本文關(guān)鍵詞：深海鏈霉菌Streptomyces sp.OUCMDZ-4112的活性次生代謝產(chǎn)物研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：海洋具有豐富的微生物資源,又因其特殊的高壓、高鹽、低溫、低光照和低營(yíng)養(yǎng)的特殊環(huán)境,使得生活在其中的微生物具有與陸地微生物不同的代謝機(jī)制。海洋微生物來源的次級(jí)代謝產(chǎn)物具有新穎的結(jié)構(gòu)以及廣泛的生物活性如抗菌活性、細(xì)胞毒活性、抗氧化活性、抗炎活性等,是新藥開發(fā)的一個(gè)重要資源。至2013年已有8個(gè)海洋來源次生代謝產(chǎn)物被FDA或EMEA批準(zhǔn)進(jìn)入市場(chǎng),10個(gè)進(jìn)入臨床和18個(gè)在臨床試驗(yàn)階段被撤回。在這些藥物或先導(dǎo)化合物中就有一個(gè)海洋放線菌來源的抗癌藥物Marizomib和一個(gè)海洋真菌來源的抗癌藥物Plinabulin。巨大的海洋微生物資源以及海洋微生物在新藥開發(fā)中的重大潛力,使其成為人們研究的熱點(diǎn)之一為了從海洋微生物中發(fā)現(xiàn)具有新穎的化學(xué)結(jié)構(gòu)或是生物活性的菌株,本文通過化學(xué)篩選和生物活性篩選相結(jié)合的篩選模式,對(duì)來自深海的真菌和放線菌進(jìn)行篩選。化學(xué)篩選包括了TLC特征顯示和HPLC-UV分析的方法,對(duì)化合物結(jié)構(gòu)豐富度、新穎性以及化合物產(chǎn)量進(jìn)行篩選；生物活性篩選包括了抑菌活性和細(xì)胞毒活性的篩選,篩選出具有對(duì)腫瘤細(xì)胞株MCF-7或?qū)Π咨钪榫�、大腸桿菌、銅綠桿菌等致病菌具有抑制活性的菌株。綜合篩選結(jié)果,對(duì)其中一株海洋放線菌Streptomyces.sp OUCMDZ-4112進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。以集成的篩選方式,對(duì)通過改變發(fā)酵培養(yǎng)基、時(shí)間、鹽度、pH、溫度等發(fā)酵條件所獲得目標(biāo)菌株的發(fā)酵提取物進(jìn)行篩選,確定了最佳的發(fā)酵條件,獲得大規(guī)模發(fā)酵提取物。通過常規(guī)的硅膠柱色譜、凝膠柱色譜以及HPLC半制備等分離手段對(duì)目標(biāo)菌株兩次發(fā)酵的產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,最終獲得14個(gè)化合物(1-14)。綜合利用質(zhì)譜(MS)、核磁(NMR)、比旋光(OR)、紫外(UV)、紅外光譜(IR)、圓二色譜(CD)和單晶衍射(X-ray)等方法鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)。分離1個(gè)新的和2個(gè)舊的靈菌紅素類化合物,一對(duì)新的吡咯衍生物以及9個(gè)不同結(jié)構(gòu)的已知化合物。對(duì)所得的化合物進(jìn)行了抑菌活性,細(xì)胞毒活性以及α-糖苷酶抑制活性的測(cè)試,結(jié)果表明化合物1和2對(duì)K562具有良好的細(xì)胞毒活性,IC50分別是0.60和0.01μM；1和2還對(duì)細(xì)胞株MCF-7和A549表現(xiàn)了較強(qiáng)的抑制活性�；衔�1還表現(xiàn)了較強(qiáng)的a-糖苷酶抑制活性,IC50值為0.082 mM�；衔�2具有與陽(yáng)性藥(阿卡波糖)相當(dāng)?shù)摩?糖苷酶抑制活性,IC50值為0.92 mM。新的一對(duì)對(duì)映異構(gòu)體并沒有表現(xiàn)出對(duì)所測(cè)細(xì)胞株或致病菌有抑制活性,表現(xiàn)了弱的α-糖苷酶抑制活性,IC50值為2.61 mM�；衔�8對(duì)銅綠桿菌表現(xiàn)了弱的抑制活性。
【關(guān)鍵詞】：海洋微生物 次生代謝產(chǎn)物 化學(xué)篩選 生物活性
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R915
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-12
• 前言12-28
• 第一節(jié) 海洋放線菌來源的活性天然產(chǎn)物12-14
• 第二節(jié) 海洋真菌來源的活性天然產(chǎn)物14-15
• 第三節(jié) 海洋細(xì)菌來源的活性天然產(chǎn)物15-16
• 結(jié)論16-17
• 靈菌紅素類化合物(Prodigiosins)的研究進(jìn)展17-24
• 參考文獻(xiàn)24-28
• 第一章 南海沉積物來源菌株的分離、篩選和鑒定28-39
• 第一節(jié) 菌株的分離28-32
• 1.1.1 樣品的來源28-29
• 1.1.2 樣品處理29
• 1.1.3 菌株分離29
• 1.1.4 分離培養(yǎng)基的選擇29
• 1.1.5 樣品純化29-30
• 1.1.6 樣品保藏30
• 1.1.7 建立電子檔案30-32
• 第二節(jié) 菌株的篩選32-36
• 1.2.1 發(fā)酵產(chǎn)物的獲得32
• 1.2.2 化學(xué)篩選模型32-35
• 1.2.3 生物活性篩選模型35-36
• 第三節(jié) 菌株信息36-38
• 1.3.1 OUCMDZ-4541菌株信息37-38
• 第四節(jié) 小結(jié)和討論38
• 參考文獻(xiàn)38-39
• 第二章 深海來源鏈霉菌OUCMDZ-4112的發(fā)酵條件的優(yōu)化及次生代謝產(chǎn)物的研究39-65
• 第一節(jié) 菌株信息39-41
• 2.1 菌種的來源39-41
• 第二節(jié) 菌株發(fā)酵條件的優(yōu)化41-45
• 2.2.1 發(fā)酵培養(yǎng)基的選擇41-42
• 2.2.2 發(fā)酵天數(shù)和樹脂添加量的選擇42-43
• 2.2.3 菌株大規(guī)模發(fā)酵43
• 2.2.4 浸膏制備43
• 2.2.5 次級(jí)代謝產(chǎn)物的分離純化43-45
• 第三節(jié) 化合物結(jié)構(gòu)鑒定45-58
• 2.3.1 靈菌紅素類化合物(包括中間體)結(jié)構(gòu)鑒定45-58
• 第四節(jié) 單體化合物的活性評(píng)價(jià)58-60
• 2.4.1 抑菌活性的測(cè)定58-59
• 2.4.2 細(xì)胞毒活性的測(cè)定59-60
• 2.4.3 α-糖苷酶抑制活性的測(cè)定60
• 第五節(jié) 小結(jié)和討論60-61
• 第六節(jié) 化合物表征61-64
• 2.6.1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定的相關(guān)數(shù)據(jù)61-64
• 參考文獻(xiàn)64-65
• 第三章 菌株OUCMDZ-4112第二次發(fā)酵的發(fā)酵條件優(yōu)化及次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究65-74
• 第一節(jié) 菌株發(fā)酵條件的優(yōu)化65-68
• 3.1.1 咔唑培養(yǎng)基培養(yǎng)成分的添加65-66
• 3.1.2 菌株接種的狀態(tài)(方式)的確定66-68
• 第二節(jié) 菌株次級(jí)代謝產(chǎn)物的提取和分離純化68-69
• 3.2.1 發(fā)酵產(chǎn)物的提取68
• 3.2.2 目標(biāo)產(chǎn)物的分離純化68-69
• 第三節(jié) 單體化合物的結(jié)構(gòu)解析69-72
• 3.3.1 靈菌紅素類化合物結(jié)構(gòu)鑒定70-72
• 第四節(jié) 小結(jié)和討論72-73
• 第五節(jié) 化合物表征73-74
• 3.5.1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定的相關(guān)數(shù)據(jù)73-74
• 第四章 實(shí)驗(yàn)部分74-84
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑74-79
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器74-76
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)材料76-78
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑78-79
• 第二節(jié) 培養(yǎng)基及樣品處理方法79-80
• 4.2.1 培養(yǎng)基79-80
• 4.2.2 樣品前處理方法：(用于放線菌的分離)80
• 第三節(jié) 生物活性測(cè)試方法總結(jié)80-83
• 4.3.1 抑菌活性測(cè)試80-81
• 4.3.2 細(xì)胞毒活性測(cè)試81-82
• 4.3.3 α-糖苷酶活性測(cè)試82-83
• 參考文獻(xiàn)83-84
• 附錄84-85
• 結(jié)語(yǔ)與創(chuàng)新點(diǎn)85-86
• 致謝86-87
• 附圖87-94

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