選題依據:防己黃芪湯始載于《金匱要略》,具有利水消腫、益衛(wèi)固表等功效。近年來關于防己黃芪湯在臨床上的應用主要集中于心源性水腫和腎病綜合征等疾病,確切的利水消腫藥理作用使得防己黃芪湯近年來越來越受到關注。到目前為止,課題組前期通過譜效相關辨識黃芪在防己黃芪湯干預阿霉素腎病大鼠的藥效成分群。同時,課題組前期建立了防己黃芪湯體內外化學成分的分析方法,初步研究了生理狀態(tài)防己黃芪湯的體內代謝,但鑒定的成分較少,分析不全面,且未對病理狀態(tài)下防己黃芪湯成分的吸收進行研究。因此,進一步基于體內過程辨識防己黃芪湯干預阿霉素腎病的藥效成分,并確定藥效成分的含量,是至關重要的。本研究首先基于UHPLC-Q-Exactive MS對防己黃芪湯入血、尿和糞便中的成分進行分析,明確防己黃芪湯在體內的代謝過程;其次進行動物實驗的研究,構建阿霉素腎病大鼠模型,采用代謝組學結合多元統計分析比較兩種機體狀態(tài)下藥物的吸收差異成分,明確防己黃芪湯干預阿霉素腎病的藥效物質基礎;最后,建立基于UPLC-Qtrap-MS技術同時測定防己黃芪湯中19種成分的方法。以期通過體內過程研究,明確防己黃芪湯治療腎病綜合征的物質基礎,為防己黃... 

【文章來源】：山西大學山西省

【文章頁數】：110 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

血清樣品不同處理方法的色譜圖比較（A.甲醇沉淀蛋白法；B.SPE固相萃取小柱純化

基于體內過程的防己黃芪湯干預阿霉素腎病藥效成分研究14CO和CH3的丟失，一些黃酮類化合物也可能失去葡萄糖殘基[38]。例如，在負離子模式下，化合物17、18具有相同的準分子離子峰m/z255.0652[M-H]-，保留時間分別為12.32和12.52min。MS/MS顯示它們的m/z分別在135.0081和119.0495處。進一步通過和對照品的保留時間和質譜碎片比較，結合文獻報道[39](Lietal.,2016)，化合物17和18分別被鑒定為liquiritigenin和isoliquiritigenin。在正離子模式下碎片離子包括270.0530[M+H-CH3]+，253.0502[M+H-CH3-OH]+，225.0552[M+H-CH3-OH-CO]+和197.0598[M+H-CH3-OH-CO-CO]+。同時，m/z285.0768處的離子由于逆Diels-Alder反應（RDA）裂解，而在m/z137.0233處產生特征離子。根據標準品的MS/MS片段離子，確定化合物3為calycosin。裂解途徑如圖3.2所示。皂苷的鑒定皂苷類化合物是FHT中的重要成分，主要存在于黃芪和甘草中。例如，在負離子模式下，化合物的精確分子量為822.4032，在二級質譜圖中失去C6H8O6得到m/z645.3633[M-H-C6H8O6]-，失去2個C6H8O6產生m/z469.3322[M-H-2C6H8O6]-。參考文獻中報道的裂解規(guī)律，推測其分子式為C42H62O16[40]，最終推測25為glycyrrhizinacid，可能的裂解途徑如圖1所示�；衔�15通過與標準品對比被鑒定為astragalosideIV，在m/z627.3870，495.3385處表現出特征離子。圖3.2典型化合物可能的碎裂途徑.(A)甘草酸，(B)calycosin的鑒定生物堿的鑒定

第三章基于UHPLC-Q-ExactiveMS的防己黃芪湯的體內代謝研究15生物堿類化合物是防己的特征成分。據報道，防己生物堿具有抗纖維化、抗氧化、抗炎和免疫調節(jié)作用[41]。例如，在正離子模式下化合物2產生準分子離子峰m/z623.3116[M+H]+，可進一步裂解得到m/z592.2719[M-OCH3]+和m/z580.2717[M-COCH3]+。根據與對照品的保留時間和質譜碎片比較，可以確定化合物2為（+）-tetrandrine。(+)-tetrandrine的質譜圖以及可能的裂解途徑如3.3所示。圖3.3(+)-tetrandrine的化學結構和可能裂解途徑內酯的鑒定在本研究中，FHT提取物中入血成分共檢測到4種內酯。內酯通常通過失去H2O、CO和CH3而產生碎片離子。化合物14正離子模式下，保留時間為28.23min，顯示準分子離子峰m/z233.1536[M+H]+，在m/z131.0860,145.1016和159.0807處產生了特征碎片。因此，結合文獻的裂解規(guī)律，化合物14被初步鑒定為3-β-hydroxy-atractylone[41]。在正離子模式下，化合物28保留時間為26.83min，顯示準分子離子峰m/z231.1379[M+H]+，可知其分子式為C15H18O2。進一步分析二級碎片發(fā)現，碎片離子為m/z213.1384、189.9934、185.1657，這些碎片離子被鑒定為[M+H-H2O]+、[M+H-2CH3-CH2]+、185.1657[M+H-H2O-CO]+。通過以上信息并與標準品比對，化合物28被鑒定為atractylenolideI。同樣，化合物11和27都表現出相似的裂解規(guī)律。1.4.4代謝產物的鑒定利用CD軟件，可以很容易地預測由精確質量測量得到的代謝物的分子量和元素組成。如表3.5，大鼠含藥物血清中共鑒定78種代謝物這些化合物一般可分為四類：黃酮類、生物堿類、皂苷類和內酯類代謝物。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3336858