目的:研究miR-4458在人肝細(xì)胞癌侵襲遷移中的作用及機(jī)制。方法:（1）通過(guò)qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)23對(duì)肝細(xì)胞癌及配對(duì)癌旁組織中miR-4458的表達(dá)情況,利用Kaplan-Meier Plotter數(shù)據(jù)庫(kù)分析miR-4458表達(dá)水平對(duì)肝細(xì)胞癌患者總體生存率的影響。（2）調(diào)控miR-4458在人肝細(xì)胞癌細(xì)胞系Hep3B和Huh7中的表達(dá)水平。通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-4458對(duì)肝細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響,并通過(guò)Western blot檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail的表達(dá)變化。（3）使用qRT-PCR以及Western blot等方法檢測(cè)miR-4458對(duì)靶基因及通路分子的影響。結(jié)果:（1）相較于配對(duì)癌旁組織,miR-4458在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)明顯下降,低表達(dá)miR-4458提示患者生存預(yù)期較差。（2）在肝細(xì)胞癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-4458可抑制細(xì)胞的侵襲、遷移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,去表達(dá)miR-4458可促進(jìn)肝細(xì)胞癌細(xì)胞的惡性表型。（3）miR-4458能抑制TGFBR1的表達(dá),并通過(guò)抑制TGF... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

miR-4458在肝細(xì)胞組織和細(xì)胞系中的表達(dá)Figure1.TheexpressionofmiR-4458inHCCtissuesandcelllines

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文17（*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001）(A)TheexpressionofmiR-4458in23pairedHCCtissues.(B)TheexpressionofmiR-4458inLO2cellsandHCCcelllines.(C)ThesurvivalrateofHCCpatientswashigherinthehighmiR-4458levelgroupthaninthelowmiR-4458levelgroup.(*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001)2.2miR-4458抑制肝細(xì)胞癌細(xì)胞的侵襲遷移我們通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估m(xù)iR-4458對(duì)肝細(xì)胞癌細(xì)胞系侵襲遷移能力的影響。在劃痕實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染了miR-4458mimics的Hep3B細(xì)胞細(xì)胞遷移的距離較對(duì)照組明顯縮短（圖2A），而轉(zhuǎn)染miR-4458inhibitor的Huh7細(xì)胞細(xì)胞遷移距離較對(duì)照組明顯增加（圖2C）。在transwell實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染了miR-4458mimics的Hep3B細(xì)胞下層小室跨膜細(xì)胞數(shù)量明顯下降（圖2B），而轉(zhuǎn)染miR-4458inhibitor的Huh7細(xì)胞下層小室跨膜細(xì)胞數(shù)量明顯增多（圖2D）。圖2.miR-4458調(diào)控肝細(xì)胞癌遷移和侵襲Figure2.miR-4458regulatesHCCcellmigrationandinvasion(A,B)使用劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-4445的Hep3B細(xì)胞遷移和侵襲能力。(C,D)使用劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)去表達(dá)miR-4458的Huh7細(xì)胞遷移和侵襲能力。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文19圖3.miR-4458抑制肝細(xì)胞癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化Figure3.miR-4458inhibitstheEMTofHCCcells(A,C)通過(guò)Westernblot和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Hep3B細(xì)胞中EMT標(biāo)志蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail的表達(dá)。(B,D)通過(guò)Westernblot和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Huh7細(xì)胞中EMT標(biāo)志蛋白的表達(dá)。(A,C)ProteinlevelsoftheEMTmarkersE-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,andSnailweredetectedinHep3Bcellsbywesternblotandimmunofluorescenceassay.(B,D)Huh7cellsweretransfectedwithNCinhibitorormiR-4458inhibitor,andE-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,andSnailproteinlevelsweredetectedbywesternblotandimmunofluorescenceassay.2.4miR-4458靶向抑制TGFBR1的表達(dá)我們通過(guò)4個(gè)公共數(shù)據(jù)庫(kù)miRDB、TargetScan、miRWalk和DIANATOOLS預(yù)測(cè)出TGFBR1是miR-4458的潛在靶基因（圖4A）。雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)顯示miR-4458mimics可以降低野生型TGFBR1-3’UTR的熒光信號(hào)，但不能改變突變型TGFBR1-3’UTR的熒光信號(hào)（圖4B）。說(shuō)明miR-4458可以與TGFBR1-3’UTR靶


本文編號(hào)：3381218