目的:研究大葉茜草素抗肝癌活性及其作用機制,為其在治療肝癌的開發(fā)應用方面提供科學依據(jù)。方法:以人肝癌HepG2細胞為受試對象,采用MTT法和平板克隆法進行大葉茜草素體外抗肝癌活性研究。MTT法檢測不同給藥濃度、不同給藥時間大葉茜草素對HepG2細胞的抑制作用,平板克隆法檢測大葉茜草素對HepG2細胞長期增殖的抑制作用。選擇小鼠H22肝癌細胞株,BALB/c小鼠皮下注射,建立H22肝癌皮下實體瘤小鼠模型,以阿霉素為陽性對照藥,進行大葉茜草素整體動物抗肝癌作用研究。觀察大葉茜草素對小鼠生長狀態(tài)、腫瘤生長以及臟器的影響;同時,H&E染色檢查各組小鼠腫瘤組織的變化。進一步在細胞蛋白層面闡釋大葉茜草素抗肝癌的作用機制。以PI染色,采用流式細胞儀檢測大葉茜草素對HepG2細胞周期影響;采用DCFH-DA熒光檢測試劑盒,分別以流式細胞儀、熒光顯微鏡測定大葉茜草素處理的HepG2細胞、H22腫瘤組織內活性氧ROS含量;MTT法檢測大葉茜草素對經過ROS抑制劑處理后的HepG2細胞的抑制作用;免疫印跡法檢測大葉茜草素對HepG2細胞和小鼠H22組織中相關周期蛋白和DNA損傷標志蛋白的表達量;免疫... 

【文章來源】：湖北中醫(yī)藥大學湖北省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

大葉茜草素結構式

大葉茜草素抗肝癌活性及作用機制研究16由圖可見，兩種方法所得大葉茜草素純度相似，高效液相色譜圖中大葉茜草素峰面積占比均在95%以上，考慮到重結晶法更加快速高效，采用重結晶法對A段進行純化。最終得到大葉茜草素結晶12.176g。其分離流程見圖2.2。圖2.2大葉茜草素的分離純化流程圖Figure2.2flowchartofIsolationandPurificationofMollugin3.成分鑒定所得化合物常溫常壓下為黃色結晶。TLC檢測，在365nm紫外光燈下顯黃綠色熒光斑點。與購得大葉茜草素對照品共薄層展開，兩者色譜行為一致；混合點樣斑點不分離；測定混合熔點，熔點不下降。因此，鑒定該化合物為大葉茜草素（Mollugin）。大葉茜草素結構式見圖2.3。圖2.3大葉茜草素結構式Figure2.3structuralformulaofMollugin

大葉茜草素抗肝癌活性及作用機制研究25圖3.1不同濃度、不同給藥時間大葉茜草素對HepG2細胞增殖抑制作用。A-E為大葉茜草素給藥后3-48h的不同濃度大葉茜草素對應細胞存活率，F(xiàn)為結果匯總（*表示P≤0.05，**表示P≤0.01，***表示P≤0.001）。Figure3.1inhibitoryeffectofMolluginonHepG2cellsatdifferentconcentrationsandtimeofadministration.A-EisthecellsurvivalrateofdifferentconcentrationsofMolluginat3-48hafteradministrationofmollugin,andFistheresultsummary.(*indicatesP≤0.05,**indicatesP≤0.01,***indicatesP≤0.001.)

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3286079