桑黃,是一種珍貴藥用多孔菌具有2000多年悠久歷史。在歷代草本記載中,對于癖飲、血崩、脾虛和泄揮等疾病具有很好的治療效果,但不同國家和地區(qū)對桑黃的了解認(rèn)識不同。因而有諸多學(xué)者致力于桑黃的正本清源,本課題組經(jīng)過前期大量研究,基于科學(xué)文獻(xiàn)和研究認(rèn)為最切合典籍記載的中藥桑黃為粗毛纖孔菌（Inonotus hispidus）。為更全面研究鑒別寄生于不同樹種的粗毛纖孔菌,提供質(zhì)量參考與生物活性研究依據(jù)。本論文對寄生于水曲柳的粗毛纖孔菌子實(shí)體分離提取純化,獲得4種多酚類單體化合物,并運(yùn)用Griess、ELISA、RT-PCR、Western-blot等檢測方法圍繞其主要成分phelligridin D開展抗炎活性實(shí)驗(yàn);通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法,利用pubchem、Swiss Target Prediction等數(shù)據(jù)庫進(jìn)一步預(yù)測篩選出四種化合物成分及其發(fā)揮作用的相關(guān)靶點(diǎn),挖掘炎癥已知相關(guān)靶點(diǎn),通過生物學(xué)信息注釋數(shù)據(jù)庫（DAVID）對靶點(diǎn)基因本體（GO）生物過程、細(xì)胞組成、分子功能以及KEGG中代謝通路進(jìn)行分析,采用分子對接技術(shù)虛擬篩選四個(gè)化合物對抗炎的物質(zhì)基礎(chǔ);以東北地區(qū)取樣本量較多的寄生于水曲柳的粗毛纖... 

【文章來源】：長春工業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

粗毛纖孔菌提取萃取流程圖

第2章寄生于水曲柳的粗毛纖孔菌酚酸類成分及抗炎活性研究9減壓下干燥。將該組分用二氯甲烷：甲醇（2:1）充分溶解后，在12000轉(zhuǎn)/分鐘條件下，離心10分鐘，取上層清液。選用SephadexLH20色譜柱，以二氯甲烷：甲醇（2:1）的溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，將流速調(diào)節(jié)為0.8mL/min，分離得到3個(gè)流出部分A（0~100分鐘）、B（100~200分鐘）、C（200~300分鐘）。合并B、C兩處流出部分，經(jīng)減壓干燥處理用適量甲醇溶解，在甲醇：0.1%甲酸水（55:45）為流動相，檢測波長為254nm的色譜條件下，用島津ShimadzuLC-10A分析型高效液相色譜儀對化合物出峰對比驗(yàn)證。最后，通過島津ShimadzuLC-20AP制備型高效液相色譜儀不斷分離純化，最終獲得得到四個(gè)單體化合物I、II、III、IV。流程圖見圖2.2。圖2.2粗毛纖孔菌乙酸乙酯層分離流程圖Fig.2.2Inonotushispidus"sethylacetatelayerseparationflowchart2.1.4.3高效液相色譜法對流出部分的跟蹤檢測采用NanologicaSVEAC18色譜柱（250×4.6mm，5μm）色譜柱，以0.1%甲酸水溶液（A）-甲醇（B）為流動相，流速1mL·min-1；檢測波長：400nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量:10μL[41]。經(jīng)過初步純化處理后A、B兩個(gè)流出部分進(jìn)行檢測可得。

第2章寄生于水曲柳的粗毛纖孔菌酚酸類成分及抗炎活性研究10圖2.3流份A初步純化后的高效液相色譜圖Figure1.3TheHPLCfigureoffractionApreliminarypurification圖2.4流份B初步純化后的高效液相色譜圖Figure1.4TheHPLCfigureoffractionBpreliminarypurification分別將流份A、流份B合并，將合并液減壓干燥后用少量甲醇溶解，在上述色譜條件下，用ShimadzuLC-20AP制備型島津高效液相色譜儀進(jìn)行分離，分別收集峰1、峰2、峰3、峰4的峰尖，反復(fù)進(jìn)行上述步驟，直至純度合格得到4個(gè)單體化合物。且以出峰時(shí)間為順序，分別將純度合格的峰1、峰2、峰3、峰4處物質(zhì)命名為化合物Ⅰ，化合物Ⅱ，化合物Ⅲ和化合物Ⅳ。


本文編號：3221740