目的:觀察金釵石斛生物堿（Dendrobium nobile Lindl alkaloids,DNLA）對(duì)APP/PS1模式小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響,并探討其機(jī)制是否與芳香化酶及雌激素/ERK信號(hào)通路有關(guān)。方法:采用雌、雄鼠同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將7月齡APP/PS1模式小鼠隨機(jī)各分為3個(gè)組（10只/組）:APP/PS1組、APP/PS1+DNLA 10 mg/kg組、APP/PS1+DNLA 20 mg/kg組;同性別野生型（Wild-type,WT）對(duì)照組:共20只,雌雄各半（10只/組）。給藥組小鼠每日灌胃給藥1次,連續(xù)給藥4個(gè)月,對(duì)照組小鼠給予同等體積的溶媒（含1%吐溫80的雙蒸水）。給藥結(jié)束前,采用筑巢實(shí)驗(yàn)檢測小鼠日�；顒�(dòng)及社會(huì)執(zhí)行能力;Y迷宮實(shí)驗(yàn)檢測小鼠短暫的學(xué)習(xí)記憶能力;使用硫黃素-S染色觀察小鼠皮質(zhì)中老年斑的情況;Western blot測定雌性及雄性小鼠皮質(zhì)中芳香化酶（Aromatase）,雌激素受體相關(guān)蛋白（ER1、ER2、GPR30）的表達(dá),ERK/pERK蛋白的表達(dá);APP非淀粉樣途徑中ADAM10、APP、Aβ_1-42蛋白水平;采用ELISA對(duì)血清... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DNLA對(duì)APP/PS1模式小鼠筑巢行為能力的影響

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文魏勝焦162.1.2Y迷宮實(shí)驗(yàn)Y迷宮是小鼠一種自發(fā)交替行為，自發(fā)交替行為的正確率可以反映小鼠短暫的學(xué)習(xí)記憶能力。如圖2所示，雌性APP/PS1模式小鼠的自發(fā)探索交替行為正確率明顯低于同性別WT小鼠（P<0.05），給予DNLA后小鼠的自發(fā)探索交替行為正確率后明顯增加（P<0.05）；雄性APP/PS1模式小鼠的自發(fā)探索交替行為正確率明顯低于同性別WT小鼠（P<0.05），給予DNLA后，給藥20mg/kg組小鼠的自發(fā)探索交替行為正確率明顯增加（P<0.05）。Y迷宮結(jié)果提示，DNLA在雌性及雄性小鼠中均可改善APP/PS1小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。圖2DNLA對(duì)APP/PS1模式小鼠Y迷宮實(shí)驗(yàn)的影響。（A）雌性小鼠Y迷宮自發(fā)探索交替行為；（B）雄性小鼠Y迷宮自發(fā)探索交替行為。（x±SEM，n=10），與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與APP/PS1組相比較，#P<0.05。Fig.2EffectofDNLAonYmazeinAPP/PS1mice.(A)ThecorrectrateofYmazetestspontaneousalternationinfemale;(B)ThecorrectrateofYmazetestspontaneousalternationinmale.(x±SEM,n=10),*P<0.05vsWT+Vehicle;#P<0.05vsAPP/PS1.2.2DNLA對(duì)APP/PS1模式小鼠皮質(zhì)中Aβ沉積的影響Aβ在AD模式小鼠大腦皮質(zhì)和海馬中沉積形成的老年斑是AD的病理特征之一。為了探索DNLA對(duì)APP/PS1轉(zhuǎn)基因模式小鼠大腦內(nèi)老年斑的變化情況，本研究采用硫黃素-S染色法來觀察AD小鼠腦內(nèi)老年斑的變化。經(jīng)硫黃素-S熒光染色結(jié)果可知11月齡的野生型小鼠皮質(zhì)組織中未見老年斑的沉積，而同月齡同性別的APP/PS1對(duì)照組小鼠皮質(zhì)組織形成大量老年斑，且部分聚集成團(tuán)，給予DNLA后，APP/PS1給藥組小鼠皮質(zhì)中老年斑數(shù)量明顯減少，且多為小體積，老年斑數(shù)量(P<0.05)明顯被DNLA抑制。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文魏勝焦17圖3DNLA對(duì)APP/PS1模式小鼠皮質(zhì)老年斑的影響。（A）雌性各組小鼠皮質(zhì)硫黃素-S染色圖片（標(biāo)尺=500μm）；（B）雄性各組小鼠皮質(zhì)硫黃素-S染色圖片（標(biāo)尺=500μm）（C）雌性小鼠硫黃素-S染色數(shù)量統(tǒng)計(jì)圖；（D）雄性小鼠硫黃素-S染色數(shù)量統(tǒng)計(jì)圖。（x±SEM，n=3），與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與APP/PS1組相比較，#P<0.05。Fig.3EffectsofDNLAonsenileplaquesformationinthecortexofmice.ThecoronalfrozensectionsofbrainswerestainedwiththioflavineS.(A)ImagesofthioflavineS-stainedsenileplaquesinthecortexofAPP/PS1miceinfemale(scalebar=500μm);(B)ImagesofthioflavineS-stainedsenileplaquesinthecortexofAPP/PS1miceinmale(scalebar=500μm);(C)StatisticsofthioflavineS-stainedamyloidplaquesnumberinthecortexofAPP/PS1miceinfemale;(D)StatisticsofthioflavineS-stainedamyloidplaquesnumberinthecortexofAPP/PS1miceinmale.(x±SEM,n=3);*P<0.05vsWT+Vehicle;#P<0.05vsAPP/PS1.2.3DNLA對(duì)APP/PS1模式小鼠ADAM10、APP、Aβ1-42蛋白的影響Aβ是腦內(nèi)的正常產(chǎn)物，生理量的Aβ具有抑制神經(jīng)元過度活化的作用，是保證神經(jīng)元正常和持續(xù)性功能所必需的。APP基因的突變會(huì)引起腦內(nèi)Aβ異常聚集，Aβ異常聚集形成的老年斑是AD主要的病理特征之一。我們采用Westernblot方法檢測了雌、雄性小鼠皮質(zhì)中ADAM10、APP及Aβ1-42蛋白。如圖4顯示：APP/PS1組較WT組雌、雄性小鼠中ADAM10蛋白水平表達(dá)明顯降低（P<0.05），APP及Aβ1-42蛋白水平表達(dá)明顯升高（P<0.05）。給予DNLA后升高了ADAM10蛋白水平表達(dá)（P<0.05），降低了APP、Aβ1-42蛋白水平表達(dá)（P<0.05）。結(jié)果提示DNLA可上調(diào)小鼠皮質(zhì)中ADAM10蛋白水平表達(dá)，并可以抑

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蛇床子素對(duì)APP/PS1小鼠學(xué)習(xí)記憶功能及腦內(nèi)Aβ產(chǎn)生的影響[J]. 李菲,劉義偉,李祖高,張洋洋,石京山.  遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2019(04)
[2]檢測淀粉樣沉淀蛋白的三種染色方法比較:抗體染色、Gallyas銀染和硫磺素S染色（英文）[J]. 施新澤,魏軒,沙龍澤,許琪.  Chinese Medical Sciences Journal. 2018(03)
[3]以β-淀粉樣蛋白為靶點(diǎn)的阿爾茨海默病治療途徑[J]. 樊星,陳紅,高雪峰,趙鵬,董貴成.  中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志. 2016(36)
[4]阿爾茨海默病相關(guān)基因研究進(jìn)展[J]. 黃少軒,婁季宇,白宏英.  中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志. 2016(04)
[5]石斛藥理研究進(jìn)展[J]. 蔣元斌.  閩東農(nóng)業(yè)科技. 2015(01)
[6]α-雌激素受體介導(dǎo)的膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[J]. 王麟,魏敏杰,金萬寶.  生命的化學(xué). 2006(06)

博士論文
[1]金釵石斛的化學(xué)成分與生物活性研究[D]. 張雪.沈陽藥科大學(xué) 2005

碩士論文
[1]淫羊藿苷通過改善腦糖代謝功能紊亂對(duì)APP/PS1/Tau三轉(zhuǎn)基因AD模式小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用[D]. 張瑩.遵義醫(yī)科大學(xué) 2019
[2]金釵石斛總生物堿對(duì)SAMP8小鼠腦衰老的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D]. 呂凌麗.遵義醫(yī)學(xué)院 2018
[3]金釵石斛總生物堿對(duì)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶影響及其相關(guān)因素研究[D]. 楊小惠.遵義醫(yī)學(xué)院 2017
[4]金釵石斛總生物堿對(duì)阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因模型Tg2576小鼠的影響[D]. 姚寅.遵義醫(yī)學(xué)院 2013



本文編號(hào)：3069486