目的:探索三葉苷對β-淀粉樣蛋白25-35(Aβ_25-35)誘導的HT22細胞損傷的作用,并初步探索其可能的作用機制。方法:將HT22細胞分為空白對照組（Control）、空白對照+TLB 50μM組、模型組(20μM Aβ_25-35)、Aβ_25-35+TLB組（12.5μM、25μM、50μM）。模型組加入Aβ_25-3520μmol/L,給藥組給予12.5μM、25μM、50μM TLB與Aβ_25-355-35 20μmol/L共同作用48 h后,采用MTT法測定不同濃度TLB對Aβ_25-35誘導的HT22細胞活力的影響;乳酸脫氫酶（LDH）法檢測TLB對Aβ_25-35誘導的HT22細胞死亡情況的影響;TUNEL染色法檢測HT22細胞的凋亡;通過ELISA法和Mito-SOX染色法分別檢測細胞內(nèi)活性氧（ROS）和線粒體內(nèi)ROS（mtROS）含量;通過ELISA法檢測抗氧化物酶活性;通過Western blot法分析Bax、Bcl-2... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

TLB濃度依賴性的抑制Aβ25-35誘導的HT22細胞損傷

16withdifferentconcentrationsofTLB(12.5,25,and50μM)and20μMAβ25-35for48h.(B)ThecellviabilitywasdeterminedbyMTTassay.(C)LDHreleasefromHT22cellswasmeasuredusinganLDHassaykit.(D)TheprotectiveeffectsofTLBonAβ25-35-inducedmorphologicalalternation.Datawerepresentedasmean±SD.(n=6)(x±SD).**P<0.01versuscontrolgroup;##P<0.01versusAβ25-35group.2.2TLB降低HT22細胞中Aβ25-35誘導的ROS和MDA含量結果表明，Aβ25-35組較空白對照組細胞內(nèi)ROS和mtROS含量明顯增加（圖2A，B)，MDA含量明顯增加(圖2C)；而TLB組較Aβ25-35組中ROS和MDA含量明顯減少并呈濃度依賴性，提示TLB能夠明顯抑制Aβ25-35誘導的HT22細胞氧化損傷。圖2TLB濃度依賴性的降低Aβ25-35誘導的HT22細胞中ROS和MDA含量。不同濃度的TLB（12.5、25和50μM）與20μMAβ25-35共同作用48h。（A）通過DCFH-DA熒光探針檢測細胞內(nèi)ROS的含量。（B）使用Mito-SOXRed熒光探針檢測mtROS水平（紅色熒光）。（C）MDA的含量。（n=6）（x±SD），與對照組比較，**P<0.01；與Aβ25-35組相比，#P<0.05，##P<0.01Figure2TLBinhibitedthegenerationofROSandMDAinducedbyAβ25-35inHT22cells.HT22cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofTLB(12.5,25,and50μM)and20μMAβ25-35for48h.(A)TheintracellularROScontentwasevaluatedbyDCFH-DAfluorescenceprobe.(B)TheMito-SOXRed

17fluorescentprobewasusedtodetectmtROSlevel.(C)ThelevelofMDAwasmeasuredusingMDAELISAkit.Datawerepresentedasmean±SD.(n=6).(x±SD).**P<0.01versuscontrolgroup;#P<0.05,##P<0.01versusAβ25-35group.2.3TLB增加Aβ25-35誘導的HT22細胞損傷中的抗氧化酶活性結果顯示，與空白對照組比較Aβ25-35組的SOD活力、GSH-Px活力和GSH的含量明顯降低，抗氧化酶活性降低；TLB組較Aβ25-35組SOD活力、GSH-Px活力以及GSH含量明顯增加（圖3A-C）。提示TLB能夠明顯增加Aβ25-35誘導的HT22細胞損傷的抗氧化酶活力。圖3TLB對Aβ25-35誘導的HT22細胞損傷中的抗氧化酶活性的影響。不同濃度的TLB（12.5、25和50μM）與20μMAβ25-35共同培養(yǎng)48h。（A）SOD活力。（B）GSH-Px活力。（C）GSH含量。（n=6）（x±SD），與對照組相比較，**P<0.01；與Aβ25-35組相比較，##P<0.01。Figure3TLBincreasedanti-oxidantenzymeactivitiesinAβ25-35-inducedinjuryinHT22cells.HT22cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofTLB(12.5,25,and50μM)and20μMAβ25-35for48h.(A)SOD.activity(B)GSH-Pxactivity.(C)GSHcontent.Datawerepresentedasmean±SD.(n=6).**P<0.01versuscontrolgroup;##P<0.01versusAβ25-35group.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]阿爾茨海默病患者腦神經(jīng)元凋亡機制中相關因素的研究[J]. 孟艷,王蓉,劉夢霞,盛樹力.  中華老年醫(yī)學雜志. 2006(04)

博士論文
[1]Aβ引起神經(jīng)干細胞衰老及降低煙堿類似物ZY-1治療的反應性[D]. 何娜.上海交通大學 2014

碩士論文
[1]三葉苷對過氧化氫誘導的PC12細胞氧化損傷的保護作用及機制研究[D]. 呂純.遵義醫(yī)科大學 2019
[2]多穗柯活性組分提取分離及功能特性的研究[D]. 燕妮.華南農(nóng)業(yè)大學 2016



本文編號：3230216