吉非替尼的獲得性耐藥是導(dǎo)致肺癌靶向治療失敗,患者預(yù)后差、死亡率高的主要原因之一。目前所能預(yù)測吉非替尼耐藥的分子標記物匱乏且單一。外泌體作為細胞間傳遞信號的囊泡,隨著研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)其在腫瘤發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移和耐藥等方面發(fā)揮著重要作用。目的本實驗通過對人肺腺癌細胞株（PC9）和人肺腺癌吉非替尼耐藥株（PC9R）來源的外泌體進行circ RNA高通量差異表達分析,尋找出新的潛在預(yù)測耐藥的分子標記物。方法收集PC9和PC9R細胞上清液,并且進行外泌體提取、觀察與鑒定;通過高通量測序建立了外泌體中環(huán)狀RNA（circ RNA）差異表達譜;挑選出差異表達最顯著的目標circ RNA;收集吉非替尼敏感的肺腺癌患者及吉非替尼耐藥患者外周血,運用實時熒光定量PCR（q RT-PCR）驗證外周血外泌體中目標circ RNA表達,再運用數(shù)據(jù)庫、R語言對該circ RNA下游mi RNA和靶基因預(yù)測并且進行通路富集分析,進一步探究外泌體circ RNA參與吉非替尼耐藥的分子網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果1.我們分離出PC9和PC9R細胞上清液中的胞外顆粒。透射電鏡下,外泌體外形呈類圓形;粒徑檢測儀結(jié)果顯示直徑均值在30-1... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

測序文庫構(gòu)建

外泌體電鏡

19圖3粒徑檢測圖圖4WB分析2.外泌體circRNA表達譜分析我們對PC9細胞和PC9R細胞上清液外泌體進行高通量測序，一共檢測到2286個circRNA，接著我們按照顯著差異水平標準（logFC＞1或logFC＜-1、P＜0.05）進行過濾，挑選出樣本間差異表達的circRNA共有376個，其中35個circRNA表達上調(diào)明顯，341個circRNA表達下調(diào)明顯。然后對circRNA在染色體上的分布分析（圖5A）和circRNA序列長度分析（圖5B），我們發(fā)現(xiàn)差異表達的circRNAPC9PC9RPC9PC9R123123TSG101CD9CD63

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Hippo信號通路與癌癥相關(guān)研究進展[J]. 張麗娜,占婷.  疑難病雜志. 2018(12)
[2]TRIM24介導(dǎo)肺癌細胞吉非替尼耐藥機制探討[J]. 李海英,王慶苓,包海軍,張恒,莊瑩.  中國肺癌雜志. 2016(01)
[3]腫瘤細胞來源的Exosomes的研究進展[J]. 楊云山,鐘海均,林能明.  中國腫瘤生物治療雜志. 2014(04)
[4]肺腺癌EGFR-TKI獲得性耐藥突變T790M的發(fā)現(xiàn)[J]. 王潔,白曉燕.  循證醫(yī)學(xué). 2008(04)
[5]DADS誘導(dǎo)人胃癌細胞分化作用中ERK/AP-1通路的改變[J]. 凌暉,宋穎,曾鐵兵,袁靜萍,蘇琦.  中國藥理學(xué)通報. 2003(11)

博士論文
[1]Hippo信號關(guān)鍵因子TAZ調(diào)控EMT增敏肺癌靶向治療的研究[D]. 許偉.南京醫(yī)科大學(xué) 2016



本文編號：3457808