發(fā)布時間：2017-04-24 10:00

  本文關(guān)鍵詞：UCH-L3與LC3在急性髓系白血病中的表達及作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:急性髓系白血病(AML)是一種常見的血液惡性腫瘤,研究表明自噬與AML的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),但具體機制尚未明了。越來越多的報道證明,自噬和泛素蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)之間存在著活躍的聯(lián)系。我們前期的蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn),使用雷帕霉素處理AML細胞后,AML細胞發(fā)生自噬性死亡,而去泛素化酶家族成員泛素羧基末端水解酶L3(Ubiquitin C-terminal Hydrolase L3,UCHL3)在自噬性死亡過程中表達上調(diào),為了探討UCH-L3與自噬在AML發(fā)生發(fā)展過程中的作用和相互關(guān)系,本研究在前期工作基礎(chǔ)上,使用UCH-L3抑制劑TCID處理急性髓系白血病細胞HL-60,觀察自噬的標(biāo)志性基因LC3在基因和蛋白水平上的表達變化,并進一步通過臨床AML患者的外周血樣本分析研究UCH-L3和LC3基因的表達情況,進而為探討自噬與UPS在白血病中的作用機制奠定基礎(chǔ),最終為白血病的診斷及治療提供新的靶點和策略。方法:1.UCH-L3抑制劑TCID 100nmol/L處理HL-60細胞,Real Time PCR法檢測UCH-L3抑制劑TCID處理HL-60細胞前后UCH-L3和LC3的m RNA表達變化。2.Western Blot方法檢測UCH-L3抑制劑TCID處理HL-60細胞前后UCH-L3和LC3蛋白水平的變化。3.Real Time PCR方法檢測健康組、AML初發(fā)組、AML緩解組及AML難治組外周血單個核細胞UCH-L3和LC3 m RNA的表達情況。4.追蹤同一患者治療前后UCH-L3及LC3 m RNA的表達變化。結(jié)果:1.利用Real Time PCR及Western Blot方法,檢測經(jīng)UCH-L3抑制劑TCID處理HL-60細胞后UCH-L3和LC3在基因和蛋白水平上表達均下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。2.AML初發(fā)患者UCH-L3 m RNA的表達明顯低于健康人,而緩解、難治患者與健康人差別無統(tǒng)計學(xué)意義,但初發(fā)、難治患者UCH-L3 m RNA表達明顯低于緩解的,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。3.AML初發(fā)患者自噬基因LC3 m RNA表達明顯高于健康人,而緩解、難治患者與健康人差別無統(tǒng)計學(xué)意義,但緩解、難治患者LC3 m RNA表達明顯低于初發(fā)的,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。4.同一患者治療前后比較,UCH-L3m RNA的表達量治療后較治療前上調(diào),同時LC3 m RNA的表達量治療后較治療前下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1.抑制UCH-L3活性后,自噬水平下調(diào),說明在急性髓系白血病中UCH-L3和自噬有相互作用。2.UCH-L3和LC3在初發(fā)、緩解、難治患者及健康人中表達存在明顯差異,說明兩者在AML的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。3.UCH-L3緩解后較初發(fā)時上調(diào),同時LC3緩解后較初發(fā)時下調(diào),推測AML發(fā)病過程中UCH-L3和LC3的相互關(guān)系可能與泛素-蛋白酶系統(tǒng)和自噬的相互作用有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：自噬 LC3 UCH-L3 TCID HL-60 細胞
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-24
• 1. 實驗材料13-16
• 1.1 細胞培養(yǎng)13
• 1.2 標(biāo)本來源13
• 1.3 主要試劑13-14
• 1.4 主要器材14-15
• 1.5 主要試劑配制15-16
• 2. 實驗方法16-23
• 2.1 細胞培養(yǎng)16
• 2.2 Real Time PCR法檢測TCID處理HL-60細胞前后LC3和UCH-L3的mRNA表達水平16-19
• 2.3 Western Blot方法檢測TCID處理HL-60細胞前后LC3和UCH-L3的蛋白表達水平19-23
• 2.4 外周血單個核細胞提取23
• 2.5 Real Time PCR法檢測外周血單個核細胞LC3和UCH-L3的mRNA表達水平23
• 3. 統(tǒng)計學(xué)分析23-24
• 實驗結(jié)果24-30
• 1. UCH-L3抑制劑TCID處理HL-60細胞前后LC3和UCH-L3 mRNA的表達變化24-25
• 2. UCH-L3抑制劑TCID處理HL-60細胞前后LC3和UCH-L3蛋白的表達變化25-26
• 3. UCH-L3及LC3在臨床樣本中的表達情況26-30
• 討論30-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻33-35
• 綜述35-46
• 參考文獻41-46
• 致謝46-47

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