本文關(guān)鍵詞：AP4-siRNA轉(zhuǎn)染對人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡的影響并肺癌病例臨床分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:人類轉(zhuǎn)錄激活因子蛋白-4(AP4)在細(xì)胞凋亡、DNA修復(fù)等過程中起著至關(guān)重要的作用。國內(nèi)外許多研究表明,AP4基因參與多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展,如肝癌、結(jié)直腸癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等。但在肺癌中的研究甚少。本次研究,我們利用倒置顯微鏡觀察到轉(zhuǎn)染AP4 siRNA前后人肺腺癌細(xì)胞A549的形態(tài)學(xué)改變,檢測了轉(zhuǎn)染AP4 siRNA后肺腺癌A549細(xì)胞中AP4的蛋白和mRNA的表達(dá)量,探討了RNA干擾AP4基因表達(dá)對人肺腺癌細(xì)胞凋亡的情況及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況。進(jìn)一步為肺癌的臨床治療提供了理論依據(jù)。分析了3名肺癌患者的病例,了解早期肺癌常無明顯癥狀而難以發(fā)現(xiàn),及時(shí)發(fā)現(xiàn)早期肺癌的一個(gè)重要途徑就是肺癌普查(影像學(xué)檢查)。方法:培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞A549,將其分成:空白對照組(B),陽性對照組(M),siRNA轉(zhuǎn)染組,陰性對照組(N)等4個(gè)實(shí)驗(yàn)組,合成針對AP4基因的siRNA,用脂質(zhì)體LipofeetamineTM2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞A549,觀察其細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,再分別采用Real-time PCR和Western blot檢測AP4基因mRNA和蛋白的表達(dá);流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞凋亡率,進(jìn)一步探討了凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Caspase-9蛋白的表達(dá)水平。選擇3名老年肺癌患者病例,進(jìn)行分析,將患者的影像學(xué)資料和術(shù)后病理報(bào)告相對比,探討影像學(xué)檢查對及早發(fā)現(xiàn)和及時(shí)診治肺癌所具有的重要臨床意義。結(jié)果:將AP4 siRNA成功轉(zhuǎn)入A549細(xì)胞后(轉(zhuǎn)染效率最高達(dá)95%),觀察到轉(zhuǎn)染前細(xì)胞貼壁生長良好,細(xì)胞多呈梭形,胞質(zhì)飽滿。轉(zhuǎn)染后,細(xì)胞貼壁不佳,細(xì)胞皺縮。(1)用Real-time PCR分別檢測轉(zhuǎn)染AP4 siRNA24和48小時(shí)候后的A549細(xì)胞中的AP4mRNA的表達(dá)量,結(jié)果示B、M、N組AP4mRNA的表達(dá)量無明顯變化,而siRNA組(430、569)AP4mRNA的表達(dá)量均明顯下降(P0.05)。(2)運(yùn)用Western blot檢測轉(zhuǎn)染AP4 siRNA24和48小時(shí)候后的A549細(xì)胞中的AP4蛋白的表達(dá)量,結(jié)果示B、M、N組AP4蛋白的表達(dá)量無明顯變化,而siRNA組(284、430、569)AP4蛋白的表達(dá)量均明顯下降(P0.05)。(3)運(yùn)用Real-time PCR及Western blot實(shí)驗(yàn),檢測AP4 siRNA(284、430、569)3組干擾片段沉默的肺腺癌A549細(xì)胞AP4的表達(dá)情況,據(jù)上述結(jié)果示AP4-siRNA(569)片段沉默效率最高。(4)運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測AP4 siRNA(569)干擾片段沉默的肺腺癌A549細(xì)胞后其凋亡的情況,結(jié)果顯示,B組總凋亡率5.573%±0.297%,M組總凋亡率8.896%±0.517%,N組總凋亡率6.443%±0.205%,siRNA-AP4(569)轉(zhuǎn)染組總凋亡率為27.927%±0.581%,siRNA-AP4(569)轉(zhuǎn)染組與B組、M組、N組相比較,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(5)檢測相關(guān)凋亡基因Bcl-2、Caspase-9的蛋白表達(dá)水平,結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染AP4siRNA(569)組細(xì)胞的Bcl-2蛋白水平高于B、N、M組,Caspase-9的蛋白水平也高于B、N、M組,其結(jié)果被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。尤以Caspase-9的蛋白水平升高更明顯。結(jié)論:采用RNA干擾沉默人肺腺癌細(xì)胞AP4基因表達(dá),可誘導(dǎo)其凋亡,可能與凋亡相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)。因此,AP4基因可能促進(jìn)了肺癌的發(fā)生發(fā)展,其可能成為一個(gè)新的靶點(diǎn)在肺癌的基因治療中。肺癌普查(影像學(xué)檢查)可以及早的發(fā)現(xiàn)和診斷早期肺癌,能夠有效的提高肺癌患者的生存率,降低其死亡率。
【關(guān)鍵詞】：肺腺癌 A549細(xì)胞 AP4基因 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 第一部分 基礎(chǔ)研究11-33
• （一）前言11-13
• （二）材料和方法13-20
• （三）結(jié)果20-25
• （四）討論25-28
• （五）結(jié)論28-29
• （六）參考文獻(xiàn)29-33
• 第二部分 肺癌臨床病例分析33-35
• （一）病例摘要33-34
• （二）討論34-35
• 綜述 AP4基因與腫瘤的研究進(jìn)展35-43
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 附錄43-44
• 致謝44-45

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本文編號：324453