目的:通過慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建過表達(dá)CD40L基因THP-1白血病細(xì)胞株,并采取尾靜脈注射法構(gòu)建過表達(dá)CD40L基因的裸鼠M5白血病模型,探討過表達(dá)CD40L基因?qū)β闶蠊撬杓?xì)胞凋亡的影響。方法:1、裸鼠M5白血病模型的建立及鑒定:（1）將18只3-4周齡的雌性NOD/SCID小鼠,隨機(jī)分為3組,每組6只,即對(duì)照組、模型A組、模型B組。接種前連續(xù)2 d給予每只小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺2 mg/（kg·d）,于預(yù)處理后24 h內(nèi)接種細(xì)胞。模型組分別經(jīng)尾靜脈接種對(duì)數(shù)生長期THP-1細(xì)胞懸液1×10⁷/只（A組）、5×10⁶/只（B組）,對(duì)照組小鼠采用同樣方法注射等劑量生理鹽水;（2）觀察小鼠一般情況,于預(yù)處理前、接種細(xì)胞后7、14、21和28 d及處死時(shí)檢測血常規(guī)并計(jì)數(shù)外周血白細(xì)胞分類;（3）瀕死前處死取材,組織切片病理檢查;2、過表達(dá)CD40L基因?qū)β闶驧5白血病模型中骨髓細(xì)胞凋亡的影響:（1）通過慢病毒轉(zhuǎn)染方式構(gòu)建過表達(dá)CD40L-THP-1細(xì)胞株,用嘌呤霉素進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選,流式細(xì)胞術(shù)檢測其篩選后純度,采用Q-PCR法驗(yàn)證是否過表達(dá)CD40L基因;（... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

各小組A.對(duì)照組小鼠代表性圖片；B.模型A組小

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文廖曉敏16圖1各小組小鼠終末期一般情況A.對(duì)照組小鼠代表性圖片；B.模型A組小鼠代表性圖片；C.模型B組小鼠代表性圖片。3.2生存時(shí)間A組小鼠分別于接種后30和36d各處死2只，32和33d各處死1只，B組小鼠于接種后33和37d各處死1只，35和39d各處死2只。結(jié)果見表2。表2三組小鼠處死時(shí)間及只數(shù)（只，n=6）3.3血常規(guī)的變化模型A、B組小鼠于建模7d后出現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)升高，建模14d后與對(duì)照組比較，模型組小鼠白細(xì)胞數(shù)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中以1×107/只的模型A組最為顯著；此時(shí)模型A與模型B組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；21d后血常規(guī)提示各模型組白細(xì)胞數(shù)均降低，考慮此時(shí)小鼠處于骨髓抑制期或其他原因引起，具體原因值得以后進(jìn)一步深入研究；在建模28d后模型組小鼠白細(xì)胞數(shù)明顯高于對(duì)照組（P<0.01），各模型組間差異無顯著性；模型A組在建模第7d、14d、28d與建模前相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；模型B組在建模第28d與建模前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），結(jié)果見表3；模型組小鼠與對(duì)照組小鼠比較，血紅蛋白變化無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且各組小鼠之間血紅蛋白隨時(shí)間變化也無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表4；建模14d后，模型組血小板開始減低，但與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，第21d模型B組小鼠血小板與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），結(jié)果見表5。各組小鼠血常規(guī)各項(xiàng)分組3031323334353637383940對(duì)照組———————————模型組A2112模型組B1212

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文廖曉敏17指標(biāo)變化曲線圖見圖2。表3三組小鼠不同時(shí)間白細(xì)胞變化（×109個(gè)/L，±s，n=6）注：同一時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01.�！号c建模前2天比較，P＜0.05；★:與第7天比較，P<0.05；☆：與第14天比較，P<0.05；△：與第21天比較，P<0.05；#：與同一時(shí)間點(diǎn)模型組A比較P<0.05。表4三組小鼠不同時(shí)間血紅蛋白變化（g/L，±s，n=6）表5三組小鼠不同時(shí)間血小板變化（×109個(gè)/L，±s，n=6）注：與對(duì)照組比較，*P<0.05。圖2各組小鼠血常規(guī)指標(biāo)變化曲線圖A.各組小鼠白細(xì)胞變化曲線圖；B.各組小鼠血紅蛋白變化曲線圖；C.各組小鼠血小板變化曲線圖。分組建模前2天第7天第14天第21天第28天對(duì)照組2.71±0.472.92±0.522.38±0.542.54±0.542.38±0.52模型組A2.67±0.634.41±1.82▲4.84±1.13▲*2.46±0.53☆7.01±0.91▲★☆△**模型組B3.06±1.153.96±1.433.71±0.93*#2.12±0.82★☆6.07±1.00▲★☆△**分組建模前2天第7天第14天第21天第28天對(duì)照組144.67±7.50131.17±12.57141.50±11.95139.50±8.50139.00±4.98模型組A153.50±12.57126.50±19.72151.67±22.72139.67±13.64142.00±21.42模型組B150.83±17.31142.33±17.50144.17±5.91132.83±21.28150.33±16.27分組建模前2天第7天第14天第21天第28天對(duì)照組1478.67±66.321422.50±178.321426.67±90.161453.17±83.491449.50±87.79模型組A1504.00±78.961464.83±84.401326.83±116.321219.00±253.261435.00±300.65模型組B1508.81±202.971478.72±144.311192.50±219.241098.00±147.57*1202.51±189.85

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本文編號(hào)：3230323