目的:阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease,AD）是一種與年齡密切相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病。自噬紊亂可能是誘發(fā)AD的重要原因之一,本文旨在研究二氫楊梅素（Dihydromyricetin,DHM）能否通過影響自噬對阿爾茨海默病小鼠模型及細(xì)胞模型發(fā)揮保護作用,并探討潛在的作用機制。方法:在動物實驗中,選取7月齡的APP/PS1轉(zhuǎn)基因癡呆模型小鼠隨機分為AD對照組和DHM治療組,7月齡野生型C57BL/6J小鼠作為WT正常對照組,每組均為10只。DHM治療組小鼠按照1mg/（kg·d）的劑量腹腔注射DHM,AD對照組和WT正常對照組小鼠注射等量經(jīng)生理鹽水稀釋的DMSO溶液,連續(xù)按時給藥28 d。在細(xì)胞實驗中,選取人的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y細(xì)胞,以及穩(wěn)轉(zhuǎn)APP基因的APP-SH-SY5Y細(xì)胞作為細(xì)胞模型,以40μmol/L濃度的DHM處理24 h后的APP-SH-SY5Y細(xì)胞為DHM-APP組,同濃度的DMSO稀釋液處理24 h的SH-SY5Y細(xì)胞為CON組,APP-SH-SY5Y細(xì)胞為APP組。采用Morris水迷宮實驗（Morris Water Maze,MWM）檢... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Morris水迷宮實驗檢測DHM對AD小鼠的作用

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文25圖3：DHM對AD小鼠腦內(nèi)自噬相關(guān)蛋白的作用。Fig.3：EffectofDHMonautophagy-relatedproteinsinthebrainofADmice.2.4DHM對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織超微結(jié)構(gòu)的影響TEM觀察顯示，AD組小鼠腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)明顯水腫，高爾基體、線粒體等細(xì)胞器明顯腫脹(圖4，B)，并在多處發(fā)現(xiàn)深染的晚期自噬小體的存在(圖4，E)。DHM組小鼠腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞及細(xì)胞器的水腫現(xiàn)象明顯減弱(圖4，C)，并發(fā)現(xiàn)了正常自噬溶酶體的存在(圖4，F(xiàn))。以上結(jié)果表明，AD小鼠腦內(nèi)自噬小體與溶酶體的結(jié)合可能受阻，DHM可顯著恢復(fù)AD小鼠自噬流的紊亂性。圖4：DHM對AD小鼠腦內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的作用。Fig.4：TheeffectofDHMontheultrastructureofADmousebrain.A,B,C:10000X,100kV.D,E,F:40000X,100kV.比例尺：A,B,C=2μm，D,E,F=250nm.

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文262.5DHM對APP-SH-SY5Y細(xì)胞模型的自噬相關(guān)蛋白的影響WB檢測發(fā)現(xiàn)（圖5），與CON組相比，APP組自噬調(diào)控基因Beclin1、自噬特異性標(biāo)記分子LC3-Ⅱ/Ⅰ表達(dá)均無明顯變化(P>0.05)，自噬體與溶酶體融合標(biāo)志蛋白Rab7b表達(dá)也未發(fā)生明顯變化(P>0.05)，自噬底物相關(guān)蛋白p62(P<0.01)、溶酶體相關(guān)膜蛋白LAMP1(P<0.001)表達(dá)明顯升高。與APP組相比，DHM-APP組Beclin1表達(dá)增高(P<0.01)，LC3-Ⅱ/Ⅰ表達(dá)無明顯變化(P>0.05)，Rab7表達(dá)升高(P<0.00)，p62(P<0.001)、LAMP1(P<0.01)表達(dá)明顯降低。以上結(jié)果表明，APP組細(xì)胞的自噬流自噬溶酶體降解功能受損，DHM干預(yù)后自噬流中期自噬體和溶酶體的融合增多，自噬溶酶體的降解功能得到了顯著改善。圖5：DHM對APP細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白的作用。Fig.3：EffectofDHMonautophagy-relatedproteinsintheAPPcell.


本文編號：3477251