研究背景足細胞作為終末分化的細胞,是腎小球濾過屏障的重要組成部分,對于維持正常的腎小球濾過功能至關(guān)重要。足細胞內(nèi)脂質(zhì)異常聚集可引起細胞脂質(zhì)毒性、損傷和凋亡,在慢性腎臟病（Chronic kidney disease,CKD）的進展中發(fā)揮重要的作用。黃連素（Berberine,BBR）作為一種從藥用植物（如黃連）中提取的異喹啉生物堿,是臨床治療腸道感染性疾病的常用藥物。近年來發(fā)現(xiàn)黃連素還可降血脂和延緩CKD的進展。然而黃連素是否可以減輕高脂誘導(dǎo)的足細胞損傷有待于進一步研究。目的本文擬研究黃連素對棕櫚酸（Palmitic acid,PA）誘導(dǎo)的足細胞凋亡的影響,并進一步闡明其機制是否與其減輕足細胞內(nèi)活性氧（Reactive oxygen species,ROS）誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān),為黃連素在防治脂質(zhì)腎毒性提供基礎(chǔ)證據(jù)。方法分別用PA、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-苯基丁酸（4-phenyl butyric acid,4-PBA）、BBR及抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）作用于小鼠永生性足細胞,用CCK-8試劑盒（Cell Counting Kit 8）檢測足細胞... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

黃連素改善棕櫚酸誘導(dǎo)的足細胞死亡率和凋亡Fig3.1BerberinealleviatedPA-inducedpodocytesdeathandapoptosis（A）PA(150μmol/L)和不同濃度黃連素刺激足細胞24h，CCK-8檢測細胞死亡率，n=3,P<0.05vs.Controlgroup,#P<0.05vs.PAgroup,ΔP<0.05vs.BBRgroup.&P<0.05vs.

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文17的蛋白質(zhì)，從而調(diào)節(jié)BIP的轉(zhuǎn)錄水平，增強內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能[21,22]。為了探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否在PA誘導(dǎo)的足細胞凋亡中發(fā)揮作用，我們通過Westernblot檢測BIP的表達，我們發(fā)現(xiàn)，PA可呈濃度依賴性引起B(yǎng)IP的表達升高(圖2A-2B)，各不同劑量組兩兩比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。通過細胞免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，PA組中BIP的熒光強度增加。(圖2H-2I)。此外，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白PERK、ATF4、CHOP、IRE1α和ATF6在PA刺激下表達增加(圖2A,2C-2G)，各不同劑量組兩兩比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。表明PA可通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的三條信號通路引起細胞凋亡。圖3.2PA可引起足細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激Fig3.2PAinducedendoplasmicreticulumstressinpodocytes(A)用不同濃度的（PA0μmol/L、50μmol/L、150μmol/L、300μmol/L）刺激足細胞24h，Westernblot檢測BIP、PERK、ATF4、CHOP、ATF6和IRE1α的表達。(B-G)對圖2A中的

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文19圖3.3內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與了PA誘導(dǎo)的足細胞凋亡Fig3.3ERstresswasinvolvedinPA-inducedapoptosisinpodocytes.（A）PA(150μmol/L)或4-PBA(10μmol/L)作用足細胞24h,Westernblot檢測BIP,PERK,ATF4,CHOP,ATF6,IRE1α和Caspase12的表達。(B-H)對圖3A中的BIP(B),PERK(C),ATF4(D),CHOP(E),ATF6(F),IRE1α(G),Caspase12(H)進行量化分析，n=3，P<0.05vs.Controlgroup，#P<0.05vs.PAgroup，ΔP<0.05vs.4-PBAgroup。(I)PA(150μmol/L)或4-PBA(10μmol/L)刺激足細胞24h,細胞免疫熒光檢測BIP的表達(400×)。(J)對圖3I進行量化分析，n=3.，P<0.05


本文編號：3230138