目的:阿爾茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一種與年齡密切相關的神經(jīng)退行性疾病。自噬紊亂可能是誘發(fā)AD的重要原因之一,本文旨在研究二氫楊梅素（Dihydromyricetin,DHM）能否通過影響自噬對阿爾茨海默病小鼠模型及細胞模型發(fā)揮保護作用,并探討潛在的作用機制。方法:在動物實驗中,選取7月齡的APP/PS1轉基因癡呆模型小鼠隨機分為AD對照組和DHM治療組,7月齡野生型C57BL/6J小鼠作為WT正常對照組,每組均為10只。DHM治療組小鼠按照1mg/（kg·d）的劑量腹腔注射DHM,AD對照組和WT正常對照組小鼠注射等量經(jīng)生理鹽水稀釋的DMSO溶液,連續(xù)按時給藥28 d。在細胞實驗中,選取人的神經(jīng)母細胞瘤細胞系SH-SY5Y細胞,以及穩(wěn)轉APP基因的APP-SH-SY5Y細胞作為細胞模型,以40μmol/L濃度的DHM處理24 h后的APP-SH-SY5Y細胞為DHM-APP組,同濃度的DMSO稀釋液處理24 h的SH-SY5Y細胞為CON組,APP-SH-SY5Y細胞為APP組。采用Morris水迷宮實驗（Morris Water Maze,MWM）檢... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Morris水迷宮實驗檢測DHM對AD小鼠的作用

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文25圖3：DHM對AD小鼠腦內自噬相關蛋白的作用。Fig.3：EffectofDHMonautophagy-relatedproteinsinthebrainofADmice.2.4DHM對APP/PS1雙轉基因小鼠腦組織超微結構的影響TEM觀察顯示，AD組小鼠腦內神經(jīng)細胞出現(xiàn)明顯水腫，高爾基體、線粒體等細胞器明顯腫脹(圖4，B)，并在多處發(fā)現(xiàn)深染的晚期自噬小體的存在(圖4，E)。DHM組小鼠腦內神經(jīng)細胞及細胞器的水腫現(xiàn)象明顯減弱(圖4，C)，并發(fā)現(xiàn)了正常自噬溶酶體的存在(圖4，F(xiàn))。以上結果表明，AD小鼠腦內自噬小體與溶酶體的結合可能受阻，DHM可顯著恢復AD小鼠自噬流的紊亂性。圖4：DHM對AD小鼠腦內超微結構的作用。Fig.4：TheeffectofDHMontheultrastructureofADmousebrain.A,B,C:10000X,100kV.D,E,F:40000X,100kV.比例尺：A,B,C=2μm，D,E,F=250nm.

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文262.5DHM對APP-SH-SY5Y細胞模型的自噬相關蛋白的影響WB檢測發(fā)現(xiàn)（圖5），與CON組相比，APP組自噬調控基因Beclin1、自噬特異性標記分子LC3-Ⅱ/Ⅰ表達均無明顯變化(P>0.05)，自噬體與溶酶體融合標志蛋白Rab7b表達也未發(fā)生明顯變化(P>0.05)，自噬底物相關蛋白p62(P<0.01)、溶酶體相關膜蛋白LAMP1(P<0.001)表達明顯升高。與APP組相比，DHM-APP組Beclin1表達增高(P<0.01)，LC3-Ⅱ/Ⅰ表達無明顯變化(P>0.05)，Rab7表達升高(P<0.00)，p62(P<0.001)、LAMP1(P<0.01)表達明顯降低。以上結果表明，APP組細胞的自噬流自噬溶酶體降解功能受損，DHM干預后自噬流中期自噬體和溶酶體的融合增多，自噬溶酶體的降解功能得到了顯著改善。圖5：DHM對APP細胞內自噬相關蛋白的作用。Fig.3：EffectofDHMonautophagy-relatedproteinsintheAPPcell.


本文編號：3477251