCR法檢測細(xì)胞中HBV DNA和RNA水平,ELISA法檢測上清中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）水平。對雄性HBV轉(zhuǎn)基因小鼠腹腔注射雌三醇（5 mg/kg）,以恩替卡韋（0. 02 mg/kg）作為陽性對照,28 d后取小鼠血清和肝臟,采用ELISA法檢測血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、HBsAg和HBeAg水平,RT-qPCR法檢測血清和肝臟中HBV DNA水平及肝臟中HBV RNA水平。結(jié)果:與對照組相比,10、20和40μmol/L雌三醇可以顯著降低HepG2. 2. 15和HepG2-NTCP細(xì)胞分泌的HBsAg和HBeAg水平及細(xì)胞中H... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2020,36(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

雌三醇對HepG2.2.15和HepG2-NTCP細(xì)胞活力的影響

牛磺膽酸鈉共轉(zhuǎn)運(yùn)多肽（sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP）是HBV感染肝細(xì)胞的受體，HepG2-NTCP細(xì)胞能夠模擬自然狀態(tài)下HBV的復(fù)制過程。進(jìn)一步，我們利用此模型研究了雌三醇對HBV復(fù)制的影響。我們對感染HBV的HepG2-NTCP細(xì)胞分別用10、20和40μmol/L雌三醇處理，并以25 nmol/L ETV為陽性對照，6 d后，RT-qPCR結(jié)果顯示，HepG2-NTCP細(xì)胞中HBV core DNA水平分別降低27%、40%和57%（圖3A),HBV RNA水平分別降低16%、32%和49%（圖3B);ELISA結(jié)果顯示，HBsAg水平分別降低17%、26%和33%,HBeAg水平分別降低19%、31%和41%（圖3C、D）。4 雌三醇在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型中的抗病毒效能

雌激素及雌激素受體在HBV感染及相關(guān)肝病中的作用已比較明確[16-17]。存在于人體中的雌激素有3種，包括雌二醇、雌酮和雌三醇，其中雌二醇可通過上調(diào)雌激素受體的表達(dá)而抑制HBV的轉(zhuǎn)錄活性，發(fā)揮抑制HBV復(fù)制的作用[18]，而雌三醇作為雌二醇的代謝產(chǎn)物，在HBV復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中的作用目前尚無報(bào)道。本研究首先利用HBV穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞模型HepG2.2.15細(xì)胞和HBV感染細(xì)胞模型HepG2-NTCP細(xì)胞研究了雌三醇對HBV復(fù)制的調(diào)控作用。在HBV生活周期中，HBV的復(fù)制過程首先由HBV的共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA）轉(zhuǎn)錄成不同大小的HBV RNAs，并表達(dá)HBV蛋白，HBV RNAs中的3.5 kb RNA可作為模板逆轉(zhuǎn)錄形成HBV DNA。我們的細(xì)胞研究結(jié)果顯示，在IC50范圍內(nèi)雌三醇明顯下調(diào)了HBV RNA和DNA水平以及HBsAg和HBeAg分泌水平，并呈濃度依賴性，表明雌三醇在體外可顯著抑制HBV生活周期中的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制過程。為了證實(shí)研究結(jié)果的可靠性，我們又利用HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型證實(shí)了雌三醇在體內(nèi)也具有較強(qiáng)的抑制HBV轉(zhuǎn)錄和復(fù)制的作用，這些研究結(jié)果充分證實(shí)了雌三醇對HBV復(fù)制過程發(fā)揮負(fù)向調(diào)控作用。圖4 雌三醇在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型中的抗病毒效能

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乙型肝炎病毒與性激素相互作用的研究進(jìn)展[J]. 孫健,王甦.  實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志. 2019(21)
[2]HBV PC區(qū)和BCP區(qū)變異與Peg-IFNα-2b療效的關(guān)系及治療前后的變化[J]. 汪波,劉艷艷,李家斌.  中國病理生理雜志. 2018(09)
[3]雌激素在慢性肝病發(fā)生發(fā)展中的作用研究現(xiàn)狀[J]. 趙雷,張瑋.  實(shí)用肝臟病雜志. 2015(05)



本文編號：3525861