目的:探討煙草煙霧誘發(fā)小鼠模擬干眼模型的病理改變。方法:選取18雄性無(wú)特定病原體c57BL小鼠（18-22g）,隨機(jī)分為對(duì)照組、4周組和12周組,每組6只小鼠,其中6只進(jìn)行4周的煙草煙霧干預(yù),6只進(jìn)行12周煙草煙霧干預(yù)。按每天20支香煙的設(shè)計(jì)進(jìn)行煙草煙霧中毒,小鼠置于中毒柜,每天傳輸3次煙氣（30分鐘/次）。造模成功后,對(duì)每組進(jìn)行淚膜破裂時(shí)間（BUT）實(shí)驗(yàn)、活體染色、炎癥指數(shù)評(píng)分,熒光素染色和共聚焦顯微鏡觀察。分別在第4周和第12周安樂(lè)死小鼠,取眼睛組織進(jìn)行Western Blot檢測(cè)、免疫熒光染色、TUNEL染色、過(guò)碘酸-希夫染色（PAS）和蘇木精-伊紅染色（HE）。結(jié)果:干預(yù)前三組間BUTs,FL評(píng)分,共聚焦顯微鏡觀察無(wú)差異。干預(yù)后與其他兩組相比12周組的BUTs相比其他兩組顯著下降,FL評(píng)分顯著升高,角膜上皮細(xì)胞密度降低,基底上皮細(xì)胞密度增加,角膜上皮、結(jié)膜厚度增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。對(duì)照組和4周組角膜熒光素鈉染色、共聚焦顯微鏡檢查呈陰性,HE染色未發(fā)生顯著改變。12周組呈陽(yáng)性。12周組共聚焦顯微鏡觀察顯示角膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)壞死和脫落,強(qiáng)烈反射,細(xì)胞間隙擴(kuò)大,... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)小鼠角膜神經(jīng)纖維分布

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果16第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1淚膜穩(wěn)定性和上皮損傷干預(yù)前三組間BUTs，F(xiàn)L評(píng)分比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1B，1C）。與對(duì)照組和4周干預(yù)組相比，12周組的BUTs和熒光素鈉染色評(píng)分顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P<0.05，圖1B，1C）。4周組與對(duì)照組相比，的BUTs和熒光素鈉染色評(píng)分差異不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，圖1B，1C）。在煙草煙霧干預(yù)后，4周組和對(duì)照組的角膜熒光素鈉染色呈陰性（圖1A），12周組的角膜熒光素鈉染色表現(xiàn)為陽(yáng)性（圖1A）。在12周組中出現(xiàn)淚膜/上皮損傷，可能是由于煙草煙霧的毒性（*P<0.05，圖1A-C）圖1.對(duì)照組、4周組和12周組實(shí)驗(yàn)前后眼表改變情況。A三組經(jīng)熒光素鈉染色后眼表情況：對(duì)照組和4周組未出現(xiàn)明顯著染，僅出現(xiàn)極少點(diǎn)狀染色，12周組小鼠角膜的上、下、鼻、顳四個(gè)象限均著染，且出現(xiàn)斑塊狀染色。B三組在實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后BUTs時(shí)間改變情況：對(duì)照組和4周組BUTs時(shí)間在實(shí)驗(yàn)前后未發(fā)生顯著變化，12周組BUTs時(shí)間在進(jìn)行煙草煙霧干預(yù)實(shí)驗(yàn)后出現(xiàn)明顯的下降。C三組在實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后FL評(píng)分改變情況：對(duì)照組和4周組FL評(píng)分在實(shí)驗(yàn)前后未發(fā)生顯著變化，12周組FL評(píng)分在實(shí)驗(yàn)后出現(xiàn)明顯的上升。*表示實(shí)驗(yàn)后與實(shí)驗(yàn)前相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果18圖2.對(duì)照組、4周組和12周組小鼠角膜上皮共聚焦顯微鏡下觀察的改變情況代表性圖像。A三組共聚焦顯微鏡下表層上皮細(xì)胞觀察情況：對(duì)照組和4周組表層上皮細(xì)胞未出現(xiàn)明顯異常。在12周組中，觀察圖像顯示病灶出現(xiàn)壞死和角膜上皮細(xì)胞脫落（紅色箭頭），并且其細(xì)胞出現(xiàn)強(qiáng)烈反射（綠色箭頭）。B三組共聚焦顯微鏡下基底上皮細(xì)胞觀察情況：對(duì)照組和4周組基底上皮細(xì)胞未出現(xiàn)明顯異常。在12周組中，觀察圖像顯示出現(xiàn)具有超反射核的局灶性基底上皮細(xì)胞（綠色箭頭）。C三組表層上皮細(xì)胞數(shù)目比較：對(duì)照組和4周組的表層上皮細(xì)胞密度差異不明顯，而在12周組中表層上皮細(xì)胞密度則相對(duì)對(duì)照組和4周組均明顯更低。D三組基底上皮細(xì)胞數(shù)目比較：對(duì)照組和4周組的基底上皮細(xì)胞密度差異不明顯，而12周組的基底上皮細(xì)胞密度則相對(duì)對(duì)照組和4周組均明顯更低。平均細(xì)胞密度是通過(guò)計(jì)算各組中的每層4張圖片來(lái)確定的。*表示12周組與對(duì)照組、4周組細(xì)胞數(shù)目相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。3.3角膜上皮HE染色情況我們通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察每組的角膜上皮。對(duì)照組的角膜上皮由4至6層整齊排列的細(xì)胞組成。且其表層上皮相對(duì)完整，基底細(xì)胞排列成單層，細(xì)胞核呈橢圓形（圖3A）。在煙草煙霧干預(yù)4周后，4周組的HE染色情況未發(fā)生顯著變化（圖3A）。在煙草煙霧干預(yù)12周后，角膜上皮HE染色顯示角膜上皮厚度增加，各層細(xì)胞排列紊亂，淺表上皮細(xì)胞局部缺損和脫落，角膜表面不光滑（圖3A）。對(duì)照組與4周組之間未表現(xiàn)出顯著差異（P>0.05，圖3D），但12周組與其他兩組之間均存在顯著差異（*P<0.05，圖3D）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]搭建交流平臺(tái) 推動(dòng)務(wù)實(shí)合作 實(shí)現(xiàn)共同發(fā)展 世界律師大會(huì)在廣州召開(kāi)[J].   醫(yī)學(xué)與法學(xué). 2019(06)
[2]民用飛機(jī)維修性的適航符合性驗(yàn)證的研究[J]. 陶歡.  科技視界. 2017(09)



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